Aġġornament tal-Coronavirus: hemm total ta '3.66 miljun (dejta minn Corona tad-dinja) nies infettati u kkonfermati Każ ta 'koronavirus fid-dinja kollha. Se jkun qed jiżdied jum b'jum, imwiet numri ta 'koronavirus 257,301.Il-kitt tad-detezzjoni huwa importanti ħafna minn kull pajjiż biex itejjeb u jgħaġġel il-każ suspettat. Il-metodu ta 'skoperta popolari huwa test ta' aċidu nuklejku, it-tieni huwa test ta 'antikorpi covid 19, l-aktar test ġdid huwa għal skoperta ta' antiġen covid 19. X'inhuma t-3 tipi differenti test tal-koronavirus? Kif jaħdmu u jittestjaw il-prinċipju? Dan l-artikolu jgħidlek dak li tħasseb.
Illum, l-Amministrazzjoni Nazzjonali tal-Prodotti Mediċi (NMPA) approvat aktar minn 113-il tip ta 'apparat mediku ġdid ta' emerġenza tal-koronavirus minn 113-il kumpanija li għandhom il-marka CE jew l-approvazzjoni tal-FDA. Fost dan, 80 tip għal skoperta ta 'aċidu nuklejku u 33 tip għal test tal-antikorpi covid 19. L-iskoperta ta 'l-aċidu nuklejku u l-antikorpi fis-serum (jew antiġeni) huma metodi ewlenin u proċeduri tat-test ta' konferma ġdida ta 'coronavirus u dijanjosi tal-pazjent. X'inhuma l-kampjun meħtieġ u l-proċedura tat-tħaddim? U liema problemi qegħdin niffaċċjaw issa?
L-iskoperta ta 'l-aċidu nuklejku għandha l-karatteristiċi ta' appoġġ dijanjostiku bikri, sensittività għolja u speċifiċità. Huwa wkoll l- "istandard tad-deheb" għad-dijanjosi ta 'pnewmonja ġdida infettata bil-koronavirus. L-iktar metodu wiesa 'huwa Reazzjoni tal-Katina tal-Polimerażi f'Ħin Real (RT-PCR). B'mod ġenerali, ir-riżultat pożittiv ta ' SARS-CoV-2 hija bbażata fuq l-istess kampjun li huma fuq il-ġeni ORF1ab u N u jilħqu l-mira doppja pożittiva, jew mira waħda pożittiva minn sejbien ripetut, jew iż-żewġ kampjuni jilħqu l-mira waħda fl-istess ħin.
Il-ġene tal-virus bħala l-mira ta 'skoperta ħalli s-sekwenza tad-DNA fil-mira magħżula tiżdied b'mod esponenzjali bil-kanal ta' amplifikazzjoni tal-PCR. Kull sekwenza tad-DNA amplifikata tista 'tiġi kkombinata ma' sonda fluworexxenti li żidna minn qabel. Iktar ma l-ġeni mmirati jiġu amplifikati, iktar ikun qawwi l-kulur fluworexxenti akkumulat. F'kampjuni mingħajr virus, m'hemm l-ebda amplifikazzjoni tal-ġene fil-mira, għalhekk ma jista 'jinstab l-ebda sinjal ta' fluworexxenza aktar qawwi. Għalhekk, l-iskoperta tal-aċidu nuklejku hija fil-fatt biex tiddetermina l-aċidu nuklejku fil-kampjun permezz ta 'sinjali fluworexxenti li jakkumulaw.
Il-kampjuni huma ġeneralment tampuni nażali, tampuni farinġeali, tampuni nażofarinġjali, sputum, fluwidu tal-ħasil tal-bronki, fluwidu tal-ħasil alveolari (BALF), eċċ.
Hemm ħames passi: teħid ta 'kampjuni, żamma ta' kampjuni, ħażna, estrazzjoni ta 'aċidu nuklejku, u ttestjar bil-kompjuter. Dawn il-proċeduri kollha jeħtieġu esperimenti xjentifiċi rigorużi:
1. Teħid ta 'kampjuni. Imsaħ il-ħajt tal-farinġi ta 'wara u t-tunsilli bilaterali tal-farinġi bi tampun tal-farinġi 5-10 darbiet, u dawwar il-kampjun kontinwament
2. Żamma tal-kampjun. Għaddas ir-ras tat-tampun fis-soluzzjoni għall-preservazzjoni taċ-ċellula, imbagħad kisser it-tarf tat-tajjara u ssikka l-għatu tat-tubu immedjatament bħala żamma tal-kampjun.
3. Ħażna. Poġġi t-tubu tal-kampjun f'borża ssiġillata u ibgħatha għall-ispezzjoni fil-ħin. Żgura l-ambjent tal-ħażna fi 2-8 gradi ℃ meta tgħaddi għall-ispezzjoni.
