Te wa pono kaupapa PCR
Hangahanga Aetamiprid
Ko te PCR rerenga nui tonu te tikanga he tikanga mo te ine i te katoa o nga hua i muri i ia huringa o te tauhohenga mekameka polymerase (PCR) e whakamahi ana i nga matū piu i roto i te urupare DNA whakakaha. He tikanga mo te wetewete rahinga o nga raupapa DNA motuhake i roto i te tauira hei whakamatautau ma nga tikanga tohutoro a roto, a waho ranei.
Ko te PCR mo te wa-roa ko te kitenga tuuturu o te mahi PCR na roto i te tohu tohu rererangi i te wa o te whakarahi PCR. Na te hononga honohono i waenga i te uara Ct o te tauira me te nama kape tuatahi o te tauira i roto i te waa whakapiki o te whakanui PCR, ka waiho hei kaupapa mo te rahinga.
Ko te maataapono o te hangarau PCR he rite ki te tikanga tukurua o te DNA, ana ko te motuhake ki te oligonucleotide primers taapiri ki nga pito e rua o te raupapa whaainga.
Kaiwhakamahara PCR
Kete PCR tae atu ki te tauira waikawa waikawa purea, deoxyribonucleotide (dNTP), oligonucleotide primers me DNA polymerase. Ko te purea waikawa karihi me te aromatawai kounga he mea nui ki te mahi whakamatautau PCR. He mea nui ki te whakamahi i nga tikanga tika hei wehe me te pure i nga waikawa ngako mai i nga rauemi mata, na te mea ka whai hua tenei ki te uruparenga whakarei.
Ko te polymerase DNA te kaiwhakapiki i te taapiri o nga dNTP ki nga whenu DNA whanui ma te taapiri i nga turanga hei taapiri ki te whenu tauira. Ko te tautuhi i nga polymerases DNA wera me nga whakarereketanga o muri ki enei whākōkī he wāhi nui ki te whanaketanga me te whānuitanga o te whakamahinga o te urupare PCR.
Tauhohenga PCR
E rima nga huanga o te tauhohenga PCR: E rima nga momo matū e uru ana ki te urupare PCR: primers (PCR primers he kongakonga DNA, a ko nga mea tuatahi mo te tukurua DNA i roto i te puoro he whenu RNA), nga haehae, dNTPs, tauira me nga paruru ( Tuhinga o mua.
Taahiraa PCR
Ko te mahinga PCR paerewa kua wehea kia toru nga waahanga:
Te whakahekenga o te DNA: (90 ℃ -96 ℃): Tuarua taatai taatai DNA i raro i te mahi o te wera, ka pakaru te hononga hauwai hei hanga i te DNA takitahi-paea.
Whakakapi: (60 ℃ -65 ℃): Ka whakaitihia te paahana o te punaha, ka honoa nga primers me te tauira DNA hei hanga whenu takirua takirua.
Toronga: (70 ℃ -75 ℃): I raro i nga mahi a te Taq enzyme (tata ki te 72 ℃, te mahi tino pai), ka whakamahia te dNTP hei rauemi mata, ka tiimata mai i te pito 3 o te tuatahi me te toro atu mai i te 5 → 3 'mutunga. Whakahuahia nga aho DNA hei taapiri ki te tauira.
Ko ia huringa e whai kiko ana, e honoa ana, e whakaroa ana, ana e ruarua ana te kiko o te DNA. I etahi PCR he rohe whakarei poto, ahakoa kaore i tino pai te ngoikoretanga Taq, ka taea te mahi i roto i te wa poto, kia taea ai te whakarereke ki te tikanga e rua-taahiraa, ara, te honohono me te whakaroanga kawea i te 60 ℃ -65 ℃ i te wa ano. Hei whakaiti i te pikinga o te pāmahana me te hinganga o te tukanga, kua kaha ake te tere tauhohenga.
