ballya_logo
immunokromatografija

Kif tiżviluppa test rapidu bbażat fuq l-immuno-kromatografija?

Posted fuq  Settembru 11, 2020, Editjat minn Jason, Kategorija  

Navigazzjoni Quick
X'inhi l-immunokromatografija?
Il-prinċipju tal-immunokromatografija
Il-metodu ta 'analiżi komuni fl-immunokromatografija
Il-partiċelli kkuluriti komunement użati fl-immunokromatografija
X'inhu deheb kollojdali?
Il-metodu ta 'analiżi tat-3 tipi bbażat fuq immunokromatografija tad-deheb kollojdali
Il-materja prima użata fl-iżvilupp tal-immunokromatografija
It-tagħmir użat fl-iżvilupp tal-immunokromatografija
Il-proċedura tal-manifattura fl-iżvilupp tal-immunokromatografija
Kif tuża l-immunokromatografija tad-deheb kollojdali għas-sejbien tas-sigurtà tal-ikel?
konklużjoni

X'inhi l-immunokromatografija?

Immunokromatografija (analiżi immu-nokromatografika, ICA) huwa tip ġdid ta 'metodu ta' immunoanaliżi li deher fil-bidu tat-tmeninijiet. Huwa immunoanaliżi sempliċi u veloċi stabbilita fuq il-bażi ta 'immunofiltrazzjoni (IFA).

Il-prinċipju tal-immunokromatografija

Il-prinċipju tal-immunokromatografija huwa li tiffissa antikorp speċifiku fuq ċerta żona tal- membrana tan-nitroċelluloża. Meta t-tarf nitrocellulose niexef ikun mgħaddas fil-kampjun (analyte), minħabba azzjoni kapillari, il-kampjun se jimxi 'l quddiem tul il-membrana, meta jiċċaqlaq lejn iż-żona fejn l-antikorp huwa ffissat, l-antiġen korrispondenti fil-kampjun jorbot speċifikament mal-antikorp . Jekk imtebba 'b'immunogold jew immunoenzima, iż-żona tista' turi faxxa tal-kulur biex tinkiseb immunodijanjosi speċifika.

Il-metodu ta 'analiżi komuni fl-immunokromatografija

Radjuimmunoassaġġ (RIA)

It-teknoloġija RIA tuża antiġeni jew antikorpi ttikkettati b'isotopi radjuattivi (bħal 125I, zhi32P, 3H, eċċ.) Biex tkejjel ir-radjuattività tar-raġġi γ jew tar-raġġi β b'detekter tar-raġġi γda jew kontatur ta 'xintillazzjoni likwida biex tiddetermina l-antikorpi Jew il-volum ta' antiġen teknoloġija. Tinkludi analiżi tar-radjuimmuno kkaratterizzata minn antiġen ittikkettat u analiżi immunoradjometrika (IRMA) ikkaratterizzata minn antikorp ittikkettat. L-ewwel juża prinċipalment il-metodu ta 'rbit kompetittiv tal-fażi likwida, li jkejjel kemm antiġeni makromolekulari kif ukoll antiġeni ta' molekuli żgħar; dan tal-aħħar juża metodu ta 'fażi solida biex ikejjel antiġeni makromolekulari.

L-RIA tokkupa proporzjon kbir fil-metodi ta 'immunoanaliżi tal-pestiċidi stabbiliti kmieni, u stabbiliet ir-radjazzjoni ta' dieldrin, aldrin, 2,4-D u 2,4,5-T, parathion u paraquat. Immunoassay. Għalkemm dan il-metodu huwa sensittiv ħafna (l-RIA ġeneralment hija 10-9g, 10-12g, jew saħansitra 10-15g) u għandha firxa wiesgħa ta 'applikazzjonijiet, huma meħtieġa bankijiet għoljin biex iwettqu RIA, u hemm ukoll problemi bħar-radjazzjoni u t-tniġġis . L-applikazzjoni u l-iżvilupp tal-qasam ta 'skoperta huma soġġetti għal ċerti restrizzjonijiet, u huma sostitwiti gradwalment b'metodi oħra ta' immunoassay.

