Test tal-PCR fil-ħin reali tal-Fluworexxenza tas-Salmonella

PCR fluworexxenti f'ħin reali sejbien in vitro ta 'Salmonella.

Speċifikazzjoni: 96 T / kaxxa
Il-kit huwa maħżun fi 2 - 8 ℃.
Il-perjodu ta 'validità huwa ta' 12-il xahar.

Speċifikazzjoni: 96 T / kaxxa

Użi: PCR fluworexxenti f'ħin reali sejbien in vitro ta 'Salmonella.

Prinċipju ta 'sejbien: Il-kit fih primers speċifiċi għas-Salmonella. Meta l-kampjun ikun fih Salmonella, id-DNA tas-Salmonella estratta wara l-arrikkiment minn qabel tiġi amplifikata b'mod esponenzjali bil-PCR. Matul ir-reazzjoni, is-sonda fluworexxenti speċifika għas-Salmonella ibridizza ma 'l-aċidu nuklejku fil-mira u hija simultanjament Taq enżima Idroliżi biex tissepara l-grupp fluworexxenti mill-grupp ta' tifi fuq is-sonda: sabiex il-preżenza ta 'Salmonella tkun tista' tiġi ġġudikata f'ħin reali mill-fluworexxenza inkrement.

Prodott u kompożizzjoni:

Kompożizzjoni (96T / kit)	Speċifikazzjoni	kwantità
Soluzzjoni ta 'estrazzjoni tad-DNA	3ml	Tubu 1
Soluzzjoni ta 'reazzjoni tas-Salmonella PCR	1100ul	Tubu 1
Tektek enżima (5U / ul)	20ul	Tubu 1
Kontroll pożittiv tas-Salmonella	40ul	Tubu 1
Kontroll Negattiv tas-Salmonella	0.5ml	Tubu 1
Istruzzjoni manwali		1

Kundizzjonijiet tal-ħażna u data ta 'skadenza tal-kit:
1. Il-kit huwa maħżun fi 2 - 8 ℃.
2. Il-perjodu ta 'validità huwa ta' 12-il xahar.

Strumenti applikabbli:
Serje ABI7500, 9600, MJ opticon2, Bio-Rad u strumenti oħra fluworexxenti kwantitattivi tal-PCR huma disponibbli

Metodu sperimentali:
1. Ħu 1ml tas-soluzzjoni ta 'arrikkiment f'tubu ta' ċentrifuga sterili ta '1.5m1, iċċentrifuga f'10.000rpm għal 5min, u armi s-supernatant; uża l-metodu klassiku ta 'estrazzjoni tal-kloroform tal-fenol biex tittestja l-mudell estratt jew aħżnu f'20C sakemm jiġi ttestjat.
2. Poġġi s-soluzzjoni tar-reazzjoni tal-PCR f'temperatura tal-kamra biex tibbilanċja, ħu l-enżima Taq wara li tidwib, u żid l-enżima Taq f'2∪ / tubu, jiġifieri, kull sistema ta 'reazzjoni tat-test hija ppreparata bħala: Soluzzjoni ta' reazzjoni tal-PCR 22.5u1 + 0.4ulTaq enżima.
3. Żid il-mudell: Ħoll l-estratt tal-aċidu nuklejku maħżun f'temperatura ta '-20 ° C f'temperatura tal-kamra u ċċentrifuga f'13,000 rpm għal 5 minuti. Il-kontrolli negattivi u pożittivi huma mdewba f'temperatura tal-kamra qabel l-użu. F'kull tubu ta 'reazzjoni PCR, żid 2 ul tal-mudell jew kontrolli negattivi u pożittivi pproċessati fil-pass 1, għatti t-tubu, poġġi fuq l-istrument PCR, u rreġistra n-numru tal-kampjun korrispondenti.
4. Żona ta 'amplifikazzjoni u sejbien abbord: il-kundizzjonijiet tar-reazzjoni huma 95C: 3min, 1 ċiklu; 95C: 5sec, 60C: 40sec (akkwist tas-sinjal), 40 ċiklu. Is-sistema ta 'reazzjoni kienet issettjata għal 25u1.
Għall-istrument PCR ta 'fluworexxenza b'ħafna kanali, is-sinjal huwa ssettjat għal Fam fluorescein.