Nga hua PCR me te wetewete PCR
1. Mena he he piupiu paerewa bai, tatau kia rite ki te kopiko paerewa. du
2. Te tikanga, ko te rahinga whanaunga ka taatauhia e te tikanga delta delta CT.
3. Ko nga tauira e whai ake nei: ko te uara CT o te ira A i te roopu whakahaere dao ko te 20, me te uara CT o te whakahaere a-roto (penei i te βactin) ko te 15. Ko te uara CT o te ira A i te roopu whakamatau ko 18, a ko te uara CT o te tohutoro o-roto 14.
4. Tatau i te waahanga tauira tuatahi: delta CT = 15-14 = 1. Ko te mana o te 2 Ko te 2. I etahi atu kupu, ko te rahinga tauira o te roopu whakamatau e rua atu i te roopu whakahaere. Gene A: huringa CT = 20-18 = 2. Ko te mana o te 2 ko 4. I etahi atu kupu, ko te rahinga o te ira A i te roopu whakamatau e 4 nga wa i te roopu whakahaere. Heoi, na te mea ko te nui o te tauira kua taapirihia he rua, no reira 4 = 2 = 2, ko te moni whanaunga whakamutunga ko te 2 wa.
5. He tohu noa: Ko te tikanga mo te whakarahinga me whakatau. Ko te uara CT o taua kaupapa ano ka taea te tango (kia rereke te kaha o te whakarei ake). Ko te mana o te 2 ko te uara noa o te ariā, ko te tino whakareatanga ka iti ake i te 2. Syber Green.
Nga tono PCR
Ko te tikanga ka whakamahia te PCR ki nga waahanga e whai ake nei:
1. Te rangahau tuuturu mo te waikawa ngota: te whakatauira i te genome
2. PCR hangarite ki te whakarite i te DNA kotahi-paata mo te whakaraupapa DNA
3. Whakamuri PCR ki te whakatau rohe DNA unknown
4. Ko te daoPCR hurihuri whakamuri (RT-PCR) e whakamahia ana kia kitea te taumata whakaputa ira i roto i nga puoro, te nui o te huaketo RNA me te tohu tika i te cDNA o nga ira motuhake
5. Fluorescence PCR nui e whakamahia ana mo te tirotiro i nga wa-katoa o nga hua PCR
6. Te tere o te whakanui i te cDNA ka mutu
7. Te kitenga o te whakaputa ira
8. Nga tono hauora: te kite i nga mate kitakita me te mate viral; te whakatau mate mate ira; te tirotiro mate pukupuku; te tono ki nga matakite.
Miihini PCR
Ko te miihini PCR e kiia ana ko te PCR whakatipuranga ira, ko te PCR waikawa waikawa whakakii, polymerase mekameka tauhohenga waikawa whakakii waikawa, he momo taputapu me nga taputapu e whakamahia ana te PCR (tauhohenga mekameka Polymerase, tauhohenga mekameka polymerase) hangarau ki te whakakaha ake i te DNA motuhake Kei te whakamahia whānuitia i roto i nga taiwhanga hauora me te koiora, hei tauira, hei whakatau mena ka whakaatu te tauira i te mapi mate ira, te tirotiro mate whakapeto, te tukuruatanga o te ira, me te whakamatau i te papa.
PCR Inc.
Ko nga Kamupene Nui i Whakauru i te Maakete Tauhokohoko PCR o te Ao ko: Abbott Laboratories,
Agilent Technologies Inc.,
Alere Inc., Asuragen Inc.,
Ropu Biocartis Nv, Biofire Diagnostics LLC. (Tiki e Biomerieux),
Biomerieux Sa,
Bio-Rad Laboratories Inc.,
Cepheid (He Kamupene Danaher),
Genmark Diagnostics Inc.,
Hologic Inc., Luminex Kaporeihana,
Meridian Bioscience Inc.,
Qiagen NV,
Rōpū Quantumdx,
Toka,
Hinengaro Spartan,
T2 Pūnaha koiora