Immunoassaġġ enzimatiku (enżima immunoanaliżi, EIA)

L-EIA hija teknoloġija tal-immunoanaliżi żviluppata wara l-RIA. Il-prinċipju ta 'skoperta huwa simili għal dak tar-radjuimmunoanaliżi, iżda t-tikketta użata hija enzima, li organikament tgħaqqad ir-reazzjoni immuni speċifika ta' antiġeni u antikorpi mal-katalisi ta 'effiċjenza għolja ta' enzimi. L-attività ta 'l-enżima marbuta mal-fażi solida hija mkejla biex tiddetermina l-Kejjel l-ammont ta' sustanza. L-enzimi użati bħala markaturi jinkludu horseradish peroxidase (HRP) u alkaline phosphatase (AKP), glucose oxidase (GO), urease (urease) eċċ.

L-appoġġ solidu għar-reazzjoni tat-tikkettar ta 'l-enżimi jinkludi tubi u membrani tal-plastik tal-polistirene. Fil-preżent, il-biċċa l-kbira tal-pjanċi tal-mikrotitrazzjoni ta ’96 bir (MTP) jintużaw bħala appoġġ solidu. Dan it-tip ta 'pjanċa għandha kapaċità kbira ta' skoperta u numru kbir ta 'kampjuni, u qarrej sempliċi tal-mikropjastri biss jista' jikseb dejta preċiża ta 'skoperta. Xi studjużi jużaw ukoll żibeġ manjetiċi bħala materjali tal-fażi solida għar-riċerka tal-EIA. Il-prinċipju huwa li tgeżwer materjali tal-polimeru (polistirene, polyvinyl chloride, eċċ.) Fuq barra ta 'partiċelli żgħar tal-metall (Fe2O3, Fe3O4), u mbagħad tgħaqqad kimikament ma' gruppi amino. (-NH2), carboxyl (-COOH), hydroxyl (-OH) u gruppi attivi oħra huma akkoppjati ma 'antikorpi jew antiġeni biex jagħmlu żibeġ immuni. Il-vantaġġi ta 'dan il-metodu huma li l-mikrożibeġ għandhom erja speċifika kbira tal-wiċċ, kapaċità qawwija ta' assorbiment, u jistgħu jiġu sospiżi fil-fażi likwida biex jaqbdu malajr u b'mod uniformi l-analite fil-kampjun. Wara l-applikazzjoni ta 'kamp manjetiku, il-mikrożibeġ jistgħu jiġu separati mis-soluzzjoni tal-kampjun malajr, u b'hekk inaqqsu l-iskoperta. Ħin, ittejjeb is-sensittività tal-iskoperta.

Minħabba li r-reaġenti ttikkettati bl-enżimi huma faċli biex jiġu ppreparati, stabbli u rħas, u s-sensittività ta 'l-immunoanaliżi ta' l-enżimi hija qrib dik tat-teknoloġija radjoimmuni, it-teknoloġija EIA żviluppat malajr f'dawn l-aħħar snin, u ġew żviluppati varjetà ta 'metodi EIA. Fosthom, assaġġ immunosorbent marbut ma 'enżimi (assaġġ immunosorbent enzimatiku, ELISA) bħalissa huwa t-teknika l-iktar użata ta' immunoassay ta 'enżima fis-sejbien ta' residwi ta 'pestiċidi.

Immunoanaliżi tal-fluworexxenza (immunoanaliżi tal-fluworexxenza, FIA)

Il-prinċipju bażiku tas-sejbien tal-FIA huwa li jgħaqqad b'mod organiku l-ispeċifiċità għolja tal-antiġeni u l-antikorpi mal-kejl sensittiv tal-fluworexxenza, u juża sustanzi fluworexxenti bħala traċċaturi biex jittikkettja antikorpi, antiġeni jew molekuli hapten biex jippreparaw reaġenti fluworexxenti speċifiċi ta 'kwalità għolja. Meta s-sustanza fluworexxenti fil-konjugat antiġen-antikorp tkun irradjata minn dawl ultravjola jew dawl blu, tista 'tassorbi l-enerġija ħafifa u tidħol fi stat eċċitati. Meta terġa 'lura għall-istat ta' l-art mill-istat eċċitat, tista 'tarmi l-enerġija tad-dawl assorbita fil-forma ta' radjazzjoni elettromanjetika, li tirriżulta fi fluworexxenza. It-tpinġija tal-kurva tal-konċentrazzjoni tal-pestiċidi-intensità tal-fluworexxenza tista 'tidentifika b'mod kwalitattiv u kwantitattiv ir-residwi tal-pestiċidi fil-kampjuni.

