Inona ny fitsapana immuno-histochemistry?

Quick Navigation

• Inona no atao hoe immunohistochemistry?
  • 1. famaritana
  • 2. antony
  • 3. toetra
  • 4. Fanasokajiana
  • 5. asa
• Inona no ilàna ny immunohistochemistry?
• Protocol Immunohistochemitry
  • 1. Fomba Immunofluorescence
  • 2. Fomba fanoratana Immunoenzyme
  • 3. Teknolojia volamena koloidan'ny hery fiarovana
• Famaranana

Inona no atao hoe immunohistochemistry?

1. famaritana

Ny immunohistochemistry ( ihc ), fantatra ihany koa amin'ny hoe immunocytochemistry , dia manondro teknolojia vaovao izay ny famaritana qualitative, localized, ary quantitative ny antigens mifandraika amin'izany dia tanterahina amin'ny alàlan'ny fihetsiky ny antigen-antibody sy ny fihetsiky ny loko histochemical ao amin'ny sela sela amin'ny alàlan'ny antigens manokana misy marika chromogenic reagent.

Mampifangaro amim-pahakingana ny maha-manokana ny valin-kafatra avy amin'ny hery fiarovana sy ny fahitana ny histochemistry izy io. Noho ny fanampian'ny sary sy ny fampitomboana ny mikroskopia (anisan'izany ny mikroskopia fluorescence sy ny mikroskopia elektrôna), dia afaka mamantatra akora antigenic isan-karazany (toy ny proteinina , polypeptide, anzima, hormonina, pathogens ary receptors, sns.). Nivoatra haingana ny teknolojia immunohistochemistry tato anatin'ny taona vitsivitsy. Tamin'ny taona 1950, voafetra tamin'ny teknolojia immunofluorescence ihany izany. Ary nanomboka teo dia nivoatra tsikelikely ny teknolojia immunoenzyme tena saro-pady sy azo ampiharina kokoa.

2. antony

Ny fifamatoran'ny antikôra sy ny antikôra dia manana ambaratonga avo lenta amin'ny famaritana manokana, ary ny immunohistochemistry dia mampiasa io fitsipika io. Voalohany, misy akora simika sasany ao amin'ny sela na ny sela no alaina ary ampiasaina ho antikôra na hapten. Rehefa avy natao vaksiny ny biby dia misy antikôra manokana azo, ary avy eo dia ampiasaina hamantarana ny antikôra mitovy ao amin'ny sela na ny sela. Satria tsy misy loko ny fitambaran'ny antikôra sy ny antikôra, dia ilaina ny mampiseho ny toerana fifamatoran'ny antikôra sy ny antikôra amin'ny alàlan'ny histochemistry mba hahazoana fikarohana qualitative, localized na quantitative momba ny antikôra tsy fantatra ao amin'ny sela na ny sela.

3. toetra

A. Miavaka manokana

Ny foto-kevitra fototry ny imunolojia dia mamaritra fa ny fifamatorana eo amin'ny antigen sy ny antikôra dia tena voafaritra tsara. Noho izany, ny immunohistochemistry dia ara-teoria fampisehoana manokana ny antigen ao amin'ny sela sela. Ohatra, ny keratin dia mampiseho singa epithelial, ary ny LCA dia mampiseho lymphocytes. Ny singa ao amin'ny sela sela ihany no hitrangan'ny cross-reaction.

B. fahatsapana avo

Tamin'ny dingana voalohany tamin'ny fampiharana ny immunohistochemistry , noho ny fetra ara-teknika, dia ny fomba mivantana, ny fomba ankolaka ary ny teknolojia tsy dia saro-pady ihany no nisy. Tamin'izany fotoana izany, ny antikôra dia azo natsonika imbetsaka na am-polony monja; ankehitriny ny fisian'ny fomba ABC na SP dia ahafahana natsonika an'arivony, an'aliny, na an-jatony tapitrisa mihitsy aza ny antikôra, ary mbola afaka mifamatotra amin'ny antigène ao amin'ny sela sela ny antikôra. Io fihetsiky ny antibody-antigène saro-pady io dia mahatonga ny fomba immunohistochemistry ho mora kokoa amin'ny diagnostika pathologie mahazatra.

