X'inhu test immuno-istokimiku?

Navigazzjoni Quick

• X'inhi l-immunoistokimika?
  • 1. Definizzjoni
  • 2. Motivazzjoni
  • 3. Karatteristiċi
  • 4. Klassifikazzjoni
  • 5. Funzjoni
• Għal xiex tintuża l-immunoistokimika?
• Protokoll tal-Immunoistokimitrija
  • 1. Metodu ta 'immunofluworexxenza
  • 2. Metodu ta 'tikkettar tal-immunoenzima
  • 3. Teknoloġija immuni tad-deheb kollojdali
• konklużjoni

X'inhi l-immunoistokimika?

1. definizzjoni

Immunohistokimika (ihc), magħruf ukoll bħala immunokitokimika, tirreferi għal teknoloġija ġdida li d-determinazzjoni kwalitattiva, lokalizzata u kwantitattiva tal-korrispondenti antiġeni isir permezz ta 'reazzjoni antiġen-antikorp u reazzjoni istokimika tal-kulur fis-sit taċ-ċelloli tat-tessut minn speċifiku antikorpi ittikkettat b'reaġent kromoġeniku.

Jgħaqqad b'mod għaqli l-ispeċifiċità tar-rispons immuni u l-viżibilità tal-istokimika. Bl-għajnuna tal-immaġni u l-ingrandiment ta 'mikroskopji (inklużi mikroskopji ta' fluworexxenza u mikroskopji elettroniċi), jista 'jsib diversi sustanzi antiġeniċi (bħal proteina, polypeptide, enzimi, ormoni, patoġeni u riċetturi, eċċ.). Immunohistokimika teknoloġija żviluppat malajr f'dawn l-aħħar snin. Fis-snin ħamsin, kienet limitata għat-teknoloġija tal-immunofluworexxenza. U minn dakinhar ġiet żviluppata gradwalment teknoloġija immunoenzimika sensittiva ħafna u aktar prattika.

2. Motivazzjoni

L-irbit bejn antikorp u l - antiġen għandu grad għoli ta 'speċifiċità, u immunoistokimika jisfrutta dan il-prinċipju. L-ewwelnett, ċerta sustanza kimika fit-tessut jew fiċ-ċellola hija estratta u użata bħala antiġen jew hapten. Wara li tlaqqam l-annimal, jinkiseb antikorp speċifiku, u allura l-antikorp jintuża biex jinstab l-istess sustanza antiġenika fit-tessut jew fiċ-ċellola. Minħabba li l-kumpless ta 'antiġen u antikorp huwa bla kulur, huwa meħtieġ li jintwera s-sit ta' rbit ta 'antiġen u antikorp permezz ta' istokimika biex tinkiseb riċerka kwalitattiva, lokalizzata jew kwantitattiva fuq antiġeni mhux magħrufa fit-tessuti jew fiċ-ċelloli.

3. karatteristiċi

A. Speċifiċità qawwija

Il-prinċipju bażiku tal-immunoloġija jiddetermina li l-irbit bejn l-antiġen u l-antikorp huwa speċifiku ħafna. Għalhekk, immunoistokimika teoretikament hija wirja speċifika ta ' antiġeni fiċ-ċelloli tat-tessut. Pereżempju, il-keratina turi komponenti epiteljali, u LCA turi limfoċiti. ingredjent. Huwa biss meta jkun hemm cross-antiġens fiċ-ċelloli tat-tessut, li jseħħu reazzjonijiet inkroċjati.

B. Sensittività għolja

Fl - istadju inizjali ta 'l - applikazzjoni ta' immunoistokimika, minħabba limitazzjonijiet tekniċi, il-metodu dirett, il-metodu indirett u teknoloġiji oħra inqas sensittivi biss kienu disponibbli. Dak iż-żmien, l-antikorp seta 'jiġi dilwit biss għal diversi drabi jew għexieren ta' drabi; issa l-miġja tal-metodu ABC jew SP tippermetti li l-antikorpi jiġu dilwiti eluf, għexieren ta 'eluf, jew saħansitra mijiet ta' miljuni ta 'drabi, u l-antikorp xorta jista' jingħaqad ma 'antiġeni fiċ-ċelloli tat-tessuti. Din ir-reazzjoni sensittiva ħafna ta 'antikorp-antiġen tagħmel il-metodi immunoistokimiċi aktar u aktar konvenjenti għal dijanjosi patoloġika ta' rutina.