Fluworexxina adattata għat-tikkettar ta 'antikorpi, antiġeni jew molekuli hapten għandha tissodisfa r-rekwiżiti:

  1. Għandu jkollu grupp kimiku li jista 'jifforma rabta kovalenti stabbli mal-molekula tal-proteina, jew jinbidel faċilment f'dan it-tip ta' reazzjoni mingħajr ma jeqred l-istruttura fluworexxenti tagħha;
  2. Wara t-tikkettar, l-istruttura kimika u l-proprjetajiet tal-fluworexxina u l-antikorp jew l-antiġen ma jinbidlux;
  3. L-effiċjenza tal-fluworexxenza hija għolja, u r-rekwiżit għall-irbit mal-proteina huwa żgħir;
  4. Il-proċess ta 'twaħħil tal-fluworexxina mal-proteina huwa sempliċi u veloċi, u l-fluworexxina ħielsa u l-prodotti ta' degradazzjoni tagħha jitneħħew faċilment;
  5. Il-konjugat għandu prestazzjoni stabbli taħt kondizzjonijiet ta 'ħażna ġenerali u jista' jinħażen għal żmien twil.

Immunoanaliżi ta 'kemiluminixxenza (immunoanaliżi luminixxenti, LCIA)

LCIA jista 'jinqasam f'immunoanaliżi kimiluminixxenti (immunoanaliżi kimiluminixxenti, CLCIA) u immunoanaliżi bijo-luminixxenti (immunoanaliżi bijo-luminixxenti, BLCIA).

Fl-1976, Shroeder l-ewwel stabbilixxa teknoloġija omoġenja ta 'immunoanaliżi ta' kimiluminixxenza bl-użu tas-sistema tal-bijotina (B) -avidin (A). Wara, Halman u Velan estendewh għal sistemi eteroġenji, li issa ġew infiltrati fir-riċerka bijoloġika. Diversi oqsma. Il-prinċipju huwa li tindika l-kombinazzjoni ta ' antiġen u antikorp bil-luminixxenza. Meta t-tikketta luminixxenti hija kkombinata ma 'l-antikorp jew l-antiġenu korrispondenti, is-sottostrat jirreaġixxi ma' l-enżima, jew reazzjoni redox ma 'l-aġent luminixxenti, jew is-sustanza fluworexxenti (bħal rubrene, eċċ.) Eċċita u tirrilaxxa l-enerġija ħafifa. Fl-aħħarnett, l-intensità luminuża ġiet imkejla b'fotometru għal analiżi kwantitattiva. Markers luminixxenti użati komunement huma horseradish peroxidase (HRP), luminol (luminol), isoluminol (isoluminol), lophine (lophine), lucigen (lucigen), double (2, 4, 6) -Trichlorobenzene) oxalate, biphenyltriol u 6 [N- (4-diaminobutyl) -N-ethyl] -amino-2,3-dihydrophenazine-1,4-dione (ABEI) eċċ. Meta l-antikorp (jew antiġen) ittikkettjat bil-markatur luminixxenti msemmi hawn fuq huwa kkombinat ma 'l-antiġenu korrispondenti (jew antikorp) f'ċerta soluzzjoni buffer tal-pH, joħroġ dawl taħt l-azzjoni ta 'fattur li jikkoopera (bħal H2O2, eċċ.), u l-intensità luminuża tiegħu tkun l-istess bħal dik tas-sustanza tat-test. Huwa proporzjonali għall-konċentrazzjoni, u għalhekk jista 'jintuża għal analiżi kwantitattiva.

L-immunoanaliżi tal-luminixxenza għandha l-vantaġġi ta 'speċifiċità qawwija, sensittività għolja (limitu ta' sejbien ta '10-15mol / L), mgħaġġel (1 ~ 3h), u disponibbiltà faċli ta' materjali luminixxenti. Madankollu, il-proċess u l-intensità tal-luminixxenza tiegħu huma spiss affettwati mill-istruttura kimika tas-sustanza luminixxenti nnifisha, il-pH tal-mezz, is-sustanza ko-luminixxenti u l-impuritajiet tal-jone tal-metall.

