X'inhi d-differenza bejn l-antikorpi monoklonali u poliklonali?

Navigazzjoni Quick

• X'inhuma l-antikorpi monoklonali?
  • 1. Definizzjoni
  • 2. Storja
  • 3. Produzzjoni ta 'Antikorpi Monoklonali
  • 4. Metodu tal-Klonazzjoni
  • 5. Applikazzjoni
• X'inhu antikorp poliklonali?
  • 1. Xi jfisser antikorp poliklonali?
  • 2. istruttura
  • 3. Klassifikazzjoni
  • 4. Applikazzjoni
• Antikorpi Monoklonali vs Poliklonali
  • 1. Kunċett
  • 2. Produzzjoni
  • 3. Żvantaġġi u Vantaġġi
  • 4. Differenzi oħra
• konklużjoni

X'inhuma l-antikorpi monoklonali?

1. definizzjoni

Hemm differenza kbira bejn antikorpi monoklonali u poliklonali. Antikorpi monoklonali huma uniformi ħafna antikorpi li huma prodotti minn klonu ta 'ċellula B waħda u jimmiraw biss epitopu speċifiku. It-teknoloġija tal-antikorp ta 'Hybridoma hija bbażata fuq it-teknoloġija tal-fużjoni taċ-ċelloli, li tgħaqqad ċelloli B sensitizzati u ċelloli tal-majeloma b'kapaċità ta' riproduzzjoni immortali f'tumur ta 'ibridi taċ-ċelluli B.

Ċellula waħda ta ’ibridoma b’din il-karatteristika tintuża biex tikkoltiva popolazzjoni ta’ ċelloli biex tipprepara antikorp speċifiku kontra epitopju, jiġifieri, antikorp monoklonali.

2. storja

L - iżvilupp ta ' antikorpi monoklonali għadda minn erba 'stadji, jiġifieri:
Antikorpi monoklonali murini, antikorp kimeriku, antikorp monoklonali umanizzat u antikorpi monoklonali kompletament umani.

Sħiħ uman antikorpi monoklonali: Ir-reġjun varjabbli u r-reġjun kostanti ta 'l-antikorp huma ta' oriġini umana, u jeliminaw l-immunoġeniċità u l-effetti sekondarji tossiċi.

It-teknoloġiji relatati għall-preparazzjoni ta 'antikorpi kompletament umani jinkludu prinċipalment:
Teknoloġija tal-ibridoma umana, teknoloġija tal-limfoċiti B tat-trasformazzjoni EBV, teknoloġija tal-wiri tal-fagi, teknoloġija tal-preparazzjoni tal-antikorpi tal-ġrieden transġeniċi u teknoloġija tal-preparazzjoni tal-antikorpi taċ-ċellula B waħda.

Umanizzat u kompletament antikorpi umanizzati drogi ppreparati minn antikorpi umanizzati u kompletament umanizzati jegħlbu diversi nuqqasijiet ta 'antikorpi derivati ​​mill-annimali u antikorpi kimeriċi minħabba l-affinità għolja tagħhom, speċifiċità għolja, u effetti tossiċi u sekondarji baxxi. Saret xejra inevitabbli fl-iżvilupp ta ’mediċini ta’ antikorpi terapewtiċi.

3. Produzzjoni ta 'Antikorpi Monoklonali

1. Immunizza l-annimali
   L-immunizzazzjoni tal-annimali hija l-proċess tal-immunizzazzjoni tal-ġrieden bl-antiġen fil-mira biex il-ġrieden jipproduċu limfoċiti B sensitizzati. Ġeneralment, ġrieden femminili BALB / c ta 'età ta' 6-8 ġimgħat jintgħażlu u jiġu injettati skond il-protokoll ta 'immunizzazzjoni stabbilit minn qabel. L-antiġen jidħol fl-organi immuni periferali permezz taċ-ċirkolazzjoni tad-demm jew ċirkolazzjoni limfatika, jistimula l-kloni tal-limfoċiti B korrispondenti, jattiva, jipprolifera, u jiddifferenzja f'limfoċiti B sensitizzati.
   
