Inona no maha samy hafa ny antibodies monoclonal sy polyclonal?

Quick Navigation

• Inona no atao hoe antibodies monoclonal?
  • 1. famaritana
  • 2. tantara
  • 3. Famokarana Antibody Monoklonal
  • 4. Fomba fanaovana klona
  • 5. Application
• Inona no atao hoe antibody polyclonal?
  • 1. Inona no dikan'ny antibody polyclonal?
  • 2. structure
  • 3. Fanasokajiana
  • 4. Application
• Antibodiovan'ny Monoclonal vs Polyclonal
  • 1. Hevitra
  • 2. Production
  • 3. Ny maharatsy sy ny mahatsara
  • 4. Ny tsy fitoviana hafa
• Famaranana

Inona no atao hoe antibodies monoclonal?

1. famaritana

Misy fahasamihafana lehibe eo antibodiota monoklonal sy polyclonal. Ny antibody monoclonal dia tena manao fanamiana hery fiarovana izay vokarin'ny sela B iray tokana ary epitope manokana no kendreny. Ny teknolojia antibody Hybridoma dia mifototra amin'ny teknolojia fampifangaroana sela, izay manambatra ny sela B sy ny sela myeloma manana fahafaha-miteraka tsy mety maty ho fivonton'ny hybrids cell B.

Ny sela hybridoma tokana misy an'io toetra io dia ampiasaina hamboly olona sela hanomanana antibody manokana hanohitra epitope, izany hoe antibody monoklonal.

2. tantara

Ny fampandrosoana antibody monoclonal efa nandalo dingana efatra, izany hoe:
Antiozika monôlônina Murine, antibody chimeric, antibody monoclonal humanized ary antibodiônôma monoklonal an'ny olombelona tanteraka.

Olombelona tanteraka antibody monoclonal: Ny faritra miovaova sy ny faritra tsy miovaova amin'ny antibody dia avy amin'ny zanak'olombelona, ​​manala ny fihenan'ny hery malemy sy ny voka-dratsy.

Ireo haitao mifandraika amin'ny fanomanana ny antikôndria ataon'ny olombelona dia ahitana indrindra:
Teknolojia hybridoma olombelona, ​​fanovana EBV teknolojia lymphocyte B, teknolojia fampiratiana phage, teknolojia fanomanana antibody totozy transgenika ary teknolojia fanomanana antibody sela B tokana.

Natao ho olona sy feno vatan'olombelona mahery vaika zava-mahadomelina nomanina avy amin'ny antibodies namboarina ho olombelona sy feno olona dia mandresy ny lesoka isan-karazany amin'ny antibody azo avy amin'ny biby sy ny antibodies chimeric noho ny fifandraisany ambony, ny mampiavaka azy manokana, ary ny voka-dratsy misy poizina sy vokany. Nanjary fironana tsy azo ihodivirana amin'ny fampivoarana ny fanafody fitsaboana antibody fitsaboana.

3. Famokarana Antibody Monoclonal

1. Manefy biby
   Ny fanaovana tsimatimanota ny biby dia dingana fanefitry ny totozy amin'ny antigen kendrena mba hahatonga ny totozy hamokatra lymphocytes B mahatsiaro tena. Amin'ny ankapobeny, totozy BALB / c vehivavy 6-8 herinandro no voafantina sy atsindrona arakaraka ny protokolom-pitsaboana efa napetraka. Ny antigen dia miditra amin'ny rafi-kery miaro amin'ny peripheral amin'ny alàlan'ny fifandimbiasana rà na ny fivezivezena amin'ny lymphatic, manentana ireo clone limfositte B mifanandrify aminy, mampihetsika, mihabetsaka ary manavaka azy ireo ho lymphocytes B mahatsiaro tena.
   
2. Fusion sela
   Ny totozy dia vonoina amin'ny gazy karbonika, ary ny spleen dia avoaka aseptika. Potsero avy eo ary arotsaka ao anaty lovia petri mba hampiatoana ny sela. Ny sela myeloma syngeneic efa niomana sy ny sela spleen totozy dia afangaro amin'ny ampahany iray, ary ampio ny glycol polyethylene promoter fusion. Eo ambanin'ny andraikitry ny polyethylene glycol, ny lymphocytes isan-karazany dia afaka mifangaro amin'ny sela myeloma mba hamorona sela hybridoma.
   