Analiżi tal-immunokromatografija tad-deheb (analiżi tad-dehebimmuno-kromatografija, GICA)

Il-prinċipju tas-sejbien GICA huwa li tiksi l-ligands (antikorpi jew antiġeni) fuq membrana mikroporuża bħal membrani nitroċellulożi f'forma lineari. It-tikketta tad-deheb kollojdali hija mwaħħla wkoll b'ligands jew sustanzi oħra fi stat xott fuq il-materjal assorbenti. Azzjoni kapillari tikkawża li s-soluzzjoni tal-kampjun tgħum fuq l-istrixxa kromatografika. Meta jgħum sal-markatur tad-deheb kollojdali, jekk il-kampjun ikun fih ir-riċettur li għandu jiġi ttestjat, l-ewwel pass huwa rispons immuni speċifiku ħafna biex jifforma kumpless immuni Meta s-sustanza tkompli tgħum għaż-żona tal-kisi lineari, it-tieni pass ta ’ jseħħ rispons immuni speċifiku, u l-kumpless immuni ffurmat jinqabad fiż-żona lineari miksija, u l-faxxa ħamra tidher mid-deheb kollojdali ttikkettjat (Banda ta 'skoperta), filwaqt li t-tikketta ħielsa taqsam il-faxxa ta' skoperta u hija awtomatikament separata mit-tikketta marbuta . Determinazzjoni kwalitattiva jew kwantitattiva tista 'tinkiseb billi tiġi skoperta l-preżenza jew in-nuqqas ta' kulur jew l-isfumatura tal-kulur fuq iċ-ċinturin2.

Kxif ta 'Kitt tat-Test tad-Deheb Kollojdali

Il-metodu GICA għandu l-vantaġġi ta 'riżultati mgħaġġla (5-20min), irħas, ċari, mingħajr ħiliet ta' operazzjoni kkumplikati u tagħmir speċjali, u faċli biex iġġorr. Madankollu, meta mqabbel ma 'metodi oħra ta' immunoanaliżi, is-sensittività ta 'skoperta ta' dan il-metodu hija kemmxejn aktar baxxa, u hija adattata prinċipalment għal determinazzjoni rapida kwalitattiva jew semi-kwantitattiva fuq il-post. Fil-preżent, dan il-metodu ntuża f'ħafna oqsma ta 'riċerka bħall-mediċina u l-bijoloġija, u intuża ħafna b'mod speċjali f'pajjiżi żviluppati.

Teknoloġija kombinata ta 'immunoassay u teknoloġija ta' analiżi strumentali

L-użu ta 'teknika IA waħda biex janalizza r-residwi tal-pestiċidi għandu inqas informazzjoni, u s-selettività tal-metodi ta' analiżi fiżika u kimika hija relattivament fqira. Kramer et al. uża immunoassaġġi u kromatografija likwida (LC) flimkien, u b'hekk tissimplifika l-metodu ta 'analiżi u ttejjeb l-effiċjenza ta' skoperta. Il-kombinazzjoni ta 'LC-IA tgħaqqad il-kapaċità ta' separazzjoni għolja ta 'LC mas-sensittività għolja u l-ispeċifiċità għolja ta' IA. Dan il-metodu ta 'analiżi huwa adattat b'mod speċjali għal analiżi ta' residwi b'ħafna komponenti u mikroanaliżi. Il-kombinazzjoni ta 'immunoassay u kromatografija tal-gass jew spettrometrija tal-massa (GC jew MS) tista' tnaqqas ir-reazzjonijiet inkroċjati fl-analiżi ta 'pestiċidi jew metaboliti bi strutturi simili biex tnaqqas il-pożittivi foloz.

Il-partiċelli kkuluriti komunement użati fl-immunokromatografija

Nanopartiċelli tad-deheb kollojdali
Partiċella tal-lattiċe
Partiċella tal-karbonju
Żibeġ manjetiku
Żebgħat fluworexxenti
Punti kwantistiċi
Konverżjoni luminixxenti

X'inhu deheb kollojdali?

partiċella-deheb kollojdali
partiċella-deheb kollojdali

Deheb kollojdali, magħrufa wkoll bħala nanopartiċelli tad-deheb, hija sospensjoni stabbli, uniformi u mxerrda waħda ta ’partiċelli tad-deheb sospiżi f’likwidu wara li l-melħ tad-deheb jitnaqqas għal deheb. Il-partiċelli tad-deheb huma magħmula minn atomu tad-deheb u saff ta 'jone doppju li jdawruh.