2. Fużjoni taċ-Ċellula
   Il-ġrieden jinqatlu bid-dijossidu tal-karbonju, u l-milsa tinħareġ b'mod asettiku. Imbagħad għafas u ertjah f'dixx Petri biex tagħmel sospensjoni taċ-ċellula tal-milsa. Iċ-ċelloli tal-majeloma syngeneic ippreparati u ċ-ċelloli tal-milsa tal-ġurdien jitħalltu f'ċertu proporzjon, u jżidu l-promotur tal-fużjoni polyethylene glycol. Taħt ir-rwol tal-polyethylene glycol, diversi limfoċiti jistgħu jingħaqdu maċ-ċelloli tal-majeloma biex jiffurmaw ċelloli tal-ibridoma.
   
3. Kultivazzjoni selettiva
   L-għan tal-kultura selettiva huwa li jiġu skrinjati ċelloli ta 'ibridoma mdewba, u ġeneralment jintuża mezz selettiv HAT. Fil-medju HAT, iċ-ċelloli tal-majeloma mhux imdewba jmutu minħabba nuqqas ta 'hypoxanthine-guanine-phosphoribosyltransferase u passaġġ ta' salvataġġ mhux disponibbli biex jissintetizza d-DNA.
   
   Għalkemm limfoċiti mhux magħquda għandhom hypoxanthine-guanine-phosphoribosyltransferase, ma jistgħux jgħixu għal żmien twil in vitro.
   
   Iċ-ċelloli tal-ibridoma mdewba biss jistgħu jgħixu u jipproliferaw f'medja HAT minħabba li kisbu hypoxanthine-guanine-phosphoribosyltransferase miċ-ċelloli tal-milsa u l-abbiltà ta 'proliferazzjoni bla waqfien miċ-ċelloli tal-majeloma.
   
4. Skrinjar u klonazzjoni ta 'kloni pożittivi għal ibridoma
   Ftit biss miċ-ċelloli tal-ibridoma mkabbra fil-medja HAT huma ċelloli li jnixxu antikorpi monoklonali speċifiċi predeterminati. Għalhekk, l-iskrining u l-klonazzjoni huma meħtieġa. Il-metodu ta 'dilwizzjoni li tillimita ġeneralment jintuża għal kultura klonali ta' ċelloli ta 'ibridoma. Bl-użu ta ’metodi immunoloġiċi sensittivi, rapidi u speċifiċi, iċ-ċelloli ta’ hybridoma pożittivi li jistgħu jipproduċu l-antikorpi monoklonali meħtieġa jiġu skrinjati u kklonati u estiżi. Wara identifikazzjoni komprensiva tal - tip ta 'immunoglobulina, subklassi, speċifiċità, affinità, epitopu ta 'l-antiġen rikonoxxut u l-piż molekulari tiegħu ta' l-antikorp monoklonali mnixxi minnu, għandu jkun iffriżat fil-ħin.
   
5. Produzzjoni tal-massa ta 'antikorpi monoklonali
   Il-preparazzjoni fuq skala kbira ta ' antikorpi monoklonali prinċipalment tadotta metodi ta 'induzzjoni in vivo ta' annimali u metodi ta 'kultura in vitro.

4. Metodu tal-Klonazzjoni

Il-bjar pożittivi li ġew ittestjati għall-antikorpi jistgħu jiġu kkultivati ​​u kklonati biex jinkisbu antikorpi monoklonali mnixxija mill-frieħ ta 'ċellola waħda. Ġeneralment, iktar ma jkun kmieni l-ħin tal-klonazzjoni, aħjar. Minħabba li matul dan il-perjodu, diversi ċelloli ta 'ibridoma jikbru b'mod vigoruż fl-istess ħin, jikkompetu għan-nutrizzjoni u l-ispazju, u ċ-ċelloli li jipproduċu l-antikorpi speċifikati jistgħu jiġu mgħaddsa u eliminati.