3. Fambolena voafantina
   Ny tanjon'ny kolontsaina mifantina dia ny fisavana ny sela hybridoma mifangaro, ary ny mpanelanelana mifantina HAT dia matetika no ampiasaina. Ao amin'ny medium HAT, ny sela myeloma tsy ampiasaina dia maty noho ny tsy fisian'ny hypoxanthine-guanine-phosphoribosyltransferase sy ny lalan'ny famonjena tsy azo ampiasaina hanamboarana ADN.
   
   Na dia misy lymphocytes tsy ampiasaina aza hypoxanthine-guanine-phosphoribosyltransferase, dia tsy afaka miaina maharitra amin'ny vitro izy ireo.
   
   Ny sela hybridoma mifangaro ihany no afaka mivelona sy mihombo amin'ny salantsalany HAT satria nahazo hypoxanthine-guanine-phosphoribosyltransferase tamin'ny sela spleen sy ny fahafahan'ny fielezana tsy mitsahatra avy amin'ny sela myeloma.
   
4. Fanaraha-maso sy fandokoana ireo klôry positibo hybridoma
   Ny vitsivitsy amin'ireo sela hybridoma maniry ao amin'ny salantsalany HAT ihany dia ireo sela izay mamoaka antikônôma monoklonal voafaritra voafaritra. Noho izany, ilaina ny fitiliana sy ny fanaovana klona. Ny fomba fanalefahana mametra dia matetika ampiasaina amin'ny kolotsaina clonal an'ny sela hybridoma. Amin'ny fampiasana fomba fiarovan-tena mora tohina, haingana ary voafaritra tsara, ny sela hybridoma tsara izay afaka mamokatra antibody monoclonal ilaina dia arahana sy hasiana clon ary hitarina. Taorian'ny famaritana feno ny immunoglobulin karazana, subclass, spécisity, affinity, epitope an'ny antigen ekena ary ny lanjan'ny molekiola an'ny antibody monoclonal nafenina azy, dia tokony ho voakiky ara-potoana izy io.
   
5. Famokarana betsaka ny antibodiônôma monoklonal
   Ny fanomanana lehibe an'ny antibody monoclonal ny ankamaroany dia mampiasa fomba fampidirana biby in vivo sy fomba kolontsaina in vitro.

4. Fomba fanaovana klona

Ny fantsakana tsara izay nosedraina ho an'ny antibody dia azo kolokoloina sy hatsina mba hahazoana antibodies monoclonal nafenin'ny atin'ny sela iray. Amin'ny ankapobeny, ny fiandohan'ny fotoana fanaovana klona, ​​dia tsara kokoa. Satria mandritra io vanim-potoana io, ny sela hybridoma isan-karazany dia mitombo matanjaka amin'ny fotoana iray ihany, mifaninana amin'ny sakafo sy ny habaka, ary ny sela mamokatra antibody voatondro dia azo totofana sy esorina.

Na izany aza, ny fotoana fanaovana klone dia tsy tokony ho aloha loatra, raha tsy izany ny toetran'ny sela dia miovaova, ary ny isan'ny sela dia kely ary mora very. Ireo sela hybridoma miorina tsara, aorian'ny fotoanan'ny kolontsaina, dia ho very ny fahaizany mamorona antibodies noho ny fiovan'ny sela na ny fahaverezan'ny chromosome manokana, noho izany dia mila voatonona hatrany hatrany izy ireo. Ny isan'ny klone dia mamaritra ny fahaizan'ny miafina sy ny tsimatimanota an'ny karazana antigène. Amin'ny ankapobeny, ny isan'ny klone misy antigen mahery fiarovana dia mety ho kely kokoa, fa farafaharatsiny 3 ka hatramin'ny 5 clones no afaka mampiorina azy. Misy fomba maro amin'ny fanaovana klôona, ao anatin'izany ny famerana ny fomba fanalefahana, ny fomba micromanipulation, ny fomba lovia malefaka ary ny fomba fampisarahana ny fluoresence.

5. fampiharana

Hatramin'ny niandohan'ny antibody monoclonal, nampiharina tamin'ny sehatry ny fitsaboana maro izy ireo noho ny mampiavaka azy manokana.