C. Fametrahana marina, fitambaran'ny endrika sy ny asany

Ity teknolojia ity dia afaka mahita tsara ny antigène ao amin'ny sela sy ny sela amin'ny alàlan'ny fihetsiky ny antigène-antibody sy ny fihetsiky ny loko, mba hahafahana mametraka sy mandinika ny antigène samihafa ao amin'ny sela na sela iray ihany amin'ny fotoana iray ihany. Noho izany dia azo ianarana ny fitambaran'ny morphology sy ny fiasa, izay tena manan-danja amin'ny fanaovana fikarohana lalina eo amin'ny sehatry ny patolojia.

4. Fisokajiana

• Araka ny karazan'ireo akora fanamarihana marika, toy ny loko vita amin'ny fluorescent, radioisotopes, anzima (perozeridia horseradish ary fosfatase alkaly), ferritin, volamena koloidia, sns., Azo zaraina ho immunofluorescence, radioimmunoassay, immunoenzyme Fomba fametahana marika ary fomba fiarovana volamena sy volafotsy.
• Araka ny dingana fandokoana, dia azo zaraina amin'ny fomba mivantana (antsoina koa hoe fomba dingana iray) sy fomba tsy mivantana (dingana roa, dingana telo na dingana maro). Raha ampitahaina amin'ny fomba mivantana, ny fahatsapana ny fomba tsy mivantana dia nihatsara kokoa.
• Araka ny fomba famatorana, azo zaraina ho fatorana antigen-antibody, toy ny fomba peroxidase-antiperoxidase (PAP); fifandraisana afinina, toy ny fomba avidin-biotin-peroxidase complex (ABC), ny fomban-drazana Fampifandraisana avidin-peroxidase (SP), izay fomba fampiasa SP no fomba fampiasa matetika kokoa; fifandraisan'ny polymer, toy ny fomba vonona roa hampiasaina, izay mety indrindra amin'ny votoatin'ny biôtinina endogenous avo detection antigenissue de tissue.

5. asa

A. santionany

Ireo andrana ireo dia mampiasa santionan'ny sela sy santionan'ny sela. Ny voalohany dia ahitana fizarana fampidirana paraffine (fizarana pathological sy poti-sela) sy fizarana mangatsiaka, ary ny faharoa dia ahitana dian-sela, slide sela ary fandoroana sela.

Anisan'izany, ny fizarana paraffine no fomba ampiasaina matetika indrindra sy fototra indrindra hanaovana santionan'ny sela. Voatahiry tsara izy io ho an'ny morphology sela ary azo ampiasaina amin'ny fizarana mitohy, izay manampy amin'ny fanaraha-maso ny fandokoana isan-karazany; azo tehirizina mandritra ny fotoana maharitra ihany koa ho an'ny fikarohana miverina; Hisy fiantraikany amin'ny fihanaky ny antigen izany, saingy azo atao ny maka antigen , izay fomba tsara indrindra hanomanana santionan'ny sela amin'ny immunohistochemistry.

B. antibody

Ny antibody ampiasaina matetika amin'ny andrana immunohistochemical dia ny antibody monoclonal sy ny antibody polyclonal. Ny antibody monoclonal dia antibody avoakan'ny clone lymphocyte B ary amboarina amin'ny alàlan'ny vaksiny biby amin'ny alàlan'ny teknolojia hybridoma fusion cell. Ny antibody polyclonal dia serum hery fiarovana azo avy amin'ny ran'ny biby rehefa avy novaina mivantana ny antigen voadio. Fifangaroan'ny antibody novokarin'ny clone lymphocyte B maromaro izy io.