4. Estrazzjoni ta 'aċidu nuklejku. Oħroġ l-aċidu nuklejku mill-kampjun tal-virus inattivat għal skoperta sussegwenti, tista 'tuża tagħmir awtomatizzat, bħal strument ta' estrazzjoni ta 'aċidu nuklejku.
5. Kxif ta 'fluworexxenza PCR ta' aċidu nuklejku, jiġifieri, ittestjar fuq il-magna, se jonfoq 70-80min biex itemm ir-reazzjoni PCR.
Għalhekk, iż-żieda ta 'antikorp IgM u IgG meta t-test tal-aċidu nuklejku huwa negattiv, jista' jagħmel tajjeb għan-nuqqasijiet ta 'dijanjosi mitlufa.
Wara 7 ijiem ta 'infezzjoni tal-pulmonite tal-coronavirus, antikorpi speċifiċi għas-serum huma prodotti gradwalment, l-ewwel l-antikorp immunoglobulin (IgM) u mbagħad antikorpi IgG. Għalhekk, l-antikorp IgM jindika infezzjoni akuta reċenti, u żieda fl-antikorp IgG tindika storja ta 'infezzjoni.
L - ittestjar tas - serum ġie editjat fil - Programm Dijanjostiku u ta ’Trattament ta’ COVID-19 (7th Verżjoni bi prova), minħabba li għandu l-akbar vantaġġ ta 'ttestjar rapidu u konvenjenti, li jista' jkisser il-limitazzjoni eżistenti ta 'personali u post, u jqassar il-ħin tal-ittestjar. Jista 'jkun iddijanjostikat bħala infezzjoni COVID-19 jekk hemm suspett pożittiv tal-antikorpi IgM u IgG speċifiċi għas-serum, jew l-antikorp IgG jinbidel minn negattiv għal pożittiv, jew il-perjodu ta' rkupru huwa 4 darbiet jew ogħla minn dak fil-perjodu akut.
Dan il-kit tat-test huwa bbażat fuq immunokromatografija tad-deheb kollojdali assay, ir-rumanz rikombinanti bit-tikketta tad-deheb kollojdali koronavirus antiġen u kontroll tal-kwalità markatur tad-deheb tal-antikorp huma sprejjati fuq il-kuxxinett li jorbot; żewġ linji ta 'skoperta (G u M) u linja waħda ta' kontroll tal-kwalità (linja C) huma miksija fuq il-membrana NC. Dawn il-biljetti tat-testijiet imexxu l-kampjun likwidu tul il-membrana tan-nitroċelluloża, jekk hemm antikorpi COVID-19 IgM, l-antikorpi jingħaqdu ma 'l-antiġeni tal-virus immarkati u jsiru s-sandwich konjugat, ir-riżultat pożittiv jista' jinqara. U jekk hemm antikorp COVID-19 IgG fil-kampjun, l-antikorpi jingħaqdu ma 'l-antiġeni tal-virus immarkati u jsiru s-sandwich konjugat, u allura r-riżultat pożittiv jidher bl-istess mod. Il-karta tat-test għandha wkoll linja ta 'kontroll tal-kwalità (linja Ċ) biex tiġġudika jekk il-proċess tal-kromatografija huwiex suċċess.
Il-kampjuni huma ġeneralment demm, jinkludu serum, plażma jew demm sħiħ.
1. Iftaħ il-borża tal-fojl tal-aluminju, oħroġ il-karta tat-test u poġġiha orizzontalment fuq id-desktop;
2. Uża pipetta biex tiġbed is-serum / plażma / kampjun tad-demm sħiħ u żidha mal-kampjun sew, u mbagħad iġbed is-soluzzjoni buffer fil-kampjun sew.
3. Stenna 15-il minuta, imbagħad aqra r-riżultati.
1. Jirriżultaw pożittivi foloz. Xi kampjun tad-demm tal-pazjent għandu l-fattur rewmatojde, antikorpi eterofili, awtoantikorpi, drogi u ċelloli tat-tumur, eċċ., Li huma faċilment jikkawżaw reazzjonijiet inkroċjati fit-test, u mbagħad, kultant ikun hemm riżultati pożittivi foloz.
2. Riżultat falz negattiv. Il-perjodu tat-tieqa tal-metodu tat-test tal-antikorp tas-serum u s-sensittività differenti tal-kit tat-test jikkawżaw ukoll riżultat negattiv falz.
Għalhekk, is-sejbien tal-antikorp tas-serum jintuża biss bħala test supplimentari għal każijiet suspettati ta 'test ta' aċidu nuklejku negattiv ta 'COVID-19, u ma jistax jiġi applikat bħala indikatur dijanjostiku għall-iskrining waħdu. L-użu kkombinat ta 'skoperta ta' antikorpi fis-serum u skoperta ta 'aċidu nuklejku jista' jgħin biex itejjeb ir-rata li tista 'tiġi skoperta tal-COVID-19, issir taf il-pazjenti dijanjostikati kemm jista' jkun, u tkun aktar favorevoli għall-kontroll ta 'l-epidemija.