1. Reagents diagnostika fanafody amin'ny laboratoara
   Amin'ny maha-mpanentana diagnostika an'ireo laboratoara amin'ny laboratoara laboratoara, antibody monoclonal dia be mpampiasa amin'ny teknolojia toy ny enzim-mifandray enzim-mifandray herisetra, radioimmunoassay, immunohistochemistry ary cytometry mikoriana noho ny mampiavaka azy manokana, ny fahadiovany avo ary ny fitovizany tsara. Ary ny fampiharana ny antibody monoclonal dia nampiroborobo fatratra ny fampandrosoana kitapo ara-barotra.
   
   Kojakoja ara-barotra vita amin'ny antibodies monoclonal dia be mpampiasa amin'ny:
   1. Famantarana ny zavamiaina bitika pathogenika antigène sy antibody;
   2. Famantarana ireo antigène fivontosana;
   3. Famaritana ireo sela voaaro sy ireo vondron'olona ao aminy;
   4. Famaritana ny hormonina;
   5. Famaritana cytokines.
      
      Ny fanekena ny antigène amin'ny antibodies monoclonal dia samy hafa be amin'ny an'ny antibodies polyclonal. Ny kitapo samihafa dia mampiasa antibodies monoclonal isan-karazany ary manana tranokala fankatoavana antigen samy hafa, izay mitarika fahasamihafana sasany amin'ny valin'ny fitsapana. Noho izany, ny olana momba ny fenitra dia mila fandalinana bebe kokoa.
      
2. Fanamasinana ny proteinina
   Ny antibody monoclonal dia ligande manan-danja amin'ny chromatography firaisana. Ny antibody monoclonal dia voarindra amin'ny matrix phase inert (toy ny Spehrose 2B, 4B, 6B, sns.) Ary namboarina ho tsanganana chromatography. Rehefa mivezivezy eo amin'ny tsanganana chromatographic ny santionany, ny antigen hisarahana dia afaka miraikitra manokana amin'ny antônôma mahery monoklonal, ary ny singa sisa tsy afaka mamatotra azy. Aorian'ny fitarafana tanteraka ny tsanganana chromatographic dia ovaina ny hery ionic na ny pH an'ny eluate, ny antigen hiavaka dia esorina amin'ny antibody, ary ny antigen ho diovina dia azo alaina amin'ny fanangonana ny eluate.
   
3. Fitsaboana mifototra amin'ny fivontosana sy ny teknolojia radioimmunoimaging
   Ny antibody monoclonal taratra manohitra antigen fivontosana sasany dia mifandray amin'ny zava-mahadomelina fitsaboana simika na radiotherapy, ary ny vokatra kendrena amin'ny antibody monoclonal dia ampiasaina hitondra ny zava-mahadomelina na radiotherapy amin'ny taova kendrena ary mamono mivantana ny sela kendrena, izay antsoina hoe fitsaboana mitarika fivontosana.
   
   Ho fanampin'izany, ny radioimmunoimaging dia azo tanterahina amin'ny alàlan'ny fampifandraisana ireo mari-pamantarana radioaktifika amin'ny alimôlômonika monoklonal ary hampidirana azy ireo amin'ireo marary hanampy amin'ny famaritana fivontosana. Ny antibodies monoclonal dia antibodies murine indrindra, ary ny serum an'ny biby heterogenous dia mety miteraka valiny mahazaka amin'ny olona. Noho izany, ny fanomanana antikôla monoclonal olombelona-olombelona na vatan'olombelona mahery vaika dia zava-dehibe kokoa, saingy tsy nisy fandrosoana lehibe azo natao tamin'io lafiny io.

Inona no atao hoe antibody polyclonal? 

1. Inona no dikan'ny antibody polyclonal?

karazana antigène Matetika dia misy famaritana antigenika maro. Ny karazana determinant antigenika dia manentana ny vatana, ary ny antibody novokarin'ny lymphocyte B nahazo ny fanentanana antigen dia nantsoina hoe Monoclonal Antibody. Ny vatana dia velomina amin'ny famaritana antigenika marobe, ary ny antibodies monoclonal isan-karazany dia novokarina mifanaraka amin'izany. Ireo otrikaretina monoklonal ireo dia miharo mifangaro antibody polyclonal.

