He aha te rereketanga i waenga i te monoclonal me te polyclonal antibodies?

Tere Tere

• He aha nga paturopi monoclonal?
  • 1. Te whakamarama
  • 2. Hītori
  • 3. Monoclonal Antibody Production
  • 4. Tikanga Whakakape
  • 5. Whakamahinga
• He aha te paturopi polyclonal?
  • 1. He aha te tikanga o te antibody polyclonal?
  • 2. Te hanganga
  • 3. Whakarōpūtanga
  • 4. Whakamahinga
• Monoclonal vs Polyclonal paturopi
  • 1. Kaupapa
  • 2. Hua
  • 3. Raruraru me nga Raruraru
  • 4. Etahi atu rereketanga
• Opaniraa

He aha nga paturopi monoclonal?

1. definition

He rereketanga nui kei waenga monoclonal me te polyclonal antibodies. Nga rongoā kawa Monoclonal he tino kākahu taupatupatu e whakaputaina ana e te kaupae B kotahi, me te whaaia he epitope motuhake. Ko te hangarau antibody Hybridoma e hangai ana ki te hangarau honohono pūtau, e honohono ana i nga pūtau B me nga kiri myeloma me te kaha whakaputa uri kore ki te puku pukupuku hybrids B.

Ko tetahi puoro hybridoma kotahi me tenei ahuatanga e whakamahia ana hei ngaki taupori noho hei whakarite i tetahi antibody motuhake ki te epitope, ara, antibody monoclonal.

2. History

Te whanaketanga o paturopi monoclonal e wha nga waahanga kua huringa, ara:
Murine paturopi monoclonal, antibody chimeric, tangata me nga tino tangata whakakotahitanga tangata.

Tangata tino paturopi monoclonal: Ko te rohe taurangi me te rohe tuturu o te paturopi na te tangata i ahu mai, he whakakore i te aukati me te paitini kino.

Ko nga hangarau e pa ana ki te whakarite i nga tinana totika a te tangata kei roto ko:
Hangarau hybridoma tangata, EBV panoni B hangarau lymphocyte, hangarau whakaatu phage, hangarau whakarite antibody kiore transgenic me te hangarau whakariterite antibody B cell kotahi.

Tino tangata me te katoa paturopi tangata nga raau taero i hangaia mai i nga taangata kua tino tangata hei whakaeke i nga momo ngoikoretanga o te kararehe-i whakaekea mai i nga kararehe me nga rauropi chimeric na te mea he tino hononga, he tino rangatiratanga, he iti te paitini me nga paanga o te taha. Kua waiho hei ahua kore i roto i te whanaketanga o te rongoa rongoa whakaora.

3. Monoclonal Antibody Production

1. Whakakinokino kararehe
   Ko te whakatō kano ārai mate te tikanga ki te ārainga mate kiore me te tohu antigen kia pai ai te whakaputa o te kiore i te lymphocytes B. Te tikanga, ko nga kiore BALB / c wahine e 6-8 wiki te pakeke ka tohua ka werohia kia rite ki te kawa whakatō kano ārai mate. Ka uru te antigen ki nga okana aarai parepare na roto i te tohanga toto, te tohanga lymphatic ranei, ka whakaohooho i nga kaakahu B lymphocyte B, ka whakahohe, ka tini, ka rerekee hoki ki nga lymphocytes B whai kiko.
   
2. Whakawhana Pūtau
   Ka patua nga kiore ki te hauhā, ka tangohia ngatapuhia nei kia puta. Na ka kotihia ka hurihia ki roto i te peihana petri kia whakatewatahia te wana pungawari. Ko nga kohinga myeloma syngeneic kua oti te whakarite me nga kohinga pihi o te kiore e konatunatua ana ki tetahi waahanga, ka taapirihia te kaiwhakatairanga honohono polyethylene glycol. I raro i te mahi a te polyethylene glycol, ka taea e nga momo lymphocytes te hono me nga puoro myeloma ki te hanga i nga waahanga hybridoma.
   