Madankollu, il-ħin tal-klonazzjoni m'għandux ikun kmieni wisq, inkella l-karatteristiċi taċ-ċelloli mhumiex instabbli, u n-numru ta 'ċelloli huwa żgħir u faċli biex titlef. Iċ-ċelloli ta 'ibridoma pożittivi kklonati, wara perjodu ta' kultura, jitilfu wkoll il-ħila li jipproduċu antikorpi minħabba mutazzjonijiet taċ-ċelloli jew telf ta 'kromożomi speċifiċi, u għalhekk jeħtieġ li jiġu kklonati darba wara l-oħra. In - numru ta 'klonazzjoni huwa ddeterminat mill - kapaċità ta' tnixxija u l - immunità tal - antiġeni. Ġeneralment, in-numru ta 'kloni ta' antiġen immuni qawwi jista 'jkun inqas, iżda mill-inqas 3 sa 5 kloni jistgħu jagħmluha stabbli. Hemm ħafna metodi ta 'klonazzjoni, inkluż metodu ta' dilwizzjoni li tillimita, metodu ta 'mikromanipulazzjoni, metodu ta' pjanċa ta 'agar artab u metodu ta' separazzjoni ta 'attivazzjoni ta' fluworexxenza.

5. applikazzjoni

Mill-miġja ta ' antikorpi monoklonali, ġew applikati f'ħafna oqsma tal-mediċina minħabba l-karatteristiċi uniċi tagħhom.

1. Reaġenti dijanjostiċi tal-mediċina tal-laboratorju
   Bħala reaġent dijanjostiku fil-laboratorji tal-mediċina tal-laboratorju, antikorpi monoklonali jintużaw b'mod wiesa 'f'teknoloġiji bħal analiżi ta' immunosorbenti marbuta ma 'enżimi, analiżi ta' radjoimmuno, immunoistokimika u ċitometrija tal-fluss minħabba l-ispeċifiċità qawwija tagħhom, purità għolja, u uniformità tajba. U l-applikazzjoni ta ' antikorpi monoklonali ippromwova bil-kbir l-iżvilupp ta 'kits kummerċjali.
   
   Kitts kummerċjali magħmula minn antikorpi monoklonali jintużaw ħafna fi:
   1. Sejbien ta 'mikroorganiżmu patoġeniku antiġeni u antikorpi;
   2. Sejbien ta 'antiġeni tat-tumur;
   3. Sejbien ta 'ċelloli immuni u s-sottogruppi tagħhom;
   4. Determinazzjoni tal-ormoni;
   5. Determinazzjoni taċ-ċitokini.
      
      Ir-rikonoxximent ta 'antiġeni minn antikorpi monoklonali huwa differenti ħafna minn dak ta' antikorpi poliklonali. Kitts differenti jużaw antikorpi monoklonali differenti u għandhom siti ta 'rikonoxximent ta' antiġeni differenti, li jwasslu għal ċerti differenzi fir-riżultati tat-test. Għalhekk, il-kwistjoni tal-istandardizzazzjoni teħtieġ aktar studju.
      
2. Purifikazzjoni tal-proteina
   Antikorpi monoklonali huma ligands importanti fil-kromatografija ta 'affinità. L-antikorp monoklonali huwa assorbit fuq matriċi ta 'fażi solida inerta (bħal Spehrose 2B, 4B, 6B, eċċ.) U ppreparat f'kolonna kromatografika. Meta l-kampjun jgħaddi mill-kolonna kromatografika, l-antiġen li għandu jiġi separat jista 'jingħaqad speċifikament ma' l-antikorp monoklonali tal-fażi solida, u l-komponenti li jifdal ma jistgħux jingħaqdu miegħu. Wara li l-kolonna kromatografika tkun ġiet eluwita għal kollox, il-qawwa jonika jew il-pH tal-elużjoni tinbidel, l-antiġen li għandu jiġi sseparat jiġi dissoċjat mill-antikorp, u l-antiġenu li għandu jiġi ppurifikat jista 'jinkiseb billi jinġabar l-eluwa.
   