Ġudizzju tar-riżultati:
Jekk jogħġbok irreferi għall-manwal għad-dettalji.

Prekawzjonijiet għall-użu tal-kit:
1. Dan il-kit jintuża biss għal skopijiet ta 'ttestjar u riċerka in vitro, jekk jogħġbok aqra t-test sħiħ ta' dan il-manwal b'attenzjoni qabel ma tibda tużah.
2. L-esperiment għandu jkun maqsum strettament: żona ta 'preparazzjoni ta' qabel il-PCR-ipprepara reaġenti sperimentali; erja tal-ipproċessar tal-kampjun - kampjuni li għandhom jiġu ttestjati, ipproċessar tal-mudell; żona ta 'skoperta-PCR amplifikazzjoni, skoperta.
3. Għall-istandards rilevanti tal-immaniġġjar tal-laboratorju, jekk jogħġbok irreferi għall-implimentazzjoni tal-istandards tal-immaniġġjar għal-laboratorji tal-amplifikazzjoni tal-ġene maħruġa mill-awtoritajiet nazzjonali rilevanti.

Jekk trid tkun taf aktar, jekk jogħġbok ikkuntattjana

Mistoqsijiet trivia: Salmonella

Dwar Salmonella

Definizzjoni tas-Salmonella

Salmonella huwa terminu ġenerali għal grupp ta 'batterja. Jista 'jinfetta lill-bnedmin u jikkawża mard kif ukoll annimali. Hija marda żoonotika. Minħabba li s-Salmonella hija Enterobacteriaceae Gram-negattiva, in-nies jistgħu jieklu ikel ikkontaminat bis-Salmonella u jikkawżaw avvelenament mill-ikel. Skond l-istatistiċi, fid-dinja ta 'l-avvelenament mill-ikel, ikkawżat prinċipalment mid-dieta tas-Salmonella huwa patoġen komuni li jinġarr mill-ikel. Barra minn hekk, Salmonella typhimurium, Salmonella paratyphi, Salmonella choleraesuis, eċċ., Jistgħu saħansitra jikkawżaw epidemiji intestinali bħal deni tat-tifojde, deni paratifu, u kolera. Id-deni tifojde jinfetta biss lill-bnedmin, mhux lill-annimali, u jagħmel ħsara lill-mudullun tal-għadam, il-fwied u l-milsa tal-bniedem. Kull sena, jista 'jikkawża għexieren ta' miljuni ta 'nies jimirdu u aktar minn 600,000 imutu.

Sorsi tas-Salmonella

Is-Salmonella għandha firxa wiesgħa ta 'ospiti fin-natura. Ftit Salmonella huma selettivi għall-ospitant, u ħafna minnhom huma adattati għall-bnedmin u l-annimali. Jistgħu jgħixu fil-passaġġ gastro-intestinali ta 'mammiferi, rettili, għasafar, insetti, u bnedmin. Ir-rata ta 'infezzjoni b'annimali selvaġġi hija aktar minn 1% sa 20%.

Is-Salmonella tikkontamina prinċipalment l-ikel tal-laħam, u l-ikel tal-ħut, tjur, ħalib u bajd jista 'wkoll jiġi kkontaminat minn dawn il-batterji. L-avvelenament mill-ikel tas-Salmonella jista 'jseħħ matul is-sena kollha. Tiekol mard mhux imsajjar, laħam tal-bhejjem mejjet, jew laħam tal-bhejjem kontaminat f'punti oħra wara l-qatla huwa l-iktar kawża importanti ta 'avvelenament mill-ikel tas-salmonella. Xi esperti tal-ikel jirrimarkaw li l-Amerikani għandhom drawwiet alimentari differenti minn Ċiniżi. Huma jħobbu jieklu bajd nofs mgħolli jew saħansitra bajd nej, allura ladarba l-bajd ikun fih is-salmonella, iċ-ċans ta 'infezzjoni huwa relattivament għoli. "Fil-pajjiż, mhux sorprendenti li bajd nej fih is-salmonella, imma n-nies jħobbu jsajru bajd imsajjar, li jnaqqas ħafna ċ-ċans ta 'infezzjoni.