3. Maara kowhiri
   Ko te kaupapa o te ahurei whiriwhiri ko te tirotiro i nga waatea hybridoma kua honoa, a ka whakamahia te reo whiriwhiri HAT. I roto i te reo HAT, ka mate nga kohinga myeloma kaore i te whakamahia na te korenga o te hypoxanthine-guanine-phosphoribosyltransferase me te ara whakaora e kore e kitea hei whakakao i te DNA.
   
   Ahakoa ko nga lymphocytes kaore i te whakamahia he hypoxanthine-guanine-phosphoribosyltransferase, kaore e taea te noho mo te wa roa i roto i te vitro.
   
   Ko nga reera hybridoma kua honoa ka taea te ora me te whakanui i te reo HAT na te mea kua whiwhi hypoxanthine-guanine-phosphoribosyltransferase mai i nga puoro puia me te kaha ki te whakatipu haere tonu mai i nga kiri myeloma.
   
4. Te tirotiro me te whakakakahu i nga kaata pai o te hybridoma
   Ko etahi noa iho o nga puia hybridoma e tupu ana i te reo HAT ko nga puoro e huna ana i nga rauropi monoclonal motuhake kua whakaritea. No reira, he tika te tirotiro me te kaute. Ko te tikanga whakareatanga ka whakawhitingahia mo te ahurea clonal o nga puoro hybridoma. Ma te whakamahi i nga tikanga tuuturu, tere, motuhake hoki, ko nga waatea hybridoma pai ka taea te whakaputa i nga paturopi monoclonal e hiahiatia ana ka tirotirohia, ka haangia ka whakawhānuihia. Whai muri i te taipitopito tuakiri o te momo immunoglobulin, wehenga iti, motuhake, hononga, epitope o te antigen e mohiotia ana me tona taumaha ngota o te antibody monoclonal e huna ana i a ia, me totoka i te wa tika.
   
5. Te hanga papatipu o te raukikini monoclonal
   Tuhinga o mua paturopi monoclonal te nuinga ka whakamahi i te kararehe ki te whakauru whakauru me nga tikanga ahurea in vitro.

4. Tikanga Whakakoretanga

Ko nga puna pai kua whakamatautauria mo nga paturopi ka taea te whakato me te toka kia whiwhi ai i nga paturopi monoclonal e huna ana e nga uri o tetahi puoro kotahi. I te nuinga o te waa, ko te wa i mua i te waa kaute, he pai ake. Na te mea i tenei waa, ka tipu te tipu o nga momo hybridoma i te wa kotahi, e whakataetae ana mo te kai totika me te waahi, a, ka totohu pea ka whakakorea nga kamera e whakaputa ana i nga paturopi kua tohua.

Heoi, ko te wa whakariterite kia kaua e tino moata, ka kore e pumau nga ahuatanga o te pūtau, ana he iti, he ngawari ki te ngaro te maha o nga puoro. Ko nga kamera hybridoma pai kua tutuki, i muri i te waa o te ahurea, ka ngaro te kaha ki te whakaputa i nga paturopi na te rereketanga o te pūtau, te ngaro ranei o nga chromosome motuhake, no reira me aata whakahoki ano. Ko te maha o te tutakitanga ka whakatauhia e te kaha huna me te aukati o te Tuhinga o mua. I te nuinga o te waa, ko te maha o nga kaute o te antigen aukati kaha ka iti ake, engari ko te 3 ki te 5 nga kaute ka pumau. He maha nga tikanga mo te kaute, tae atu ki te aukati i te tikanga dilution, te tikanga micromanipulation, te tikanga pereti agar ngohengohe me te tikanga wehe whakahohenga fluorescence.

5. Taupānga

Tuhinga o mua paturopi monoclonal, kua whakamahia i roto i nga waahanga rongoa maha na o raatau ahuatanga motuhake.