C. Pożizzjonament preċiż, kombinazzjoni ta 'forma u funzjoni

Din it-teknoloġija tista 'ssib b'mod preċiż antiġeni fit-tessuti u ċ-ċelloli permezz ta' reazzjoni antiġen-antikorp u reazzjoni tal-kulur, sabiex tkun differenti antiġeni jistgħu jiġu pożizzjonati u osservati fl-istess tessut jew ċellula fl-istess ħin. Allura l-kombinazzjoni ta 'morfoloġija u funzjoni tista' tiġi studjata, li hija sinifikanti ħafna biex titwettaq riċerka fil-fond fil-qasam tal-patoloġija.

4. Klassifikazzjoni

• Skond it-tipi ta 'sustanzi ta' tikkettar, bħal żebgħa fluworexxenti, radjoisotopi, enżimi (prinċipalment horseradish peroxidase u alkaline phosphatase), ferritin, deheb kollojdali, eċċ., Jista 'jinqasam fi immunofluworexxenza, radjoimmunoanaliżi, immunoenzima Metodu ta 'Tikkettar u metodu immuni ta' deheb u fidda.
• Skond il-passi taż-żebgħa, jista 'jinqasam f'metodu dirett (imsejjaħ ukoll metodu ta' pass wieħed) u metodu indirett (metodu f'żewġ stadji, tliet stadji jew b'ħafna stadji). Meta mqabbel mal-metodu dirett, is-sensittività tal-metodu indirett titjieb ħafna.
• Skond il-metodu ta 'rbit, jista' jinqasam f 'rbit ta' antiġen-antikorp, bħall-metodu peroxidase-antiperoxidase (PAP); konnessjoni ta 'affinità, bħall-metodu kumpless ta' avidin-biotin-peroxidase (ABC), metodu ta 'konnessjoni ta' avidin-peroxidase tal-Mould tal-katina (SP), li fosthom il-metodu SP huwa metodu użat aktar komunement; konnessjoni tal-polimeru, bħal metodu f'żewġ stadji lest għall-użu, li huwa adattat b'mod speċjali għal kontenut endoġenu għoli ta 'bijotina Sejbien ta' antiġen tat-tessut.

5. funzjoni

A. kampjun

L-esperimenti jużaw prinċipalment kampjuni tat-tessuti u kampjuni taċ-ċelloli. L-ewwel jinkludi inkorporazzjoni tal-paraffin sezzjonijiet (sezzjonijiet patoloġiċi u laqx tat-tessut) u sezzjonijiet iffriżati, u dan ta 'l-aħħar jinkludi stampi tat-tessut, slides taċ-ċelloli u smears taċ-ċelloli.

Fost dawn, is-sezzjoni tal-paraffin hija l-iktar metodu użat u l-iktar bażiku biex isiru kampjuni tat-tessut. Huwa ppreservat tajjeb għall-morfoloġija tat-tessut u jista 'jintuża għal sezzjoni ta' serje, li twassal għal diversi osservazzjonijiet ta 'kontroll tat-tbajja'; jista 'wkoll jiġi arkivjat għal żmien twil għal riċerka retrospettiva; Se jkollu ċertu impatt fuq l - espożizzjoni għall - antiġen, iżda irkupru ta 'antiġeni jista 'jsir, li huwa l - metodu preferut ta' preparazzjoni ta 'kampjun tat - tessut fi immunoistokimika.

B. antikorp

L-antikorpi użati komunement f'esperimenti immunoistokimiċi huma antikorp monoklonali u poliklonali antikorp. Antikorpi monoklonali huma antikorpi mnaddfa minn klonu tal-limfoċiti B u huma ppreparati billi jiġu immunizzati l-annimali bit-teknoloġija ibrida tal-fużjoni taċ-ċelloli. Antikorp poliklonali huwa serum immuni miksub minn demm tal-annimali wara li l-antiġenu ppurifikat jiġi mlaqqam direttament. Huwa taħlita ta 'antikorpi prodotti minn kloni ta' limfoċiti B multipli.

