Inona ny fitsapana immuno-histochemistry?

Quick Navigation

• Inona no atao hoe immunohistochemistry?
  • 1. famaritana
  • 2. antony
  • 3. toetra
  • 4. Fanasokajiana
  • 5. asa
• Inona no ilàna ny immunohistochemistry?
• Protocol Immunohistochemitry
  • 1. Fomba Immunofluorescence
  • 2. Fomba fanoratana Immunoenzyme
  • 3. Teknolojia volamena koloidan'ny hery fiarovana
• Famaranana

Inona no atao hoe immunohistochemistry?

1. famaritana

Immunohistochemistry (ihc), fantatra ihany koa tsimatimanokimia, dia manondro teknolojia vaovao izay mamaritra ny kalitao, ny toerana misy azy ary ny famaritana habetsahan'ny mifanitsy aminy karazana antigène dia tanterahina amin'ny alàlan'ny valin'ny antigen-antibody sy ny valin'ny lokon'ny histochemical ao amin'ny toerana misy ny sela hery fiarovana nasiana marika amin'ny reagent chromogenika.

Mampifangaro am-pahakingana ny maha-manokana ny valin'ny hery fiarovana sy ny fahitana ny histochemistry izy io. Miaraka amin'ny fanampian'ny sary sy ny fanamafisana ny mikraoskaopy (ao anatin'izany ny microscope fluorescence sy ny microscope electron), dia afaka mamantatra zavatra antigenika isan-karazany (toy ny proteinina, polypeptide, anzima, hormonina, pathogens ary receptor, sns.). Immunohistochemistry nivoatra haingana ny teknolojia tato anatin'ny taona vitsivitsy. Tamin'ny taona 1950, voafetra tamin'ny teknolojia fiarovana ny hery malemy izy io. Ary nanomboka tamin'izay dia nisy teknolojia immunoenzyme tena mora tohina sy azo ampiharina kokoa.

2. antony

Ny famehezana eo anelanelan'ny antibody ary ny antigen dia manana ny mampiavaka azy manokana, ary immunohistochemistry mampiasa ity fitsipika ity. Voalohany, ny zavatra simika ao amin'ny sela na sela dia alaina ary ampiasaina ho antigen na hapten. Aorian'ny fanaovana tsimatimanota ilay biby dia mahazo antibody manokana, ary avy eo dia ampiasaina ny antibody hamantarana ilay antigène mitovy amin'ny sela na sela. Satria ny lokon'ny antigène sy ny antibody dia tsy misy loko, ilaina ny fampisehoana ny toerana misy ny antigen sy ny antibody amin'ny alàlan'ny histochemistry hahatratrarana ny fikarohana antigens, localis na qualitative amin'ny antigén tsy fantatra amin'ny sela na sela.

3. toetra

A. Miavaka manokana

Ny fitsipika fototry ny immunology dia mamaritra fa ny famehezana ny antigen sy ny antibody dia voafaritra tsara. Noho izany, immunohistochemistry dia teorika fampisehoana manokana an'ny karazana antigène amin'ny sela sela. Ohatra, ny keratin dia mampiseho singa epithelial, ary LCA kosa dia mampiseho limfosit. fangaro. Rehefa misy cross-antigens ao amin'ny sela sela ihany dia hisy ny fanehoan-kevitra.

B. fahatsapana avo

Amin'ny dingana voalohany amin'ny fampiharana ny immunohistochemistry, noho ny fetran'ny teknika, ny fomba mivantana, ny fomba tsy mivantana ary ny teknolojia tsy dia marefo loatra no misy. Amin'izany fotoana izany, ny antibody dia azo esorina im-betsaka na imbetsaka fotsiny; Ankehitriny ny fahatongavan'ny fomba ABC na SP dia mamela ny antikôlôjia hohamainina an'arivony, an'aliny, na an-jatony heny mihitsy aza, ary ny antibody dia mbola afaka mamatotra ireo antigena ao amin'ny sela sela. Ity fanehoan-kevitra momba ny anti-antigène ity dia mahatonga ny fomba fanefitra-mahery kokoa sy mora kokoa amin'ny famaritana aretina mahazatra.

C. Fametrahana marina, fitambaran'ny endrika sy ny asany

Ity haitao ity dia afaka mahita marina ny antigena ao anaty sela sy sela amin'ny alàlan'ny valin'ny antigen-antibody sy ny valin'ny loko, ka tsy mitovy amin'izany karazana antigène dia azo apetraka sy voamarika ao amin'ny sela na sela iray miaraka. Ka ny fitambaran'ny morphology sy ny fiasa dia azo dinihina, izay misy dikany lehibe tokoa amin'ny fanaovana fikarohana lalindalina amin'ny sehatry ny patolojia.