1. Reagents haumanu rongoa taiwhanga
   Hei tohu haumanu i nga whare taiwhanga rongoa taiwhanga, paturopi monoclonal e whakamahia whānuitia ana i roto i ngā hangarau pēnei i te whakamātautau whākawa-piri i te whākōkī, radioimmunoassay, rongoā ārai mate me te rere o te cytometry na te kaha o te motuhake, te tino ma, me te taera pai. Tuhinga o mua paturopi monoclonal kua kaha whakatairanga i te whanaketanga o nga kete arumoni.
   
   Ko nga kete tauhokohoko i hangaia i nga paturopi monoclonal e whakamahia whanui ana i:
   1. Te kitenga o te microorganism pathogenic antigens me nga paturopi;
   2. Te kitenga i nga antigens puku;
   3. Te kitenga o nga pūtau ārai mate me a ratou roopu roopu;
   4. Te whakatau i te taatai;
   5. Te whakatau i nga cytokines.
      
      Ko te mohiotanga o nga antigens na nga paturopi monoclonal he tino rereke mai i nga anti-polyclonal. He rereke nga kete e whakamahi ana i nga momo antibodies monoclonal me nga waahi rereke mo te antigen, me etahi rereketanga o nga hua whakamatautau. No reira, me rangahau ano te take paerewa.
      
2. Pure o te pūmua
   Nga rongoā kawa Monoclonal he taone nui i roto i te taatai ​​o te chromatography. Ko te paturopi monoclonal kua panuitia ki runga i te kopu o te waahanga totoka (penei i te Spehrose 2B, 4B, 6B, me etahi atu) ka whakareri ki te pou chromatography. Ka rere ana te tauira i te pou chromatographic, ka taea te wehe i te antigen kia wehea ki te waahanga totoka monoclonal antibody, a ko nga toenga e kore e taea te here. I muri i te whakaahuatanga o te pou chromatographic, ka rereke te kaha katote, te pH ranei o te eluate, ka wehea te antigen kia wehea mai i te antibody, ka taea te tiki i te antigen ma te kohi i te eluate.
   
3. Te whakamaimoa-a-Tumor me te hangarau radioimmunoimaging
   Ko te antibody monoclonal i whakahaua ki tetahi antigen puku e hono ana ki te raau rongoa chemotherapy, ki te rongoa radiotherapy ranei, a ko te hua tutuki o te raukikini monoclonal ka whakamahia hei kawe i te tarukino, i te rongoa raanei ki te raanei whainga, ka patu tika i te pukupuku whaainga, e kiia ana ko whakaora puku-whakahaua.
   
   Hei taapiri, ka taea te whakamahi i te radioimmunoimaging ma te hono i nga tohu irirangi ki nga rauropi monoclonal ka werohia ki nga tuuroro hei awhina i te taatai ​​puku. Ko nga paturopi monoclonal ko te nuinga o nga wero murine, ana ko te serum o nga kararehe heterogeneous ka mate te mate urupare i te tangata. Na reira, ko te whakarite i nga rauropi monoclonal tangata-tangata ranei paturopi tangata he mea nui ake, engari kaore ano kia tino ahu whakamua mo tenei kaupapa.

He aha te paturopi polyclonal? 

1. He aha te tikanga o te antibody polyclonal?

Ngatiu i te nuinga o te waa he maha nga kaiwhakatautau antigenic. Ko tetahi momo antigenic determinant e whakaohooho ana i te tinana, me te antibody whakaputaina e te lymphocyte B e whiwhi ana i te whakaongaonga antigen e kiia ana ko te Monoclonal Antibody. Ko te tinana e whakaohohia ana e te maha o nga antigenic determinants, a he maha nga momo antibodies monoclonal ka whakaputahia kia rite. Ko enei antibodies monoclonal e whakaranu ngatahi ana ki te hanga antibody polyclonal.