C. Metodi ta 'żebgħa komuni

Skond il-markaturi differenti, huwa maqsum immunofluworexxenza metodu, metodu ta 'tikkettar immunoenzima, u metodu ta' affinità istokimika. Dan ta 'l-aħħar huwa metodu ta' skoperta bbażat fuq sustanza b'affinità għolja għal ċertu komponent tat-tessut. Dan il-metodu huwa aktar sensittiv u jiffaċilita l-lokalizzazzjoni ta 'antiġeni traċċa (antikorpi) fil-livell ċellulari jew subċellulari. Fosthom, il-metodu ta 'tbajja' biotin-avidin huwa l-iktar użat komunement.

Għal xiex tintuża l-immunoistokimika?

Tbajja immunoistokimiċi għandu rwol wiesa 'ħafna fir-riċerka bijomedika u jinvolvi ħafna oqsma ta' riċerka. Madankollu, immunoistokimika it-teknoloġija għandha wkoll il-limitazzjonijiet tagħha. Pereżempju, is-sustanza tat-test fiċ-ċelloli tat-tessut għandha tkun antiġenika, u hija meħtieġa ċerta konċentrazzjoni. Il-proteina immunoreattiva misjuba ma tistax tiġi ddeterminata li hija sintetizzata ġdida miċ-ċellola jew ittrasportata miċ-ċelloli.

Għalhekk, dawn il-karatteristiċi għandhom jiġu kkunsidrati bis-sħiħ fid-disinn sperimentali. Jekk l-esperiment jeħtieġ jipprova x'tip ta 'ċellula hija sintetizzata mill-proteina magħrufa, molekulari ibridizzazzjoni in situ teknoloġija hija preferuta. Sabiex tiggwida lill-prinċipjanti biex jużawhom immunoistokimika teknoloġija b'mod raġonevoli u b'ħila fid-disinn sperimentali, il-prinċipji bażiċi ta 'l-applikazzjoni tagħha huma deskritti fil-qosor kif ġej:

1. Iddetermina t-tip ta 'ċellula u l-morfoloġija. Xi proteini fiċ-ċelloli tat-tessut għandhom speċifiċità tat-tessut, bħal proteina aċiduża fibrillari gljali (GFAP) teżisti biss fl-astroċiti. In-Neurofilament (Neurofilament, NF) jeżisti biss fiċ-ċelloli tan-nervituri. Dawn il-proteini speċifiċi għat-tessut ġeneralment jissejħu proteini ttikkettjati (Proteiniliaker). It-tip ta 'ċellula tista' tiġi determinata mill-antikorp speċifiku tal-proteina ttikkettjata.
   
   Xi ċelloli (bħal ċelloli Langerhans u melanoċiti fl-epidermide) mhumiex faċli biex jiġu identifikati taħt mikroskopju ħafif. Billi twettaq tbajja immunoistokimika fuq proteini speċifiċi fiċ-ċitoplasma, il-kontorn ta 'ċelloli bħal dawn jista' jintwera b'mod ċar. Dan l-effett huwa partikolarment meħtieġ fir-riċerka tan-newroxjenza u l-klinikopatoloġija tat-tumur.
   
2. Identifika s-sors tal-prodotti taċ-ċelloli. Ara ċerti prodotti taċ-ċelloli bħala antiġeni, ipprepara antikorpi korrispondenti, u wettaq tbajja immunoistokimika fuq ċelloli tat-tessut biex tiddetermina s-sors tal-prodotti taċ-ċelloli. Pereżempju, ħafna mill-ormoni prodotti minn ċelloli endokrinali jistgħu jiġu identifikati permezz ta 'tekniki ta' tbajja 'immunoistokimiċi. Fuq il-bażi ta 'dan, il-funzjoni ta' tnixxija taċ-ċelloli u l-klassifikazzjoni ta 'tumuri endokrinali jistgħu jiġu studjati, u tumuri li jnixxu ormoni ektopiċi jistgħu jiġu skoperti biex jifhmu l-grad ta' divrenzjar taċ-ċelloli.
   