Il-kulur tas-soluzzjoni jiddependi fuq il-kulur tal-materjal tal-fażi mxerrda, it-tixrid tal-materjal tal-fażi mxerrda, u t-tip ta 'dawl inċidentali, kemm jekk huwa dawl imxerred jew dawl trasmess. Iktar ma jkunu żgħar il-partiċelli u iktar ma tkun għolja d-dispersjoni, iktar ikun iqsar il-wavelength tad-dawl imxerred. Għall-idrosol tal-istess sustanza, id-daqs tal-partikula huwa differenti, u l-kulur huwa wkoll differenti.

Pereżempju, id-daqs tal-partiċelli tad-deheb kollojdali bejn 5-20 nm, il-wavelength ta 'assorbiment ta' 520 nm, huma kulur inbid aħmar; id-daqs bejn 20-40 nm prinċipalment jassorbi d-dawl aħdar bil-wavelength ta '530 nm, u s-soluzzjoni hija aħmar skur; il-partiċella tad-deheb kollojdali ta '60 nm prinċipalment tassorbi l-wavelength 600 nm tad-dawl oranġjo, is-soluzzjoni hija blu-vjola. Il-partikoli kollojdali tad-deheb ġeneralment użati fl-immunoistokimika huma fil-medda ta '5-60 nm, u s-soluzzjoni tidher ħamra.

Il-metodu ta 'analiżi tat-3 tipi bbażat fuq immunokromatografija tad-deheb kollojdali

L-iktar partiċella kkulurita popolari hija nanopartiċelli tad-deheb. Teknoloġija tad-deheb kollojdali li tgħaqqad ir-rispons immuni antiġen-antikorp u teknoloġija ta ’tikkettar tad-deheb kollojdali għall-iskoperta kwalitattiva u kwantitattiva tal-kontenut ta’ antiġen u antikorp. Minħabba l-vantaġġi tiegħu bħal ħeffa, sempliċità, spiża baxxa u stabbiltà tajba, l-iskoperta tad-deheb kollojdali intużat ħafna fil-qasam tal-iskoperta klinika.

Fil-preżent, il-metodi ta 'skoperta użati b'mod komuni ta' pjattaformi ta 'skoperta ta' deheb kollojdali jinkludu metodu sandwich ta 'antikorp doppju, metodu ta' kompetizzjoni u metodu indirett. Hemm differenzi kbar bejn il-metodu tal-analiżi u l-analiti.

Metodu ta 'Sandwich b'Antikorp Doppju

Il-metodu sandwich ta 'antikorpi doppji huwa l-iktar metodu ta' skoperta użat komunement għal pjattaformi ta 'skoperta ta' deheb kollojdali, li jintuża prinċipalment biex jidentifika bijomolekuli relattivament kbar u antiġeni partikulati. Il-metodu sandwich ta 'antikorp doppju jeħtieġ preparazzjoni ta' l-antikorp imqabbel ta 'l-antiġen li għandu jiġi ttestjat. Antikorp wieħed huwa ttikkettat b'deheb kollojdali u ffissat fuq il-kuxxinett konjugat, u l-antikorp l-ieħor huwa ffissat fuq il-linja ta 'skoperta (linja T) tal-membrana NC. Barra minn hekk, huwa meħtieġ li tipprepara antikorp sekondarju li jeħel speċifikament mal-antikorp ittikkettat bid-deheb (jiġifieri, antikorp kollojdali ttikkettat bid-deheb) u ffissah fuq il-linja tal-kontroll (linja C) tal-membrana NC.

immunoanaliżi tal-fluss laterali
immunoanaliżi tal-fluss laterali
strixxa tal-fluss laterali

Meta l-kampjun ikun ġie miżjud ma 'l-istrixxa, se jimxi lejn il-kuxxinett tal-kampjun, kuxxinett konjugat, linja T, linja C u kuxxinett assorbenti (kuxxinett wicking) f'sekwenza permezz tal-prinċipju tal-fluss kapillari. Ir-reazzjoni ta 'kull stadju tidher fit-tabella li ġejja:

Kampjun taċ-ċaqliq tat-T konjugatMudell tal-kampjun għal-linja T.Kampjun jimxi għal-linja C.Riżultat
Anaylte fih antiġenL-antiġen maqbud tal-antikorp ittikkettjat bid-deheb, isir kumplessL-antikorp ta 'linja fissa fuq T ser jaqbad il-kumpless u l-faxxa tal-kulur tkun viżibbliL-antikorp sekondarju jaqbad l-antikorp ittikkettjat bid-deheb u l-faxxa tal-kulur viżibbliŻewġ linji viżibbli
Anaylte mingħajr antiġenL-ebda reazzjoniL-ebda bidla fil-kulurL-istess hawn fuqLinja C viżibbli biss

Għalhekk, meta żewġ linji ħomor jintwerew fuq strixxa, dan ifisser li s-sustanza li għandha tiġi ttestjata fil-kampjun hija pożittiva; meta hemm biss linja C fuq strixxa, dan ifisser li s-sustanza li għandha tiġi ttestjata fil-kampjun hija negattiva. Il-konċentrazzjoni għolja tas-sustanza għandha strixxa tal-kulur aktar b'saħħitha tal-linja T.

Metodu tal-Kompetizzjoni

Antiġeni ta 'molekula żgħira huma diffiċli biex jippreparaw antikorpi mqabbla (piż molekulari żgħir wisq, huwa diffiċli li ssib żewġ siti li jorbtu għal żewġ antikorpi biex jorbtu fl-istess ħin), għalhekk antiġeni ta' molekula żgħira ma jistgħux jiġu skoperti b'metodu sandwich doppju ta 'antikorpi. Għal antiġeni ta 'molekuli żgħar, ġeneralment uża l-metodu ta' kompetizzjoni għall-analiżi.

Fil-metodu tal-kompetizzjoni, l-antikorp bit-tikketta tad-deheb huwa ffissat fuq il-kuxxinett o, u l-linja T fuq il-membrana NC hija ffissata bl-antiġen akkoppjat makromolekulari li għandu jiġi ttestjat (antiġeni ta 'molekula żgħira ma jistgħux jiġu ffissati direttament fuq il-membrana NC. Għalhekk , huwa meħtieġ li kimikament jgħaqqad molekuli żgħar ma 'BSA u sustanzi makromolekulari oħra u mbagħad immobilizzahom fuq il-membrana NC). It-tieni antikorp li jista 'jingħaqad speċifikament mal-antikorp ittikkettat bid-deheb huwa immobilizzat fuq il-linja Ċ.

żvilupp tal-assaġġ tal-fluss laterali
żvilupp tal-assaġġ tal-fluss laterali
apparat tal-fluss laterali
apparat tal-fluss laterali

Meta l-kampjun ikun ġie miżjud ma 'l-istrixxa, se jimxi lejn il-kuxxinett tal-kampjun, kuxxinett konjugat, linja T, linja C u kuxxinett assorbenti (kuxxinett wicking) f'sekwenza permezz tal-prinċipju tal-fluss kapillari. Ir-reazzjoni ta 'kull stadju tidher fit-tabella li ġejja:

Kampjun taċ-ċaqliq tat-T konjugatMudell tal-kampjun għal-linja T.Kampjun jimxi għal-linja C.Riżultat
Anaylte fih antiġenL-antiġen maqbud tal-antikorp ittikkettjat bid-deheb, isir kumplessL-ebda antiġen ma jista 'jinqabad. L-ebda faxxa tal-kulurL-antikorp sekondarju jaqbad l-antikorp ittikkettjat bid-deheb u l-faxxa tal-kulur viżibbliLinja C viżibbli biss
Anaylte mingħajr antiġenL-ebda reazzjoniAqbad l-antikorp immarkat bid-deheb u l-faxxa tal-kulur viżibbliL-istess hawn fuqŻewġ linji viżibbli

Għalhekk, meta żewġ linji ħomor jintwerew fuq strixxa, dan ifisser li s-sustanza li għandha tiġi ttestjata fil-kampjun hija negattiva; meta hemm biss linja C fuq strixxa, dan ifisser li s-sustanza li għandha tiġi ttestjata fil-kampjun hija pożittiva. Il-konċentrazzjoni għolja tas-sustanza għandha strixxa tal-kulur aktar b'saħħitha tal-linja T.