2. hanganga

Ko te hanganga ngota i runga i te antigen e ahei ai te tinana ki te whakaputa paturopi ka kiia ko te epitope. He maha nga momo antigenic ka whakatauhia ki runga i te antigen, kia hua ai te tinana i etahi atu momo hauropi rerekee, ana ko nga wero whakamutunga ko nga putake plasma. Ko te taupori rewharewha plasma ka mahi noa i te whakatau antigenic kotahi te kaute. Ko te paturopi motuhake e hangaia ana e te kaakahu e kiia ana he antibody monoclonal. Nga rongoā kawa Monoclonal Ka taea te hono atu ki tetahi kaiwhakatuutuutu antigenic motuhake, peera i te pere miere e patu tika ana ki te whaainga. I tetahi atu, ahakoa he rite tonu te whakatau ki te antigenic, ka taea e te maha o nga karaehe te whakaputa i nga paturopi i roto i te tinana, ka whakaranuhia he maha o nga wero monoclonal, e kiia ana polyclonal paturopi.

3. Whakarōpū

Ngatiu te tikanga he titoa i nga epitope maha. Ko tetahi momo epitope e whakaohooho ana i te tinana. Ko te antibody i hangaia e te lymphocyte B e whiwhi ana i te antigen e kiia ana he antibody monoclonal. Ko te tinana e whakaohoohohia ana e nga momo momo antigenic determinants, ana ka whakaputahia he momo momo antibodies monoclonal. Ko enei antibodies monoclonal e konatunatua ngatahi ana hei hanga paturopi polyclonal. Engari ki nga momo antigenic determinants, ka taea ano e te momo epitope te whakaoho i te tinana ki te whakaputa e rima nga momo paturopi: IgG, IgM, IgA, IgE me IgD.

Ko nga paturopi polyclonal he roopu immunoglobulins he mea huna e nga kamera waipiro o te tinana i whakaohoohohia e nga antigens heterologous (macromolecular antigens, hapten conjugates). Ka whakamahia whanuitia a Polyclonal i roto i te rangahau me te taatai ​​na to raatau kaha ki te mohio ki te maha o nga epitope ka whakaoho i nga tauhohenga rererangi me te waa whakarite poto me te utu iti.

4. Taupānga

Ko te antiserum polyclonal pai e whai ana i nga antodiesum maha ki nga momo epitope o tetahi antigen. I te nuinga o te wa ko te antiserum polyclonal he antio ki etahi momo epitope o tetahi antigen, tae atu ki nga epitope-aukati-aukati, ka whai hua ano hoki ki nga tauira kua oti te whakarite. I roto i te whakapoke i nga waahanga kikii paraffin-whakauru, ka whakamahia tonu nga paturopi Polyclonal. E ai ki nga hiahia rereke o te whakamatautau, ka whakamahia nga anti-polyclonal ki te tapa i te antigen e hangai ana.

Hei taapiri, mo nga mahi ahuwhenua, antibody polyclonal ka whakamahia mo te tirotiro i te toenga o nga toenga pesticide; i nga whakamahinga haumanu, ka whakamahia te nuinga o nga rauropi polyclonal mo te kitenga pathogen, te tohu mate me te whakamaimoa, penei i te whakaurunga o te pūmua mo te whakautu transplantation me te rongoa i nga mate autoimmune.

Monoclonal vs Polyclonal paturopi

1. Kaupapa

Te Whakakoretanga: e pa ana ki te raina o te rauropi taapiri, he kohinga o nga raina o te rauropi i hangaia e te wehenga me te whakaputa uri o te rekoata kotahi. I nga mema katoa o tenei whanau, mena kaore he rereketanga, he rite tonu nga ira.

Te wero Polyclonal (pAb): Whakaorihia nga kararehe me te antigen kei roto te maha o nga epitope, ka taea te whakaohooho i nga kohinga puoro B maha hei whakaputa i nga momo hauropi rereke ki nga epitope maha. Ko te serum ārai mate i mau ko te ranunga o nga wero maha.

Nga rongoā kawa Monoclonal (mAb): Nga paturopi homologous i hangaia e te kohinga o nga pūtau B e mohio ana ki te epitope. He tino taakahu, he tino kiko, he titer teitei, he iti, kaore ranei he whakawhiti-whakawhiti.