4. Fisokajiana

• Araka ny karazan'ireo akora fanamarihana marika, toy ny loko vita amin'ny fluorescent, radioisotopes, anzima (perozeridia horseradish ary fosfatase alkaly), ferritin, volamena koloidia, sns., Azo zaraina ho immunofluorescence, radioimmunoassay, immunoenzyme Fomba fametahana marika ary fomba fiarovana volamena sy volafotsy.
• Araka ny dingana fandokoana, dia azo zaraina amin'ny fomba mivantana (antsoina koa hoe fomba dingana iray) sy fomba tsy mivantana (dingana roa, dingana telo na dingana maro). Raha ampitahaina amin'ny fomba mivantana, ny fahatsapana ny fomba tsy mivantana dia nihatsara kokoa.
• Araka ny fomba famatorana, azo zaraina ho fatorana antigen-antibody, toy ny fomba peroxidase-antiperoxidase (PAP); fifandraisana afinina, toy ny fomba avidin-biotin-peroxidase complex (ABC), ny fomban-drazana Fampifandraisana avidin-peroxidase (SP), izay fomba fampiasa SP no fomba fampiasa matetika kokoa; fifandraisan'ny polymer, toy ny fomba vonona roa hampiasaina, izay mety indrindra amin'ny votoatin'ny biôtinina endogenous avo detection antigenissue de tissue.

5. asa

A. santionany

Ireo fanandramana dia matetika mampiasa spesimen-tisu sy santionan'ny sela. Ny voalohany dia misy fampidirana paraffin fizarana (fizarana pathological sy chip sela) ary fizarana mivaingana, ary ity farany kosa dia misy ny fanontana ny sela, ny slide amin'ny sela ary ny fanosan'ny sela.

Anisan'izany, ny paraffin dia ny fomba fampiasa matetika sy lehibe indrindra hanaovana specimens hozatra. Izy io dia voatahiry tsara ho an'ny morphology amin'ny sela ary azo ampiasaina amin'ny fizarana serial, izay manampy amin'ny fandinihana fanaraha-maso ny tasy isan-karazany; izy io koa dia afaka voatahiry mandritra ny fotoana maharitra ho an'ny fikarohana aorina; Hisy fiatraikany kely amin'ny fiparitahan'ny antigen, fa famerenana antigen azo tanterahina, izay no fomba fanao fanomanana ny lozisialy tisu ao immunohistochemistry.

B. antibody

Ny antibiotika ampiasaina matetika amin'ny fanandramana immunohistochemical dia antibody monoklonal sy polyclonal antibody. Ny antibodies monoclonal dia antibody nafenin'ny klone limfôte B ary nomanina amin'ny alàlan'ny fiarovana ny biby amin'ny teknolojia hybridoma fusion sela. Ny antibody polyclonal dia serum miaro amin'ny hery azo ra biby aorian'ny tsimokaretina antigène voadio dia voatanoka mivantana. Izy io dia fifangaroan'ny antibodies novokarin'ny klônia lymphocyte B marobe.

C. Fomba fandokoana mahazatra

Miorina amin'ny marika samy hafa dia mizara ho immunofluorescence fomba, immunoenzyme labeling fomba, sy ny affinity histochemistry fomba. Ity farany dia fomba fitiliana mifototra amin'ny akora misy firaiketam-po avo amin'ny singa sela iray. Ity fomba ity dia mora tohina kokoa ary manamora ny fametrahana ny antigène trace (antibodies) amin'ny ambaratongam-sela na any ambanin'ny sela. Anisan'izany, ny fomba fandotoana biotin-avidin no be mpampiasa indrindra.

Inona no ilàna ny immunohistochemistry?

Fandokoana Immunohistochemical dia manana andraikitra lehibe tokoa amin'ny fikarohana biomédical ary misy sehatra fikarohana maro. Na izany aza, immunohistochemistry misy fetrany ihany koa ny teknolojia. Ohatra, ny fanafody andrana amin'ny sela sela dia tsy maintsy antigenika, ary ilaina ny fifantohana. Ny proteinina tsy voamarina dia tsy azo hamaritana ny famolavolana sela na entina amin'ny sela.

Noho izany, ireo toetra ireo dia tokony hodinihina feno amin'ny famolavolana andrana. Raha mila manaporofo ny karazana sela ny proteinina fantatra, novolavolain'ny, molekiola in hybridization in situ aleon'ny teknolojia. Mba hitarihana ireo vao manomboka hampiasa immunohistochemistry teknolojia araka ny antonony sy mahay amin'ny famolavolana fanandramana, ny fitsipika fototra amin'ny fampiharana azy dia faritana fohifohy toy izao:

1. Fantaro ny karazana sela sy ny morphology. Ny proteinina sasany ao amin'ny sela dia manana ny maha-manokana azy io, toy ny proteinina asidra fibrillary (GFAP), izay tsy misy afa-tsy ao amin'ny astrôtes. Neurofilament (Neurofilament, NF) dia misy ao amin'ny selam-pitatitra. Ireo proteinina manokana ho an'ny sela ireo dia matetika antsoina hoe proteinina misy marika (Proteiniliaker). Ny karazana sela dia azo faritana amin'ny alàlan'ny antibody manokana an'ny proteinina misy marika.
   