Metodu indirett

Il-metodu indirett jintuża prinċipalment biex jinstabu antikorpi. Jekk metodu indirett, il-kuxxinett konjugat imwaħħal mal-proteina A ttikkettat bid-deheb kollojdali (Il-Proteina A tista 'torbot ma' l-antikorp b'mod mhux speċifiku). Il-linja T fuq il-membrana NC hija ffissata b'antiġen li jista 'jingħaqad speċifikament ma' l-antikorp li għandu jiġi ttestjat, u l-linja C fuq il-membrana NC hija ffissata b'antikorp anti-Proteina A.

test immunokromatografiku
test immunokromatografiku
strixxa tal-fluss laterali

Meta l-kampjun ikun ġie miżjud ma 'l-istrixxa, se jimxi lejn il-kuxxinett tal-kampjun, kuxxinett konjugat, linja T, linja C u kuxxinett assorbenti (kuxxinett wicking) f'sekwenza permezz tal-prinċipju tal-fluss kapillari. Ir-reazzjoni ta 'kull stadju tidher fit-tabella li ġejja:

Kampjun taċ-ċaqliq tat-T konjugatMudell tal-kampjun għal-linja T.Kampjun jimxi għal-linja C.Riżultat
Anaylte fih antikorpProteina A ttikkettjata Deheb A antikorp maqbud, issir kumplessaAntikorp li jaqbad l-antiġen, faxxa tal-kulur viżibbliProteina A maqbuda mill-antikorp anti-proten A u l-faxxa tal-kulur viżibbliŻewġ linji viżibbli
Anaylte mingħajr antikorpL-ebda reazzjoniL-antiġen ma jistax jaqbad l-antiġen, il-kulur ma jinbidelL-antikorp ittikkettat bid-deheb maqbud minn antikorp sekondarju, faxxa tal-kulur viżibbliLinja C viżibbli biss

Għalhekk, meta żewġ linji ħomor jintwerew fuq strixxa, dan ifisser li s-sustanza li għandha tiġi ttestjata fil-kampjun hija pożittiva; meta hemm biss linja C fuq strixxa, dan ifisser li s-sustanza li għandha tiġi ttestjata fil-kampjun hija negattiva. Il-konċentrazzjoni għolja tas-sustanza għandha strixxa tal-kulur aktar b'saħħitha tal-linja T.

Il-materja prima użata fl-iżvilupp tal-immunokromatografija

  1. Antiġenu u antikorp
  2. Albumina tas-Serum tal-Bovini
  3. Fluss laterali tal-karta ta 'rinforz
  4. Membrana tan-nitroċelluloża
  5. Kampjun tal-kampjun (Wicking Pad)
  6. Kuxxinett konjugat
  7. Kuxxinett assorbenti
  8. Membrana tas-separazzjoni tad-demm (għażla)
  9. Kaxxa tal-cassette (għażla)

It-tagħmir użat fl-iżvilupp tal-immunokromatografija

  1. Sistema ta 'tqassim robotiku (Dispensor)
  2. Cutter tal-istrixxa għal strixxa tal-analiżi tal-fluss laterali
  3. Mikropipetta
  4. Freeze dryer bil-vakwu
  5. Forn tal-vakwu
  6. Ċentrifuga mkessħa b'veloċità għolja
  7. Sistema ta 'maniġġar ta' likwidi (għażla)
  8. Proċessur tal-kaxxa tal-cassette (għażla)

Il-proċedura tal-manifattura fl-iżvilupp tal-immunokromatografija

  1. Deheb kollojdali ppreparat
  2. Tikkettar tad-deheb kollojdali
  3. Dispensing antiġen jew antikorp għal Membrana tan-nitroċelluloża
  4. Membrana nitrocellulose jeħel mal karta ta' appoġġ
  5. Kuxxinett tal-laminat konjugat fuq il-karta ta 'wara
  6. Kuxxinett tal-kampjun laminat fuq il-karta ta 'wara
  7. Kuxxinett assorbenti tal-laminat fuq il-karta ta 'wara
  8. Tikketta tal-Logo Stick fuq pad assorbenti (għażla)
  9. Qtugħ tal- folja mhux maqtugħa fi strixxi
  10. Tagħbija strixxi fil-borża jew flixkun tal-fojl
  11. Ippakkjar f'kaxxa

Aktar dettalji, jekk jogħġbok irreferi għal Kif Tiżviluppa Test Rapidu ta 'Analiżi tal-Fluss Laterali?
Kif awtomatizza l-assemblaġġ għal test rapidu?

Kif tuża immunokromatografija tad - deheb kollojdali għal sigurtà fl-ikel sejbien?