2. production

Nga rereketanga mai i te whakarite antibody monoclonal:
Ko nga lymphocytes B e rongohia ana me nga antigens motuhake me nga puoro myeloma kua honoa kia whiwhi ai nga puoro hybridoma. I muri i te tirotirohia e te reo HAT ka kitea te tuatapapa na ELISA, ka puta he toka pai, katahi ka mahi i te ahurea o te pūtau ka werohia ranei nga ruma ki roto i te kopu puku o nga kararehe (ko te tikanga he pupuhi / c kiore) ka whakarakehia ki nga ascites, kohia nga atua / ascites ka purea kia whiwhi ai i nga rauropi monoclonal .

Tuhinga o mua antibody polyclonal kaore i te uaua pera i nga raukikini monoclonal. Me werohia e koe te antigen (kia teitei ake te ma, he pai ake) ki te tinana o te kararehe hei whakaora i te kano ārai mate. Whai muri i te toru ki te 3 werohanga, ka tohua e te ELISA te titer, a ka haurukutia te toto. Ka taea te purei i te tipua kia whiwhi ai i nga paturopi polyclonal. No reira, ko te huringa whakarite o nga wero polyclonal he poto ake i nga wero monoclonal, ana ko te utu whakarite tuatahi he iti ake i nga wero monoclonal.

3. Raruraru me Atawhai

A. Monoclonal antibody

Painga:

• Te tino mohio o te epitope o te antigen
• Ko nga raina o te wairangi hybridoma tahuti kore ka kaha ki te whakaputa i nga momo hauropi mutunga kore
• Ko nga raina o te wairangi hybridoma tahuti kore ka kaha ki te whakaputa i nga momo hauropi mutunga kore
• He haruru papamuri iti me te tauhohenga whakawhiti
• He hononga tino pai me te purea

Hononga tino pai me te purenga:

• Ko te whakawhanaketanga o nga paturopi monoclonal he roa te waa, me te hiahia i nga pukenga hangarau tiketike.
• Ka taea e ratau te whakaputa i nga momo hauropi motuhake, engari kaore pea e kitea i roto i nga momo maha.
• Ka ngawari te whakarereke i nga epitope. Ahakoa nga whakarereketanga iti o te whakarite kia tino heke te kaha here.

B. Werangi Polyclonal

Painga:

• He iti te utu, he tere hoki te hanga.
• Na te mohio o nga epitope maha, he teitei ake te hononga tinana ki te antigen.
• He tino mohio mo te rapu i te iti o te pūmua.
• He kaha ki te hopu i te whaainga pūmua (e taunakitia ana hei hopu i te rauropi i te hanawiti ELISA).
• Ko te hononga Antibody ka arahi kia tere ake te here ki te antigen whaainga (e taunakitia ana mo te wetewete me tere te mau o nga pūmua; pēnei i te IP, te ChIP ranei).
• Reagents Arā Atu Anō mō ​​te rapu pūmua tūturu.
• He maama ki te tokorua me nga tohu tohu antibody, kaore pea ka pa ki te kaha here.

Nga huakore:

• Nga rereketanga i waenga i nga puranga o nga kararehe rereke i nga waa rereke.
• Na te mea e mohio ana ia ki nga epitope maha (ko nga huaketo whakakorikori honohono e whakaatu ana i te iti o te whakawhiti-whakawhiti), he nui te taea o te whakawhiti-whakawhiti.

4. Differencestahi atu rereketanga

Opaniraa

Te āputa i waenga monoclonal me te polyclonal antibodies he tino nui, na enei rereketanga i whai hua ai ratou ki nga waahanga rereke. Nga rongoā kawa Monoclonal he waahi nui ki te rongoa, i te wa e mate ana a polyclonal taupatupatu whiti i roto i te mara o te ahuwhenua hanga me te ma'i rapunga me te maimoatanga.

Tohutoro

• ProteoGenix: POLYCLONAL VS. MONOCLONAL: AKAPEEA TE kowhiri i nga mahi tino pai mo to kaupapa?
• WhakautuToko: Nga tono whaihua mo te Monoclonal me te Polyclonal Antibodies