Infezzjoni tas-Salmonella

Salmonella tappartjeni għall-familja Enterobacteriaceae u tista 'tikkawża gastroenterite, deni tat-tifojde, sepsis, u infezzjonijiet fokali extraintestinali. Kollettivament tissejjaħ infezzjoni tas-Salmonella (jiġifieri, salmonellożi). Diversi sindromi kultant jistgħu jikkoinċidu. Infezzjonijiet ikkawżati minn batterji tifojdi u paratifojdi mhumiex inklużi.

Il-manifestazzjonijiet kliniċi tal-infezzjonijiet tas-Salmonella huma diversi. Skond is-sintomi ewlenin tagħhom, jistgħu jinqasmu f'erba 'tipi: enterite, tifojde, settiċemija, u infezzjonijiet suppurattivi lokalizzati.

Speċi Salmonella

Salmonella typhi

Salmonella typhi hija batterja b'daqs ta '(0.6 sa 0.9) × (1 sa 3) mikroni mingħajr spori u ġeneralment l-ebda kapsula. Ħlief għas-Salmonella gallinarum u s-Salmonella typhi, ħafna minnhom għandhom flagella madwar il-ġisem, u jikkawżaw is-Salmonella typhi.
Batterji Salmonella li jikkawżaw deni tifojde. Il-batterja għandha forma ta 'virga, bi flagella mal-ġisem kollu u tista' tipproduċi endotossina. L-injezzjoni ta 'endotossina fil-vini tal-fenek tista' tikkawża leżjonijiet bħal tal-bniedem, bħal deni, lewkopenja, eċċ., U injezzjonijiet massivi jistgħu jikkawżaw il-mewt.

Salmonella typhimurium

Is-Salmonella typhimurium hija grupp ta 'salmonella mhux adattiva jew pantrofika. Għandu firxa wiesgħa ta 'hosts u huwa mqassam fin-natura. Jeżisti fil-passaġġ intestinali ta 'diversi annimali bħal tjur, bhejjem, u annimali gerriema. Waħda. Il-batterja tista 'tikkawża diversi mard infettiv ta' tjur u mammiferi, u tista 'wkoll tikkawża infezzjonijiet umani, u għandha sinifikat importanti għas-saħħa pubblika.

Salmonella enteritidis

Salmonella enteritidis hija l-patoġenu ewlieni li jikkawża gastroenterite akuta. Sintomi tipiċi wara l-infezzjoni jinkludu deni, dijarea u rimettar. Is-Salmonella enteritidis hija waħda mill-batterji patoġeniċi li m'għandha l-ebda speċifiċità tal-ospitant u hija invażiva. L-ospitant jinkludi bnedmin u diversi annimali. Il-batterji mhux biss jistgħu jikkawżaw telf ekonomiku serju għall-morbożità u l-mortalità tat-tjur, iżda l-prodotti tat-tjur ikkontaminati bħala ġarriera tas-Salmonella enteritidis ukoll jipperikolaw serjament is-saħħa tal-bniedem.

Salmonella choleraesuis

Is-Salmonella choleraesuis hija tip ta ’Salmonella mhux tifojdali, li hija l-batterja patoġenika ewlenija li tikkawża paratyphoid fil-qżieqeż, li tikkawża ħsara kbira lill-industrija tal-majjali.
Meta s-Salmonella choleraesuis settiċemika tinvadi l-ġisem tal-majjal, tinvadi immedjatament l-ispazju limfatiku tal-ħajt intestinali, u b'hekk tinvadi d-demm mill-ġdid u timmultiplika fid-demm, u tikkawża settiċemija. Numru kbir ta 'endotossini huma prodotti meta l-batterja tirriproduċi, u l-endotossini jaġixxu fuq ċelloli bojod tad-demm u jikkawżaw infjammazzjoni, deni għoli u dijarea.
L-infezzjoni tas-Salmonella choleraesuis hija prinċipalment trasmessa mill-fetħa tal-ippurgar. Jekk il-pazjent ikollu razzett tal-majjali fid-dar, id-drawwiet tal-iġjene huma fqar, u l-bażi ta 'mard kroniku tal-fwied hija baxxa, l-immunità hija baxxa, u għalhekk jista' jkun minħabba l-konsum ta 'ikel jew ilma kkontaminat bl-infezzjoni tas-Salmonella Cause.