3. Terapija orjentata lejn it-tumuri u teknoloġija tar-radjuimmunoimaging
   L-antikorp monoklonali dirett kontra ċertu antiġen tat-tumur huwa konness ma 'droga ta' kimoterapija jew sustanza ta 'radjoterapija, u l-effett immirat ta' antikorp monoklonali jintuża biex iġorr il-mediċina jew sustanza ta 'radjuterapija lejn l-organu fil-mira u joqtol direttament iċ-ċellola fil-mira, li tissejjaħ terapija mmexxija mit-tumur.
   
   Barra minn hekk, ir-radjoimmunoimaging tista 'ssir billi tikkonnettja markaturi radjoattivi ma' antikorpi monoklonali u tinjettahom f'pazjenti biex tgħin fid-dijanjosi tat-tumur. Antikorpi monoklonali huma prinċipalment antikorpi murini, u s-serum ta 'annimali eteroġenji jista' jikkawża reazzjonijiet allerġiċi fil-bnedmin. Għalhekk, il-preparazzjoni ta 'antikorpi monoklonali bniedem-bniedem jew antikorpi umanizzati huwa iktar importanti, iżda ma sar l-ebda progress sinifikanti f'dan ir-rigward.

X'inhu antikorp poliklonali? 

1. Xi jfisser antikorp poliklonali?

Antiġeni huma ġeneralment magħmula minn determinanti antiġeniċi multipli. Tip wieħed ta 'determinant antiġeniku jistimula l-ġisem, u l - antikorp prodott minn limfoċit B li jirċievi l-istimulazzjoni tal-antiġenu jissejjaħ Antikorp Monoklonali. Il-ġisem huwa stimulat minn determinanti antiġeniċi multipli, u diversi antikorpi monoklonali huma prodotti kif xieraq. Dawn l-antikorpi monoklonali jitħalltu flimkien biex jiffurmaw antikorp poliklonali.

2. struttura

L-istruttura molekulari fuq l-antiġen li tista 'tikkawża lill-ġisem jipproduċi antikorpi tissejjaħ epitope. Jista 'jkun hemm diversi determinanti antiġeniċi differenti fuq antiġen, sabiex il-ġisem jipproduċi diversi antikorpi differenti, u l-antikorpi finali huma ċelloli tal-plażma. Popolazzjoni taċ-ċelloli tal-plażma li taġixxi biss fuq determinant antiġeniku wieħed hija klonu. L-antikorp speċifiku prodott minn klonu jissejjaħ antikorp monoklonali. Antikorpi monoklonali tista 'torbot speċifikament ma' determinant antiġeniku speċifiku wieħed, hekk kif missila tolqot il-mira b'mod preċiż. Min-naħa l-oħra, anke jekk huwa l-istess determinant antiġeniku, diversi kloni jistgħu jipproduċu antikorpi fil-ġisem, u jiffurmaw taħlita ta 'diversi antikorpi monoklonali, imsejħa poliklonali antikorpi.

3. Klassifikazzjoni

Antiġeni huma ġeneralment magħmula minn epitopi multipli. Tip wieħed ta 'epitopju jistimula l-ġisem. L-antikorp prodott minn limfoċit B li jirċievi l-antiġenu jissejjaħ antikorp monoklonali. Il-ġisem huwa stimulat minn varjetà ta 'determinanti antiġeniċi, u varjetà ta' antikorpi monoklonali huma prodotti kif xieraq. Dawn l-antikorpi monoklonali jitħalltu flimkien biex jiffurmaw antikorpi poliklonali. Ħlief għal diversi determinanti antiġeniċi, l-istess tip ta 'epitopju jista' wkoll jistimula lill-ġisem biex jipproduċi ħames tipi ta 'antikorpi: IgG, IgM, IgA, IgE u IgD.