C. Fomba fandokoana mahazatra

Araka ny mari-pamantarana samihafa, dia mizara ho fomba immunofluorescence , fomba fametahana marika immunoenzyme, ary fomba histochemistry affinity. Ity farany dia fomba fitiliana mifototra amin'ny akora iray manana affinity avo lenta amin'ny singa sela iray. Ity fomba ity dia saro-pady kokoa ary manamora ny toerana misy ireo antigen (antibodies) kely eo amin'ny sela na ambanin'ny sela. Anisan'izany, ny fomba fandokoana biotin-avidin no ampiasaina matetika indrindra.

Inona no ilàna ny immunohistochemistry?

Mitana anjara toerana lehibe dia lehibe amin'ny fikarohana biomedika ny fandokoana immunohistochemical ary mahakasika sehatra fikarohana maro. Na izany aza, manana ny fetrany ihany koa ny teknolojia immunohistochemistry . Ohatra, ny akora andramana ao amin'ny sela dia tsy maintsy antigenic, ary ilaina ny fifantohana sasany. Ny proteinina immunoreactive hita dia tsy azo faritana raha vao novokarin'ny sela na nentina tao anaty sela.

Noho izany, ireo toetra ireo dia tokony hodinihina tanteraka amin'ny famolavolana andrana. Raha mila manaporofo ny karazana sela ampiasaina amin'ny fanamboarana ny proteinina fantatra ny andrana, dia aleo kokoa ny teknolojia hybridization molekiolary in situ . Mba hitarihana ireo vao manomboka hampiasa ny teknolojia immunohistochemistry amin'ny fomba mitombina sy mahay amin'ny famolavolana andrana, dia hazavaina fohifohy toy izao manaraka izao ny foto-kevitra fototra amin'ny fampiharana azy:

1. Fantaro ny karazana sela sy ny morphology. Ny proteinina sasany ao amin'ny sela dia manana ny maha-manokana azy io, toy ny proteinina asidra fibrillary (GFAP), izay tsy misy afa-tsy ao amin'ny astrôtes. Neurofilament (Neurofilament, NF) dia misy ao amin'ny selam-pitatitra. Ireo proteinina manokana ho an'ny sela ireo dia matetika antsoina hoe proteinina misy marika (Proteiniliaker). Ny karazana sela dia azo faritana amin'ny alàlan'ny antibody manokana an'ny proteinina misy marika.
   
   Ny sela sasany (toy ny sela Langerhans sy melanocytes ao amin'ny epidermis) dia tsy mora ny mamantatra eo ambanin'ny mikraoskaopy mazava. Amin'ny fampisehoana fandotoana immunohistochemical amin'ny proteinina manokana ao amin'ny cytoplasm, ny tabilaon'ny sela toy izany dia azo aseho mazava tsara. Ilaina indrindra io vokatra io amin'ny fikarohana neurosains sy ny klinika momba ny fivontosana.
   
2. Fantaro ny loharanon'ny vokatra sela. Zahao toy ny antigène ny vokatra sela sasany, manomàna antilômbia mifanandrify aminy ary manaova fampisehoana fandotoana immunohistochemical amin'ny sela sela hamaritana ny loharanon'ny vokatra sela. Ohatra, ny ankamaroan'ny hormona novokarin'ny sela endocrine dia azo fantarina amin'ny teknikan'ny fandotoana imunohistochemical. Miorina amin'izany, ny asa miafina ataon'ny sela sy ny fanasokajiana ny fivontosan'ny endocrine dia azo dinihina, ary ireo fivontosana izay manafina ny hormonina ectopic dia azo tsapain-tanana mba hahatakarana ny ambaran'ny fahasamihafan'ny sela.
   