Immunokromatografija tad-deheb kollojdali użat ħafna fl-ittestjar tal-ikel għal ħafna snin. Pereżempju, kif test tal-ħalib taħdem fuq residwi ta 'antibijotiċi fil-ħalib nej?

Il-mediċina antibijotika hija molekula żgħira, allura, l-analiżi tagħżel metodu ta 'kompetizzjoni. X'inhu l-mekkaniżmu ta 'reazzjoni?

Ejja naraw l-istruttura tal-istrixxa:

assaġġ tal-fluss laterali
assaġġ tal-fluss laterali
nanopartiċelli tad-deheb
nanopartiċelli tad-deheb

Id - deheb kollojdali ttikkettat antikorp lijofilizzat fi pjanċi tal-bir. Separazzjoni mill-istrixxa, żid il-ħin ta 'inkubazzjoni u ttejjeb is-sensittività għall-iskoperta.

Mekkaniżmu ta 'reazzjoni ta' fluss laterali

teknoloġija tal-fluss laterali
teknoloġija tal-fluss laterali
immunokromatografija
immunokromatografija

Fil-Kampjun Pożittiv:

  1. Ħu kampjun tal-ħalib nej u żid fil-mikro-bjar
  2. Jekk il-ħalib nej fih molekula żgħira, bħal, beta lactam, tetracycline, chloramphenicol, Sulfonamides, Cephalosporins, Melamine, eċċ.
  3. L-antikorp bit-tikketta tad-deheb (Au-Ab) fil-mikro bjar jaqbad il-molekuli żgħar mill-kampjuni tal-ħalib, isir kumpless ġdid (Au-Ab marbut ma 'molekula żgħira).
  4. Filwaqt li l-kumpless jimxi lejn il-pożizzjoni tal-linja T, m'hemm l-ebda pożizzjoni għall-antiġen BSA (l-antiġen li ffissat fuq T lin) biex jiġi konjugat, minħabba li d-deheb-nanopartiċella diġà konjugat ma 'molekuli żgħar, għalhekk, il-faxxa tal-kulur ma tinbidilx.
  5. L-antikorp sekondarju li ffissat fuq il-linja C se jaqbad l-antikorp ittikkettat bid-deheb u l-faxxa tal-kulur viżibbli.
  6. Ir-riżultat ikun pożittiv.

Fil-Kampjun Negattiv:

  1. L-antikorp bit-tikketta tad-deheb (Au-Ab) ma jistax jaqbad molekuli żgħar minn ħalib nej, iżda se jinqabad mill-antiġen tal-linja T, imbagħad il-faxxa tal-kulur tidher.
  2. L-antikorp sekodarju tal-linja C għadu jaqbad l-antikorp bit-tikketta tad-deheb (Au-Ab), il-faxxa tal-kulur viżibbli.

L-interpretazzjoni

Il-metodu kolorimetriku għall-interpretazzjoni tat-test tal-ħalib. Il-linja tat-test tqabbel mal-linja tal-kontroll biex tiddetermina riżultat pożittiv jew negattiv. Waqt il-manifattura biex tikkontrolla l-kwantità ta 'Au-Ab biex tikseb analiżi kolorimetrika.

konklużjoni

Immunokromatografija hija teknoloġija ta 'analiżi popolari ħafna, użata ħafna fi prodotti dijanjostiċi in vitro, mhux biss użata fl-ittestjar tal-ikel. Sepzjalment fl-analiżi tal-fluss laterali, l-analiżi tal-immunokromatografija tad-deheb kollojdali m'hemmx bżonn ta 'tagħmir li jiswa ħafna flus, eays biex tużah, spiża orħos biex tgħin lill-bniedem jgħix aħjar, pereżempju, test tat-tqala fid-dar.

Referenza:

Kif Tibda Manifattura Covid 19 Test Kit

Karigi riċenti

SIGURTÀ FL-IKELTEST TAL-MIKOTOXINATEST TAL-PESTIĊIDITEST TAL-GĦASELTEST TAL-ĦALIBTEST TAL-BAJDIMMANIĠJAR TAL-LIKWIDU
Kburi ddisinjat minn BALLYA
linkedin Facebook Pinterest YouTube RSS twitter Instagram facebook-vojt rss-vojt linkedin-vojt Pinterest YouTube twitter Instagram