L-antikorpi poliklonali huma grupp ta 'immunoglobulinas imnixxija miċ-ċelloli tal-plażma tal-ġisem li stimulati minn antiġeni eteroloġiċi (antiġeni makromolekulari, konjugati hapten). L-antikorpi poliklonali jintużaw ħafna fir-riċerka u d-dijanjosi minħabba l-kapaċità tagħhom li jagħrfu epitopi multipli u jikkawżaw reazzjonijiet ta 'preċipitazzjoni b'ħin ta' preparazzjoni qasir u bi prezz baxx.

4. applikazzjoni

Antiserum poliklonali tajjeb fih antikorpi multipli kontra epitopi differenti ta 'ċertu antiġen. Peress li l-antiserum poliklonali ġeneralment fih antikorpi kontra epitopi differenti ta 'ċertu antiġen, inklużi epitopi reżistenti għad-denaturazzjoni, se jkollu wkoll effett f'kampjuni ffissati fil-fond. Fit-tebgħa ta 'sezzjonijiet ta' tessut imdaħħal fil-paraffin, spiss jintużaw antikorpi Poliklonali. Skond il-ħtiġijiet differenti ta 'l-esperiment, antikorpi poliklonali jintużaw biex jittikkettjaw l-antiġenu korrispondenti.

Barra minn hekk, fil-produzzjoni agrikola, antikorp poliklonali jintuża għall-monitoraġġ fuq il-post tar-residwi tal-pestiċidi; f'applikazzjonijiet kliniċi, antikorpi poliklonali jintużaw prinċipalment għall-iskoperta ta 'patoġeni, dijanjosi u trattament tal-mard, bħal immunosuppressanti tal-proteini għar-rispons ta' trapjant u trattament ta 'mard awtoimmuni.

Antikorpi Monoklonali vs Poliklonali

1. Kunċett

Klonazzjoni: tirreferi għal linja ta 'ċelloli riprodotti b'mod asesswali, li hija raggruppament ta' linji ta 'ċelloli ffurmati mid-diviżjoni u r-riproduzzjoni ta' ċellula proġenitriċi waħda. Fil-membri kollha ta 'din il-familja, jekk ma sseħħ l-ebda mutazzjoni, il-ġeni huma eżattament l-istess.

Antikorp poliklonali (pAb): Immunizza annimali b'antiġen li fih epitopi multipli, li jistgħu jistimulaw kloni ta 'ċelluli B multipli biex jipproduċu antikorpi differenti kontra epitopi multipli. Is-serum immuni miksub huwa attwalment taħlita ta 'antikorpi multipli.

Antikorpi monoklonali (mAb): Antikorpi omologi prodotti minn klonu ta 'ċelloli B li jagħrfu epitopju. Speċifiċità qawwija uniformi ħafna, titrazzjoni għolja, ftit jew xejn reattività inkroċjata.

2. produzzjoni

Differenzi mill-preparazzjoni ta ’antikorp monoklonali:
Limfoċiti B ikkurati b'antiġeni speċifiċi u ċelloli tal-majeloma huma mdewba biex jiksbu ċelloli ta 'ibridoma. Wara skrinjar minn medium HAT u skoperta tal - titru minn ELISA, jinkiseb klonu pożittiv, u mbagħad tagħmel kultura taċ-ċelloli jew injetta ċ-ċelloli fil-kavità addominali tal-annimali (ġeneralment ġrieden balb / c) u kkultivahom bl-axxite, iġbor is-supernatant / axxiti u ppurifikahom biex tikseb antikorpi monoklonali .