3. Iddetermina l-grad ta 'differenzazzjoni taċ-ċelloli. Ċelloli differenti tal-istess tip jesprimu proteini markaturi differenti, u l-grad ta 'divrenzjar taċ-ċelloli jista' jiġi determinat skont l-identifikazzjoni ta 'dawn il-proteini differenti. Pereżempju, il-proteina distintiva taċ-ċelloli newroepiteljali hija nestin, li tesprimi vimentin meta tiddistingwi f'ċelloli gljali radjali. Fil-fażi tan-newroġenesi, tesprimi Ⅲβ meta tiddistingwi fi newroblasti tubulin newrali (TUJl) u newrofilament (NF) meta n-newroblasti jiddifferenzjaw f newroni maturi.
   
4. Segwi l-qatta 'tal-fibra tan-nervituri u ż-żona ta' projezzjoni tagħha. Il-metodu immunoistokimiku ħafna drabi huwa kkombinat mal-metodu ta 'rintraċċar tat-trasport axoplasmiku biex jiġu studjati l-konnessjonijiet bejn in-newroni. Il-metodu ta 'rintraċċar tat-trasport axoplasmiku juża ċerti sustanzi li jistgħu jittieħdu minn truf tan-nervituri. Uża metodu istokimiku biex turi l-kontorn tan-newroni. Traċċaturi użati komunement jinkludu horseradish peroxidase u deheb fluworexxenti.
   
   Eż. L-għan huwa li tosserva l-projezzjoni ta 'fibri tan-nervituri minn nukleu fis-sistema nervuża periferali jew fis-sistema nervuża ċentrali. L-ewwelnett, it-traċċatur jiġi injettat fit-tarf tal-fibra tan-nervituri tal-annimal biex jippermetti lill-annimal jibqa 'ħaj għal perjodu ta' żmien. Il-materjal jittieħed mis-sit tal-projezzjoni tal-fibra nervuża mistennija, u t-traċċatur jinsab bil-metodu istokimiku, u allura l-metodu immunoistokimiku huwa implimentat biex jiddetermina n-natura tiegħu.
   
5. Applikazzjoni fil-patoloġija klinika. Bħall-identifikazzjoni tan-natura tal-leżjoni, l-iskoperta ta ’leżjonijiet żgħar, l-esplorazzjoni tal-oriġini jew il-fenotip differenzjat tat-tumur, id-determinazzjoni tal-istadju tat-tumur, il-gwida tat-trattament u l-pronjosi, l-għajnuna fid-dijanjosi u l-klassifikazzjoni tal-mard, u t-tfittxija għall-kawża tal-infezzjoni, eċċ.

Protokoll tal-Immunoistokimitrija

1. Metodu ta 'immunofluworexxenza

Hija l-iktar teknika immunoistokimika stabbilita kmieni. Juża l-prinċipju ta 'rbit speċifiku antiġen-antikorp. L-ewwel, l-antikorp magħruf huwa ttikkettjat bil-fluworexxina, li tintuża bħala sonda biex tiċċekkja l-antiġen korrispondenti fiċ-ċellola jew fit-tessut. Jekk tosservah taħt mikroskopju ta 'fluworexxenza, dan joħroġ fluworexxenza ta' ċertu wavelength meta l-fluworexxina fil-kumpless antiġen-antikorp tkun irradjata mid-dawl ta 'eċitazzjoni, dan. Imbagħad il-lokalizzazzjoni ta 'ċertu antiġen fit-tessut jista 'jiġi determinat, u tista' ssir analiżi kwantitattiva. Minħabba l-ispeċifiċità qawwija tagħha, sensittività għolja, ħeffa u sempliċità, it-teknoloġija tal-immunofluworexxenza tintuża ħafna fid-dijanjosi u l-ittestjar patoloġiċi kliniċi.

applikazzjoni

• Applikazzjoni f'mard awtoimmuni
• Identifikazzjoni rapida ta 'batterji u viruses
• Sejbien u riċerka ta 'parassiti

2. Metodu ta 'tikkettar immunoenzima

Il - metodu ta 'l - ittikkettar ta' l - immunoenzima huwa teknika żviluppata fis - sittinijiet segwita minn immunofluworexxenza. Il-prinċipju bażiku huwa li l-ewwel tuża antikorpi ttikkettati bl-enżimi biex jinteraġixxu ma 'tessuti jew ċelloli, u mbagħad żid sottostrati ta' enżimi biex jiġġeneraw prodotti jew partiċelli li ma jinħallux ikkuluriti b'ċerta densità ta 'elettroni.