L-iskoperta tal-antiġen COVID-19 tista 'tidentifika direttament jekk il-kampjun uman fihx il-coronavirus ġdid. Id-dijanjosi hija mgħaġġla, preċiża, u teħtieġ tagħmir u persunal baxx. Is-Sandwich ELISA ħalla żewġ antikorpi speċifiċi għall-antiġen biex jidentifikaw u jorbtu b'mira waħda għalkemm epitopi differenti, li jistgħu jnaqqsu ħafna r-reazzjoni inkroċjata u jtejbu l-ispeċifiċità tat-test.
L-antiġeni bħall-proteina N, il-proteina E u l-proteina S tal-koronavirus ġdid jistgħu jintużaw bħala immunogeni biex jistimulaw iċ-ċelloli tal-plażma biex jipproduċu antikorpi speċifiċi wara li l-virus jinfetta l-ġisem tal-bniedem. Skond il-prinċipju Sandwich ELISA, meta l-kampjun jitwaqqa 'fuq il-kuxxinett tal-kampjun, dan jgħaddi mill-kuxxinett tal-konjugazzjoni, il-linja tat-test (T) u l-linja tal-kontroll tal-kwalità (C) fuq il-membrana NC.
Il-kuxxinett tal-konjugazzjoni fih antikorp speċifiku antiġen ittikkettat, li jista 'jingħaqad ma' l-antiġen (proteina virali) fil-kampjun. Meta l-kampjun jilħaq il-linja tat-test (linja T), it-tieni antikorp speċifiku għall-antiġen imwaħħal fuq din il-linja jerġa 'jiġi kkombinat ma' l-antiġen, ir-riżultat pożittiv jinqara. Il-linja tal-kontroll tal-kwalità (linja C) hija miksija b'antikorp IgG u tista 'tiġi kkombinata ma' l-antikorp fil-kuxxinett tal-kampjun biex tiġġudika jekk il-proċess tal-kromatografija huwiex suċċess.
Il-kampjun ġeneralment ġej minn siti ta 'infezzjoni, bħal tampuni orofarinġeali, tampuni nażofarinġeali, sputum, serum, plażma, eċċ.
1. Waqqa 'l-ipproċessar tal-kampjun fit-tubu tal-kampjun;
2. Ħawwad il-kampjun u għafas mal-ħajt tat-tubu, sabiex il-kampjun jitħallat kompletament mas-soluzzjoni tat-trattament;
3. Ipprepara l-karta tat-test u żid il-kampjun mal-kampjun sew;
4. Stenna 15-il minuta, imbagħad aqra r-riżultati.
1. Negattiv falz. L-iskoperta tal-antiġeni teħtieġ sensittività ogħla, minħabba li l-koronavirus ġdid dejjem jinfetta l-apparat respiratorju t'isfel bħall-alveoli. Jekk tiġbor il-kampjun tas-sistema respiratorja ta 'fuq bħal nasofarinġi u orofarinġi jistgħu ma jkunux kapaċi jiksbu patoġeni jew biżżejjed Covid-19 virus u jikkawża dijanjosi mitlufa;
2. Il-proċess ta 'preparazzjoni huwa diffiċli u jieħu ħafna ħin. Tieħu madwar xahrejn jew tliet xhur biex tipprepara l-antiġen rikombinanti, u mbagħad ipprepara l-antikorp monoklonali fil-ġrieden. Jekk l-antikorp ippreparat għandu prestazzjoni fqira, jeħtieġ li jkun ippreparat għal xahrejn jew tliet xhur mill-ġdid.
Għalhekk, il-metodu ta 'skoperta ta' antiġen għadu mhux matur, u bħalissa l-ebda kit ta 'skoperta ta' antiġen ma ġie approvat u rreġistrat mill-Amministrazzjoni Nazzjonali tal-Prodotti Mediċi.
L-iskoperta ġdida ta 'aċidu nuklejku / antikorp / antiġen tal-koronavirus għandha l-punti tagħha stess u ma tistax tiġi sostitwita minn xulxin. Varjetà ta 'metodi ta' skoperta jistgħu jiġu applikati flimkien bħala komplement, li jistgħu jikkombinaw il-bijoloġija molekulari ma 'skoperta immuni, li jagħtu rwol sħiħ lill-vantaġġi rispettivi tagħhom, itejbu s-sensittività u l-ispeċifiċità. Dawn kollha jistgħu jqassru l-perjodu tat-tieqa ta ’skoperta b’mod effettiv, iżidu r-rata ta’ skoperta pożittiva, u jipprovdu protezzjoni doppja għall-gruppi kollha ta ’riskju possibbli.
Referenza:
Zhengtu Li ， Yongxiang Yi et al. Żvilupp u applikazzjoni klinika ta 'test ta' antikorp IgG-IgG mgħaġġel flimkien għal dijanjosi ta 'infezzjoni SARS-CoV-2. J Med Virol.2020 ； 1-7