Wara infezzjoni fl-adulti bis-Salmonella choleraesuis, il-bidu huwa insidjuż u l-manifestazzjonijiet kliniċi mhumiex tipiċi. Huwa faċli li titlef id-dijanjosi u d-dijanjożi ħażina u ttardja t-trattament. Jekk il-kors tal-medikazzjoni mhuwiex biżżejjed, il-kontroll insidjuż tal-batteremija mhuwiex komplet u l-kundizzjoni tista 'tittawwal ripetutament.

Avvelenament bis-Salmonella

L-ispeċifiċità ospitanti tas-Salmonella hija dgħajfa ħafna, li tista 'tinfetta kemm l-annimali kif ukoll il-bnedmin, u huwa faċli li tikkawża avvelenament mill-ikel fil-bnedmin. L-iktar patoġenika hija Salmonella cholerae, segwita minn Salmonella typhimurium u Salmonellaenteritidis.
Inġestjoni ta 'ikel ikkontaminat mis-Salmonella mhux tifojde mill-ħalq ikkawżat mard. Ikel komuni li jikkawża mard huwa prinċipalment ikel tal-annimali, prinċipalment laħam tal-bhejjem, laħam tat-tjur, bajd, ħalib u l-prodotti tagħhom.

Sintomi tas-Salmonella

Sintomi ta ’avvelenament mill-ikel ikkawżat minn salmonella jinkludu prinċipalment dardir, rimettar, uġigħ addominali, uġigħ ta’ ras, tkexkix ta ’bard u dijarea, kif ukoll għeja, uġigħ fil-muskoli, vista mċajpra, deni moderat, irrekwitezza u ngħas, it-tul idum minn 2 sa 3 ijiem, rata letali kienet ta '4.1%. Ir-raġuni ewlenija hija kkawżata mill-inġestjoni ta 'ikel li fih ammonti kbar ta' batterji speċifiċi mhux ospitanti jew serotipi ta 'Salmonella.

Patoġenesi tas-Salmonella

1. L-invażjoni tal-batterja tas-salmonella ħajja fuq il-mukoża intestinali u l-effett sinerġistiku ta 'l-endotossina; hija l-kawża ewlenija tal-avvelenament mill-ikel ikkawżat mis-salmonella.

2. Avvelenament bl-Enterotossina: Salmonella enteritidis u Salmonella typhi jistgħu jipproduċu enterotossina. Il-mekkaniżmu huwa l-istess bħat-tip enterotossina ta 'avvelenament batteriku mill-ikel.

Perjodu ta 'inkubazzjoni tas-Salmonella

Wara li tieħu l-ikel tossiku. Is-sintomi ġeneralment jidhru fi żmien 12 sa 14-il siegħa, u xi wħud għandhom perjodu itwal ta 'inkubazzjoni.

Trattament tas-Salmonella

Gastroenterite kkawżata minn Salmonella ġeneralment ma teħtieġx trattament antibijotiku; huwa supplimentat prinċipalment bl-ilma u l-elettroliti; iżda għal trabi tat-twelid, pazjenti immunokompromessi u pazjenti midruba speċjali; trattament antibijotiku huwa meħtieġ skont is-sitwazzjoni.

Prevenzjoni tas-Salmonella

1. Aħsel idejk sew qabel ma tiekol, wara li tmur it-tojlit, qabel tmiss l-ikel, wara li tmiss annimali jew bajd nej.
2. Issepara l-bordijiet tat-tqattigħ għal ikel nej u msajjar.
3. Kul l-ikel sewwa (speċjalment bajd u tjur).
4. Ikel li mhux lest biex jittiekel għandu jkun imgeżwer fi plastik u maħżun fil-friġġ. Għandu jissaħħan jew jissajjar qabel ma jerġa 'jittiekel.
5. Ġlieda u timblokka vettori bħad-dubbien. Ikel mhux nadif ikkontaminat bid-dubbien, skadut jew maħmuġ għandu jintrema u ma jittiekelx.
6. It-torri tal-ilma għandu jitnaddaf u jiġi diżinfettat spiss.
7. L-ilma tax-xorb waqt l-ivvjaġġar jew l-ikkampjar għandu jkun mgħolli u diżinfettat.
8. Jekk għandek sintomi bħal rimettar, dijarea jew deni, għandek tfittex trattament mediku kemm jista 'jkun malajr.