3. Fantaro ny haben'ny fahasamihafana eo amin'ny sela. Ny sela samihafa amin'ny karazany mitovy dia maneho proteinina marika isan-karazany, ary ny habetsaky ny sela dia azo faritana arakaraka ny famantarana ireo proteinina samihafa ireo. Ohatra, ny proteinina mampiavaka ny sela neuroepithelial dia ny Nestin, izay maneho vimentin rehefa miavaka ho sela glial radial. Ao amin'ny dingana neurogenesis dia maneho Ⅲβraha miavaka amin'ny neuroblasts neural tubulin (TUJl) sy neurofilament (NF) izy io rehefa miavaka ny neuroblasts ho lasa neurons matotra.
   
4. Araho ny fonosana fibre nerve sy ny faritra misy azy. Ny fomba immunohistochemical dia matetika ampiarahina amin'ny fomba fitiliana fitaterana axoplasmika handinihana ny fifandraisana misy eo amin'ny neurons. Ny fomba fitiliana fitaterana axoplasmika dia mampiasa akora sasany izay azo alaina amin'ny tendrony. Mampiasà fomba histochemical hanehoana ny drafitry ny neurons. Ireo mpitrandraka ampiasaina matetika dia misy peroxidase horseradish sy volamena fluorescent.
   
   Ohatra: Ny tanjona dia ny hijerena ny fomban'ny kofehin'ny nerve avy amin'ny vatan'ny rafitry ny rafi-pitabatabana na ny rafi-pitatitra foibe. Voalohany, ny tracer dia atsofoka ao amin'ny faran'ny vatan'ny biby mba hahafahan'ny biby miaina mandritra ny fotoana maharitra. Ny fitaovana dia nalaina avy amin'ny vinavina proxy fibres nerveuse, ary ny traacer dia miorina amin'ny fomba histochemical, ary avy eo ny fomba immunohistochemical dia ampiharina hamaritana ny toetrany.
   
5. Fampiharana amin'ny patolojia klinika. Toy ny famantarana ny natiora ny lesona, ny fahitana lesoka madinidinika, ny fizahana ny fiandohana na ny phenotype ny fivontosana, ny famaritana ny dingana fivontosana, ny fitarihana ny fitsaboana sy ny vinavina, ny fanampiana amin'ny famaritana sy ny fanasokajiana ireo aretina ary ny fikarohana ny antony mahatonga ny aretina. Sns

Protocol Immunohistochemitry

1. Fomba Immunofluorescence

Io no teknika immunohistochemistry voalohany indrindra. Mampiasa ny fitsipiky ny fifamatorana manokana amin'ny antigen-antibody izy io. Voalohany, ny antibody fantatra dia asiana marika amin'ny fluorescein, izay ampiasaina ho toy ny probe mba hijerena ny antigen mifandraika amin'izany ao amin'ny sela na sela. Raha jerenao eo ambanin'ny mikroskopia fluorescence izany, dia hamoaka fluorescence amin'ny halavan'ny onjam-peo iray rehefa taratra amin'ny hazavana excitation ny fluorescein ao amin'ny complexe antigen-antibody. Avy eo dia azo faritana ny toerana misy ny antigen iray ao amin'ny sela, ary azo atao ny fanadihadiana quantitative. Noho ny maha-specificity azy matanjaka, ny fahatsapana avo lenta, ny hafainganam-pandeha ary ny fahatsorana, ny teknolojia immunofluorescence dia ampiasaina betsaka amin'ny diagnostika sy ny fitiliana pathologie klinika.

fampiharana

• Fampiharana amin'ny aretina autoimmune
• Famantarana haingana ny bakteria sy ny viriosy
• Famantarana sy fikarohana ny katsentsitra

2. Fomba fanoratana Immunoenzyme

Ny fomba fametahana marika immunoenzyme dia teknika novolavolaina tamin'ny taona 1960 narahin'ny immunofluorescence . Ny fotokevitra fototra dia ny fampiasana voalohany ny antibody misy marika anzima mba hifaneraserana amin'ny sela na tavy, ary avy eo dia manampy substrates anzima mba hamoronana vokatra na poti-javatra tsy mety levona miloko miaraka amin'ny hakitroky ny elektrôna sasany.