2. Structure

Ny firafitry ny molekiola ao amin'ny antigène izay mety hiteraka vangan'aretin'ny vatana dia antsoina hoe epitope. Mety misy famaritana antigenika maro samy hafa amin'ny antigène, ka ny vatan dia mamokatra antivirus maro samy hafa, ary ny antidia farany dia sela plasma. Ny isan'ny sela plasma izay tsy miasa afa-tsy amin'ny famaritana antigenika dia klone. Ny antibody manokana novokarin'ny klone dia antsoina hoe antibody monoclonal. Ny antibody monoclonal afaka mamatotra manokana ny famaritana antigenika tokana, toy ny balafomanga mikendry ny tanjona kendrena. Etsy andaniny, na dia mitovy famaritana antigenika aza izy io, ny klôona maromaro dia afaka mamokatra antibody ao amin'ny vatana, mamorona fifangaroan'ny antibodiôlôjia monoklonal maromaro, antsoina hoe polyclonal antiozida.

3. Fisokajiana

karazana antigène mazàna dia misy epitope marobe. Ny karazana epitope iray dia manentana ny vatana. Ny antibody novokarin'ny lymphocyte B iray nahazo ny antigène dia antsoina hoe antibody monoclonal. Ny vatana dia entanina amin'ny famaritana antigenika isan-karazany, ary karazana antibodies monoclonal dia novokarina mifanaraka amin'izany. Ireo antikôlôjia monoklonal ireo dia mifangaro mba hamorona antibody polyclonal. Afa-tsy ny famaritana antigenika isan-karazany, ny karazana epitope mitovy ihany koa dia afaka manentana ny vatana hamokatra karazana antimody dimy: IgG, IgM, IgA, IgE ary IgD.

Ny antibodies polyclonal dia vondrona immunoglobulins nafenin'ny sela plasma ao amin'ny vatana izay namporisihin'ny antigènes heterologous (macromolecular antigens, hapten conjugates). Ny antibodies polyclonal dia be mpampiasa amin'ny fikarohana sy ny diagnostika noho ny fahaizany mamantatra epitope marobe ary miteraka fanehoan-kevitra amin'ny rotsakorana amin'ny fotoana fiomanana fohy sy vidiny ambany.

4. fampiharana

Ny antiserum polyclonal tsara dia misy antibody maro manohitra epitope samihafa an'ny antigen sasany. Satria matetika ny antiserum polyclonal dia misy antibody manohitra epitope samy hafa amin'ny antigène iray, ao anatin'izany ny epitope mahatohitra denatured, dia hisy vokany amin'ny santionany miraikitra ihany koa. Amin'ny fandokoana ny fizarana sela mipetaka parafin, dia matetika ampiasaina ny antibodiôlika polyclonal. Araka ny filàna samihafa amin'ny fanandramana, ny antibodiôla polyclonal dia ampiasaina hanisy marika ny antigène mifanitsy aminy.

Ankoatr'izay, amin'ny famokarana fambolena, antibody polyclonal dia ampiasaina amin'ny fanaraha-maso eny an-toerana ny residu famonoana bibikely; amin'ny fampiharana klinika, ny antibodies polyclonal dia matetika ampiasaina amin'ny famaritana pathogen, ny aretina aretina ary ny fitsaboana, toy ny proteinina momba ny hery fiarovana amin'ny famindrana sy ny fitsaboana ireo aretina autoimmune.

Antibodiovan'ny Monoclonal vs Polyclonal

1. Concept

Cloning: ilazana ny tsipika sela namboarina ho firaisana, izay vondron-tsipika misy sela noforonina tamin'ny fizarana sy ny fiterahana sela iray razambe iray. Amin'ny mpikambana rehetra ao amin'ity fianakaviana ity, raha tsy misy mutation dia mitovy tanteraka ny fototarazo.

Antibodiany polyclonal (pAb): Ampidiro ny biby miaraka amin'ny antigène misy epitope marobe, izay afaka manentana klônika sela B maro hamokarana antibiotika samihafa amin'ny epitope marobe. Ny serum miaro amin'ny hery fiarovan-tena dia tena fifangaroan'ny antibodies maro.

Ny antibody monoclonal (mAb): Antibôlômanina homôlôjika novokarin'ny klônan'ny sela B izay manaiky epitope. Mitovy endrika, matanjaka manokana, titer avo, kely na tsy misy reactibilité.