Test tas-Salmonella

Sejbien ta 'antikorpi

L-ispeċifiċità sinifikanti tar-reazzjoni antiġen-antikorp intużat għall-identifikazzjoni tal-batterja u t-tipa seroloġika għal aktar minn nofs seklu. Il-preżenza ta 'antikorpi speċifiċi għal ċelloli batterjali jew antiġeni flagellari tippermetti lin-nies jistabbilixxu metodi mgħaġġla biex jikxfu patoġeni li jinġarru mill-ikel. Hemm ħafna metodi stabbiliti ta 'skoperta immunoloġika għas-Salmonella, li jistgħu jinqasmu bejn wieħed u ieħor f'metodi bbażati fuq antikorpi ttikkettati bl-enżimi (ELISA), tbajja ta' antikorpi fluworexxenti (immunofluworexxenza), antikorpi ttikkettati bl-iżotopi (radjoimmunoanalisi), u bosta metodi oħra. Metodi bbażati fuq antikorpi li jużaw agglutinazzjoni tal-latex, immunosensuri, immunodiffużjoni u immunokromatografija. Madankollu, l-iktar metodu użat huwa bbażat fuq it-teknika ELISA fuq żewġ siti, jiġifieri sandwich ELISA. Wara t-titjib ta 'dan il-metodu, isotopi radjuattivi jintużaw biex jissostitwixxu antikorpi ttikkettati. Fi ftit kliem, tirreferi għall-użu ta 'antikorpi "jaqbdu" immobilizzati fuq sottostrat solidu biex jaqbdu l-antiġen fil-mira. Wara l-ħasil biex jitneħħew il-komponenti mhux marbuta, it-tieni tikketta ta 'l-enżimi hija miżjuda. l-antiġen jista 'jinstab faċilment bl-ispettrofotometrija. Bl-użu pjanċi mikrotitrati billi matriċi solida tistandardizza l-format tar-reazzjoni u tiffaċilita l-awtomazzjoni tagħha.

Metodu ta 'aċidu nuklejku

L-aċidu nuklejku ċellulari DNA u RNA huma l-uniċi molekuli kbar li jistgħu jġorru informazzjoni. Billi ċ-ċelloli kollha fihom din il-molekula, tista 'tintuża bħala mira għall-iskoperta. Il-mira hija ġeneralment sekwenza speċifika ta 'aċidu nuklejku, li tista' tiġi skoperta billi jintużaw molekuli ta 'aċidu nuklejku kumplimentari bħala sondi. Simili għal metodi immunoloġiċi, is-sonda teħtieġ ukoll li tkun ittikkettata kif xieraq, bħal radjoisotopi, enżimi jew markaturi luminixxenti. Fitts et al. introduċa l-ewwel ġenerazzjoni ta ’teknoloġija ta’ ibridizzazzjoni DNA-RNA fl-iskoperta ta ’Salmonella fl-ikel. Is-sondi użati f'dan il-metodu fihom frammenti tad-DNA ta 'Salmonella typhi li huma ttikkettjati b'isotopi radjuattivi. Is-sensittività tagħhom hija għolja. Wara madwar 48 siegħa tal-pass ta 'arrikkiment, il-limitu ta' skoperta jista 'jilħaq 108 batterja / ml, iżda minħabba l-użu ta' radjoisotopi, li jistgħu jiġu applikati biss f'laboratorji speċjalizzati, il-vantaġġi ta 'dan il-metodu huma kkumpensati. Għal dan il-għan, ġiet żviluppata teknoloġija tat-tieni ġenerazzjoni bbażata fuq ibridizzazzjoni ta 'aċidu nuklejku, kolorimetru.