Amin'ny alàlan'ny microscopy maivana na elektronika, ny karazana sela samihafa sy ny singa antigen ao anaty sela dia iharan'ny fikarohana eo an-toerana. Ny haitao fanoratana Immunoenzyme no teknolojia be mpampiasa indrindra. Ny tombony lehibe amin'ity fomba ity raha oharina amin'ny teknolojia fiarovana amin'ny alàlan'ny tsimokaretina:

Ny fomba fanoratana immunoenzyme dia nitombo haingana be, ary karazana fomba fanoratana isan-karazany no azo. Miaraka amin'ny fanatsarana sy fanavaozana mitohy ny fomba, ny miavaka sy ny fahatsapana dia nihatsara be, mora kokoa ampiasaina. Ny fomban'ny ABC, ny fomba SP dingana telo, ny rafi-pamantarana fomba roa-vonona hampiasaina dia be mpampiasa amin'ny famaritana aretina.

fampiharana

• Hatsarao ny fitiliana ny aretina
• Fampiharana klinika ny proteinina oncogene
• Fanombanana ny habetsaky ny fihanaky ny sela fivontosana
• Famaritana micrometastases
• Manan-danja amin'ny fizotran'ny fivontosana
• Tariho ny fitsaboana ny fivontosana
• Manampy amin'ny famaritana ny aretin-ketra ary ny areti-mifindra

3. Teknolojia volamena koloidan'ny hery fiarovana

Ny teknolojia volamena koloida miaro amin'ny aretina dia mampiasa singa metaly manokana toy ny volamena koloida ho marika. Ny volamena koloida dia manondro ny hydrosol an'ny volamena, izay afaka mitroka haingana sy mafy orina ny proteinina tsy misy fiantraikany miharihary amin'ny asan'ny proteinina . Noho izany, ny fampiasana ny antibody voalohany misy marika volamena koloida , ny antibody faharoa , na ny molekiola hafa izay mifamatotra manokana amin'ny immunoglobulin (toy ny proteinina staphylococcal A) ho toy ny probe, dia afaka mahita tsara, na mandrefy ny antigène ao amin'ny sela na ny tavy.

Koa satria ny kôlôlidia volamena dia misy sombintsombiny samy hafa habe ary avo ny hakitroky ny volamena koloidaly, ny teknika volamena immuno-colloidal dia mety indrindra amin'ny fandalinana mari-toerana tokana na marobe fanamarihana mikraoskaopy immunoelectron. Ary noho ny lokon'ny boloky koloidaly mena mena ka hatramin'ny mena lalina, dia mety amin'ny fandinihana mikraoskaopy mazava ihany koa. Toy ny fampiharana ny fanamafisana volafotsy sy ny lalàna volafotsy dia mety kokoa amin'ny fandinihana mikraoskaopy maivana.

Famaranana

Noho ny toetrany miavaka, ny teknolojia immunohistochemistry dia lasa teknika matetika nofidian'ny ankamaroan'ny mpikaroka siantifika amin'ny fametrahana sela sela, fikarohana qualitative ary quantitative. Noho izany, miaraka amin'ny fanavaozana ny fitaovana fikarohana siantifika, ny mpahay siansa dia mila manana fahatakarana lalindalina kokoa sy lalina kokoa momba ny immunohistochemistry , manatsara ny famolavolana lalana ara-teknika, ary mampiroborobo ny fampandrosoana bebe kokoa ny teknolojia immunohistochemistry.

Te hahafantatra bebe kokoa momba ny antigène sy ny antibodie ve ianao? Vakio ny fampahalalana momba ny toerana misy ny FC.

References

• NCBI: Fampiharana immunohistochemistry
• Ivon-toeram-pirenena momba ny homamiadana: Immunohistochemistry