Permezz ta 'mikroskopija tad-dawl jew elettronika, diversi tipi ta' uċuħ taċ-ċelloli u komponent antiġen fiċ-ċelloli huma soġġetti għal riċerka ta 'lokalizzazzjoni. It-teknoloġija tal-ittikkettar tal-immunoenzima hija l-iktar teknoloġija użata komunement. Il-vantaġġi ewlenin ta 'dan il-metodu meta mqabbla mat-teknoloġija tal-immunofluworexxenza huma: pożizzjonament preċiż, kuntrast tajjeb, preservazzjoni fit-tul ta' kampjuni mtebbgħin, u adattati għal studji ta 'mikroskopija ottika u elettronika.

Il-metodu tal-ittikkettar tal-immunoenzima żviluppa malajr ħafna, u ġew derivati ​​varjetà ta 'metodi ta' tikkettar. Bit-titjib kontinwu u l-innovazzjoni tal-metodu, l-ispeċifiċità u s-sensittività tiegħu tjiebu ħafna, aktar konvenjenti biex jintużaw. Il-metodu ABC, il-metodu SP fi tliet stadji, is-sistemi ta 'skoperta tal-metodu f'żewġ stadji lesti għall-użu huma wżati ħafna fid-dijanjosi patoloġika.

applikazzjoni

• Ittejjeb l-eżattezza tad-dijanjosi patoloġika
• Applikazzjoni klinika ta 'proteina onkoġene
• Evalwazzjoni tal-grad ta 'proliferazzjoni taċ-ċelloli tat-tumur
• Sejba ta 'mikrometastasi
• Sinifikat fl-istadji tat-tumur
• Gwida għat-trattament tat-tumuri
• Għin fid-dijanjosi ta ' mard immuni u mard infettiv

3. Teknoloġija immuni tad-deheb kollojdali

It-teknoloġija immuni tad-deheb kollojdali tuża partiċella speċjali tal-metall bħad-deheb kollojdali bħala markatur. Id-deheb kollojdali jirreferi għall-idrosol tad-deheb, li jista 'jassorbi proteini malajr u b'mod stabbli mingħajr ebda effett ovvju fuq l-attività bijoloġika ta' l- proteina. Għalhekk, bl-użu ta 'deheb kollojdali ttikkettjat antikorp primarju, antikorp sekondarju, jew molekuli oħra li jeħlu speċifikament magħhom immunoglobulini (bħal proteina stafilokokkali A) bħala sondi, jistgħu jillokalizzaw kwalitattivament, jew saħansitra jikkwantifikaw antiġeni fit-tessuti jew fiċ-ċelloli.

Peress li d-deheb kollojdali għandu partiċelli ta 'daqsijiet differenti u d-densità tal-elettroni tad-deheb kollojdali hija għolja, it-teknika tad-deheb immuno-kollojdali hija partikolarment adattata għal studji ta' lokalizzazzjoni ta 'tikketta waħda jew multi-tikketta tal-mikroskopija immunoelettronika. U minħabba l-kulur tad-deheb kollojdali minn aħmar ċar għal aħmar skur, huwa wkoll adattat għall-osservazzjoni tal-mikroskopju ħafif. Bħall-applikazzjoni ta 'immunogold imtejba bil-fidda u liġi tal-fidda hija iktar konvenjenti għall-osservazzjoni tal-mikroskopju tad-dawl.

konklużjoni

Minħabba l-karatteristiċi uniċi tiegħu stess, immunoistokimika it-teknoloġija saret teknika spiss magħżula mill-maġġoranza tar-riċerkaturi xjentifiċi fil-pożizzjonament taċ-ċelloli tat-tessuti, ir-riċerka kwalitattiva u kwantitattiva. Għalhekk, bl-aġġornament tal-għodod tar-riċerka xjentifika, ix-xjentisti jeħtieġ li jkollhom fehim aktar estensiv u fil-fond ta ' immunoistokimika, ittejjeb id-disinn ta 'rotot tekniċi, u tippromwovi l-iżvilupp ulterjuri ta' immunoistokimika teknoloġija.

Trid titgħallem aktar dwar antiġeni u antikorpi? Aqra dwar Stand FC informazzjoni.

Referenzi

• NCBI: Applikazzjonijiet tal-immunoistokimika
• Istitut Nazzjonali tal-Kanċer: Immunohistokimika