2. Production

Ny fahasamihafana amin'ny fanomanana antibody monoclonal:
Ny lymphocytes B tsaboina amin'ny antigène manokana sy ny sela myeloma dia mifangaro hahazoana sela hybridoma. Taorian'ny fizahana nataona HAT mpanelanelana sy ny fikarohana ny titer avy amin'i ELISA dia azo ny clone tsara, ary avy eo manaova kolontsaina sela na atsofohy ao anaty lavaka ao an-kibon'ny biby ny biby (mazàna balba / c) ary kolokoloy amin'ny ascites izy ireo, manangona ny supernatant / ascites ary manadio azy ireo hahazoana antibiotika monoclonal .

Ny fanomanana ny antibody polyclonal Tsy saro-tahotra toy ny antibody monoclonal. Mila mampiditra ny antigen fotsiny ianao (arakaraka ny maha avo ny fahadiovana no tsara kokoa) mankany amin'ny vatan'ny biby mba hatao fanefitra. Aorian'ny vaksiny 3 ka hatramin'ny 4, ny titer dia eken'ny ELISA, ary ny ra dia afovoany. Ny supernatant dia azo diovina mba hahazoana antibiotika polyclonal. Noho izany, ny tsingerina fanomanana ny antibodies polyclonal dia fohy kokoa noho ny an'ny antibodies monoclonal, ary ny vidin'ny fiomanana voalohany dia ambany noho ny an'ny antibodies monoclonal.

3. Ny lafy sy ny tombony

A. Antibody monoklonal

tombony:

• Ny fanekena manokana ny epitope an'ny antigen
• Ny tsipika sela hybridoma tsy mety maty dia manana fahaizana mamokatra antôria mahery tsy voafetra
• Ny tsipika sela hybridoma tsy mety maty dia manana fahaizana mamokatra antôria mahery tsy voafetra
• Ny tabataba farany ambany sy ny fihetsika miampita
• Fifandraisana akaiky sy fanadiovana tsara

Fifandraisana sy fanadiovana tsara:

• Ny fampiroboroboana ny antibodies monoclonal dia mitaky fotoana ary mitaky fahaizana teknika avo lenta.
• Izy ireo dia afaka mamokatra antibody manokana, saingy mety tsy ho hita amin'ny karazana maro.
• Mora miova amin'ny epitope. Na ny fanovana kely aza amin'ny fampifanarahana dia mety hiteraka fihenan'ny fatorana be loatra.

B. Antibodi-polika

tombony:

• Mora ny vidiny ary somary haingana ny famokarana.
• Noho ny fankatoavana epitope maro dia avo kokoa ny fiasan'ny antigen amin'ny antigen.
• Fiheverana avo lenta amin'ny fitadiavana proteinina kely.
• Fahaizana matanjaka hisambotra lasibatra proteinina (atolotra ho toy ny antibody voasambotra amin'ny sandwich ELISA).
• Ny fifandraisan'ny Antibody dia mety hitarika fifamatorana haingana amin'ny antigen kendrena (atolotra ho an'ny famakafakana izay mitaky fisamborana proteinina haingana; toy ny IP na ChIP).
• Reagents mandroso amin'ny fitadiavana proteinina voajanahary.
• Mora ny mivady miaraka amin'ny marika antibody, inoana fa tsy hisy fiantraikany amin'ny fahaizana mamatotra.

fatiantoka:

• Fahasamihafana eo amin'ny andian'ny biby isan-karazany amin'ny fotoana samihafa.
• Satria manaiky epitope marobe izy (ny antikôdiôma nodiovina dia mampiseho fihoaram-pefy kely), avo dia avo ny fahafahan'ny réactivity.

4. Fahasamihafana hafa

Famaranana

Ny elanelana misy eo antibodiota monoklonal sy polyclonal goavambe, ary ireo fahasamihafana ireo dia mahatonga azy ireo hahasoa amin'ny sehatra samihafa. Ny antibody monoclonal mitana toerana lehibe amin'ny fitsaboana, raha polyclonal hery fiarovana mamirapiratra amin'ny sehatry ny famokarana fambolena sy ny fikarohana ary ny fitsaboana ny aretina.

References

• ProteoGenix: POLYCLONAL VS. MONOCLONAL: AHOANA NO HIFIDIANANA ANTIBODIA TSARA HO AN'NY PROJECTO?
• LibreTexts: Fampiharana azo ampiharina amin'ny Antibodies Monoclonal sy Polyclonal