Aflatoxin, bħala mikotossina, huwa metabolit ta 'fungi prodott meta l - qamħa jew għalf frisk mhix imnixxfa u maħżuna fil-ħin, u teżisti b'mod wiesa '. Minħabba t-tossiċità qawwija u l-karċinoġeniċità tagħha, ġew stabbiliti regolamenti stretti tagħha fl-istandards nazzjonali tal-ikel u l-istandards tal-għalf. Aflatossina M1 jappartjeni għal mikotossina u huwa l-metabolit ta 'idrossilazzjoni ta' aflatossiku B1 fl-annimali. Huwa tossiku ħafna u karċinoġeniku, għandu jkun evitati milli jiżdiedu mal-ikel. Minħabba li huwa ta 'ħsara għal tessut tal-fwied u jistgħu jinduċu allerġiku tal-ħalib u kanċer tal-fwied, kien elenkat bħala karċinoġenu minn WHO Istitut tar-Riċerka dwar il-Kanċer sa mill-1993.
Minħabba l-kontenut baxx u struttura simili ta 'aflatossiku, teħtieġ sensittività għolja u speċifiċità tal-metodu ta' skoperta, li jintegra s-separazzjoni u l-iskoperta. F'dan id-dokument, kromatografija likwida ta 'prestazzjoni għolja (HPLC) kien imdorri janalizza l-aflatossiku. Il-problema ta 'kontenut baxx ta' aflatossiku ġiet megħluba, u nkiseb riżultat ta 'sensittività għolja.
Trattament minn qabel tal-kampjun
It-trab tal-ħalib minn swieq tal-ħalib jittieħed 5g u jitqiegħed fi flixkun tal-kejl ta '100mL. It-trab tal-ħalib jinħall billi jiżdied 20 mL ilma sħun f'50 grad Celsius biex jagħmilha oxxillata għat-30S. Il-klorur tas-sodju huwa miżjud biex jagħmilha tinħall billi joxxilla għal 2g. Il-50 mL acetonitrile huwa miżjud biex joxxilla għat-30S. Wara t-taħlit, l-aċetonitril huwa miżjud mal-flixkun biex jilħaq l-iskala. L-oxxillazzjoni tal-iscroll tagħmilha omoġenja. Filtrazzjoni, 40 mL ta 'filtrat, 40 C fluss ta' nitroġenu 'l isfel sa kważi niexef. Ir-residwu nħall billi żdied 20 mL 10% acetonitrile. Il-kolonna ta 'affinità ġiet maħsula b'10 mL ilma wara li l-kampjun għadda mill-kolonna ta' affinità kompletament.
Fl-aħħar, intuża 2 mL acetonitrile għall-elużjoni. 1.5 ml ta 'eluwent inġabar u nixef bin-nitroġenu. Żieda ta ’200 uL hexane u 200 uL aċidu trifluworaċetiku, tħawwid u taħlit, reazzjoni f’40 C għal 10 minuti, tneħħija, tnixxif taħt fluss tan-nitroġenu, żieda ta’ 10% acetonitrile 0.5 ml, tħawwad għal 10 sekondi.
kundizzjoni sperimentali
Tip ta 'strument: Dionex Ultimate 3000 Series
Pompa: LPG-3400SD
Kampjunar Awtomatiku: WPS-3000SL
Kaxxa tat-Temperatura tal-Kolonna: TCC-3000RS
Ditekter: FLD
Softwer tal-Kromatografija: Kromatografija tal-Kromeleon Sistema tad-Dejta
Tip ta 'rilevatur, parametri tax-xogħol, u numru S / N:
Ditekter tal-fluworexxenza, FLD-3400
Ħin ta 'rispons = 1
Temperatura FLD FlowCell Nominal = 35.00 [C]
FLD FlowCell ReadyTempDelta = 1.00 [C]
BaselineBehavior = Appendi
Rata tal-Ġbir tad-Dejta Nominali = 10.00 [Hz]
Emissjoni 1. ExWavelength = 365.0 [nm]
Emissjoni 1. Em Wavelength = 435.0 [nm]
Emissjoni 1. Sensittività = 6
Emissjoni 1.PMT = Awtomatiku
Emissjoni 1. FilterWheel = Auto
Kondizzjonijiet kromatografiċi:
Kolonna kromatografika:
Thermo Scientific Hypersil GOLD C18, 5 um, 100 x 2.1 mm Nru 25005-102130
Fażi mobbli:
Volum tal-kampjunar: 20 mL
Veloċità tal-fluss: 800 mL / min
Temperatura tal-kolonna: 25 C
SPETTRU ESPERIMENTALI
Fig. 1 Kromatogram tad-determinazzjoni tal-kampjun (1 ppb flimkien ma 'kromatogramma standard; 2 kampjun vojt tal-kromatogramma)
F'dan id-dokument, Aflatoxin B1, B2, G1, G2, M1 fil-ġulġlien ġew analizzati bl-użu ta 'Thermo Scientific Hypersil GOLD C18, 5 mikroni, kolonna 100 * 2.1 mm, derivatizzazzjoni ta' qabel il-kolonna flimkien ma 'ditekter tal-fluworexxenza. Inkisbu riżultati tajbin, separazzjoni u sensittività għolja.
Għal aktar kitts relatati ta 'skoperta ta' mikotossini, jekk jogħġbok ikklikkja hawn.