   Ny sela sasany (toy ny sela Langerhans sy melanocytes ao amin'ny epidermis) dia tsy mora ny mamantatra eo ambanin'ny mikraoskaopy mazava. Amin'ny fampisehoana fandotoana immunohistochemical amin'ny proteinina manokana ao amin'ny cytoplasm, ny tabilaon'ny sela toy izany dia azo aseho mazava tsara. Ilaina indrindra io vokatra io amin'ny fikarohana neurosains sy ny klinika momba ny fivontosana.
   
2. Fantaro ny loharanon'ny vokatra sela. Zahao toy ny antigène ny vokatra sela sasany, manomàna antilômbia mifanandrify aminy ary manaova fampisehoana fandotoana immunohistochemical amin'ny sela sela hamaritana ny loharanon'ny vokatra sela. Ohatra, ny ankamaroan'ny hormona novokarin'ny sela endocrine dia azo fantarina amin'ny teknikan'ny fandotoana imunohistochemical. Miorina amin'izany, ny asa miafina ataon'ny sela sy ny fanasokajiana ny fivontosan'ny endocrine dia azo dinihina, ary ireo fivontosana izay manafina ny hormonina ectopic dia azo tsapain-tanana mba hahatakarana ny ambaran'ny fahasamihafan'ny sela.
   
3. Fantaro ny haben'ny fahasamihafana eo amin'ny sela. Ny sela samihafa amin'ny karazany mitovy dia maneho proteinina marika isan-karazany, ary ny habetsaky ny sela dia azo faritana arakaraka ny famantarana ireo proteinina samihafa ireo. Ohatra, ny proteinina mampiavaka ny sela neuroepithelial dia ny Nestin, izay maneho vimentin rehefa miavaka ho sela glial radial. Ao amin'ny dingana neurogenesis dia maneho Ⅲβraha miavaka amin'ny neuroblasts neural tubulin (TUJl) sy neurofilament (NF) izy io rehefa miavaka ny neuroblasts ho lasa neurons matotra.
   
4. Araho ny fonosana fibre nerve sy ny faritra misy azy. Ny fomba immunohistochemical dia matetika ampiarahina amin'ny fomba fitiliana fitaterana axoplasmika handinihana ny fifandraisana misy eo amin'ny neurons. Ny fomba fitiliana fitaterana axoplasmika dia mampiasa akora sasany izay azo alaina amin'ny tendrony. Mampiasà fomba histochemical hanehoana ny drafitry ny neurons. Ireo mpitrandraka ampiasaina matetika dia misy peroxidase horseradish sy volamena fluorescent.
   
   Ohatra: Ny tanjona dia ny hijerena ny fomban'ny kofehin'ny nerve avy amin'ny vatan'ny rafitry ny rafi-pitabatabana na ny rafi-pitatitra foibe. Voalohany, ny tracer dia atsofoka ao amin'ny faran'ny vatan'ny biby mba hahafahan'ny biby miaina mandritra ny fotoana maharitra. Ny fitaovana dia nalaina avy amin'ny vinavina proxy fibres nerveuse, ary ny traacer dia miorina amin'ny fomba histochemical, ary avy eo ny fomba immunohistochemical dia ampiharina hamaritana ny toetrany.
   
5. Fampiharana amin'ny patolojia klinika. Toy ny famantarana ny natiora ny lesona, ny fahitana lesoka madinidinika, ny fizahana ny fiandohana na ny phenotype ny fivontosana, ny famaritana ny dingana fivontosana, ny fitarihana ny fitsaboana sy ny vinavina, ny fanampiana amin'ny famaritana sy ny fanasokajiana ireo aretina ary ny fikarohana ny antony mahatonga ny aretina. Sns

Protocol Immunohistochemitry

1. Fomba Immunofluorescence

Io no tetika voalohany nananganana immunohistochemistry. Mampiasa ny fitsipiky ny mamatotra antigen-antibody manokana. Voalohany, ny antibody fanta-daza dia misy soratra hoe fluorescein, izay ampiasaina ho famotopotorana hanamarinana ny antigène mifanaraka amin'ny sela na sela. Raha mandinika azy io ianao eo ambanin'ny mikraoskaopy fluorescence, dia hamoaka fluorescence amin'ny halavan'ny halavany iray izy io rehefa ampiakarin'ny hazavana manaitaitra ny fluorescein ao amin'ny kompleks antigen-antibody. Avy eo ny fametrahana ny toerana iray antigène ao amin'ny sela dia azo faritana ary azo atao ny manao famaritana habetsahana. Noho ny mampiavaka azy manokana, ny fahatsapana avo, ny hafainganam-pandeha ary ny fahatsorana, ny teknolojia fanaovan-tsofina dia ampiasaina amin'ny diagnostika sy fitiliana aretina.