Il-preparazzjoni ta ' antikorp poliklonali mhix daqstant tqila daqs antikorpi monoklonali. Trid tinjetta l-antiġen biss (iktar ma tkun għolja l-purità, aħjar) direttament fil-ġisem ta 'l-annimal għall-immunizzazzjoni. Wara 3 sa 4 tilqim, it-titru huwa kkwalifikat minn ELISA, u d-demm jiġi ċentrifugat. Is-supernatant jista 'jiġi ppurifikat biex jinkisbu antikorpi poliklonali. Għalhekk, iċ-ċiklu ta 'preparazzjoni ta' antikorpi poliklonali huwa iqsar minn dak ta 'antikorpi monoklonali, u l-prezz tal-preparazzjoni inizjali huwa inqas minn dak ta' antikorpi monoklonali.

3. Żvantaġġi u Vantaġġi

A. Antikorp monoklonali

vantaġġi:

• Rikonoxximent speċifiku ħafna ta 'epitopu ta' l-antiġen
• Linji ta 'ċelloli ta' ibridoma immortali għandhom il-kapaċità li jipproduċu ammonti illimitati ta 'antikorpi
• Linji ta 'ċelloli ta' ibridoma immortali għandhom il-kapaċità li jipproduċu ammonti illimitati ta 'antikorpi
• Ħoss minimu fl-isfond u reazzjoni trasversali
• Affinità u purifikazzjoni eċċellenti

Affinità u purifikazzjoni eċċellenti:

• L-iżvilupp ta 'antikorpi monoklonali jieħu ż-żmien u jeħtieġ ħiliet tekniċi għoljin.
• Jistgħu jipproduċu bosta antikorpi speċifiċi, iżda jistgħu ma jinstabux fi speċi multipli.
• Suxxettibbli għal bidliet fl-epitopi. Anke bidliet żgħar fil-konformazzjoni jistgħu jirriżultaw f'kapaċità ta 'rbit imnaqqsa ħafna.

B. Antikorp poliklonali

vantaġġi:

• Il-prezz huwa irħis u l-produzzjoni hija relattivament mgħaġġla.
• Minħabba r-rikonoxximent ta 'epitopi multipli, l-affinità ġenerali tal-antikorp għall-antiġen hija ogħla.
• Sensittività għolja biex tiskopri ammonti baxxi ta 'proteina.
• Kapaċità qawwija biex taqbad il-mira proteina (rakkomandat bħala antikorp tal-qbid fis-sandwich ELISA).
• Affinità ta 'antikorpi tista' twassal għal twaħħil aktar mgħaġġel ma 'l-antiġen fil-mira (rakkomandat għal analiżi li teħtieġ qbid rapidu ta' proteini; bħal IP jew ChIP).
• Reaġenti avvanzati biex jidentifikaw proteini naturali.
• Faċli biex tgħaqqad ma 'markers ta' antikorpi, huwa improbabbli li taffettwa l-abbiltà li torbot.

żvantaġġi:

• Differenzi bejn lottijiet ta 'annimali differenti f'ħinijiet differenti.
• Peress li jirrikonoxxi epitopi multipli (l-antikorpi affiljati purifikati juru reattività minima), il-possibbiltà ta 'reattività inkroċjata hija għolja.

4. Differenzi oħra

konklużjoni

Id-distakk bejn antikorpi monoklonali u poliklonali hija enormi, u dawn id-differenzi jagħmluhom utli f'oqsma differenti. Antikorpi monoklonali jokkupaw post vitali fil-mediċina, filwaqt li poliklonali antikorpi jiddi fl-oqsma tal-produzzjoni agrikola u l-iskoperta u t-trattament tal-mard.

Referenzi

• ProteoGenix: POLIKLONALI VS. MONOKLONALI: KIF TAGĦŻEL L-AQWA ANTIKORPI GĦALL-PROĠETT TIEGĦEK?
• LibreTexts: Applikazzjonijiet Prattiċi ta 'Antikorpi Monoklonali u Poliklonali