fampiharana

• Fampiharana amin'ny aretina autoimmune
• Famantarana haingana ny bakteria sy ny viriosy
• Famantarana sy fikarohana ny katsentsitra

2. Fomba fanoratana Immunoenzyme

Ny fomba fanoratana immunoenzyme dia teknika novolavolaina tamin'ny taona 1960 narahin'ny immunofluorescence. Ny fitsipika fototra dia ny fampiasana antibody misy marika anzima aloha hifaneraserana amin'ny tavy na sela, ary avy eo ampio substrata anzima mba hamokarana vokatra na potika tsy mety ritra miaraka amin'ny hakitroky ny elektrôna.

Amin'ny alàlan'ny microscopy maivana na elektronika, ny karazana sela samihafa sy ny singa antigen ao anaty sela dia iharan'ny fikarohana eo an-toerana. Ny haitao fanoratana Immunoenzyme no teknolojia be mpampiasa indrindra. Ny tombony lehibe amin'ity fomba ity raha oharina amin'ny teknolojia fiarovana amin'ny alàlan'ny tsimokaretina:

Ny fomba fanoratana immunoenzyme dia nitombo haingana be, ary karazana fomba fanoratana isan-karazany no azo. Miaraka amin'ny fanatsarana sy fanavaozana mitohy ny fomba, ny miavaka sy ny fahatsapana dia nihatsara be, mora kokoa ampiasaina. Ny fomban'ny ABC, ny fomba SP dingana telo, ny rafi-pamantarana fomba roa-vonona hampiasaina dia be mpampiasa amin'ny famaritana aretina.

fampiharana

• Hatsarao ny fitiliana ny aretina
• Fampiharana klinika ny proteinina oncogene
• Fanombanana ny habetsaky ny fihanaky ny sela fivontosana
• Famaritana micrometastases
• Manan-danja amin'ny fizotran'ny fivontosana
• Tariho ny fitsaboana ny fivontosana
• Manampy amin'ny famaritana ny aretin-ketra ary ny areti-mifindra

3. Teknolojia volamena koloidan'ny hery fiarovana

Ny teknolojia volamena koloidin'ny hery fiarovan-tena dia mampiasa sombina vy manokana toy ny kôlôdialy volamena ho marika. Ny volamena koloidaly dia manondro ny hydrosol volamena, izay afaka mamoaka proteinina haingana sy miorim-paka ary tsy misy vokany miharihary amin'ny asa biolojika an'ny proteinina. Noho izany, mampiasa marika volamena koloaly antibody voalohany, antibody faharoa, na molekiola hafa mifamatotra manokana immunoglobulins (toy ny proteinina staphylococcal A) ho toy ny probe, dia mety hahitana azy amin'ny fomba ara-kalitao, na hanisa antigena amin'ny sela na sela.

Koa satria ny kôlôlidia volamena dia misy sombintsombiny samy hafa habe ary avo ny hakitroky ny volamena koloidaly, ny teknika volamena immuno-colloidal dia mety indrindra amin'ny fandalinana mari-toerana tokana na marobe fanamarihana mikraoskaopy immunoelectron. Ary noho ny lokon'ny boloky koloidaly mena mena ka hatramin'ny mena lalina, dia mety amin'ny fandinihana mikraoskaopy mazava ihany koa. Toy ny fampiharana ny fanamafisana volafotsy sy ny lalàna volafotsy dia mety kokoa amin'ny fandinihana mikraoskaopy maivana.

Famaranana

Noho ny mampiavaka azy manokana, immunohistochemistry ny teknolojia dia nanjary teknika nofidian'ny ankamaroan'ny mpikaroka siantifika amin'ny fametrahana sela sela, fikarohana kalitao ary habetsahana. Noho izany, miaraka amin'ny fanavaozana ny fitaovana fikarohana siantifika, ny mpahay siansa dia mila manana fahatakarana lalindalina kokoa sy lalina kokoa immunohistochemistry, manatsara ny famolavolana làlana ara-teknika ary hampiroborobo ny fampandrosoana bebe kokoa ny immunohistochemistry teknolojia.

Te hahafantatra misimisy momba ny antigène sy ny antivirus? Vakio ny Mijoro ny FC vaovao.

References

• NCBI: Fampiharana immunohistochemistry
• Ivon-toeram-pirenena momba ny homamiadana: Immunohistochemistry