Fitsipika PCR tena izy
Rafitra Aetamiprid
Ny PCR fluorensia amin'ny fotoana tena izy dia fomba iray handrefesana ny habetsaky ny vokatra aorian'ny tsingerin'ny valin'ny polymerase chain (PCR) amin'ny alàlan'ny akora simika fluorescent amin'ny valin'ny fanamafisana ADN. Fomba iray famakafakana be loatra ny filaharana ADN manokana ao anaty santionany hosedraina amin'ny fomba fanondroana anatiny na ivelany.
Ny PCR amin'ny fotoana tena izy dia ny fitadiavana fotoana tena izy amin'ny fizotran'ny PCR amin'ny alàlan'ny famantarana fluorescent mandritra ny fizotran'ny fanamafisana PCR. Noho ny fifandraisana misy eo anelanelan'ny sanda Ct an'ny modely sy ny laharam-kopian'ny voalohan'ny modely nandritra ny vanim-potoana exponential ny fanamafisana PCR, dia nanjary fototry ny fikajiana.
Ny fitsipika fototry ny teknolojia PCR dia mitovy amin'ny fizotry ny ADN voajanahary, ary ny mampiavaka azy dia miankina amin'ny primer oligonucleotide mifameno amin'ny faran'ny fizarana kendrena.
Reagents PCR
Kit PCR ao anatin'izany ny maodely asidra nokleida voadio, ny deoxyribonucleotide (dNTP), ny oligonucleotide primers ary ny polymerase ADN. Ny fanadiovana asidra nokleika sy ny fanombanana kalitao dia dingana lehibe amin'ny fizotran'ny fanandramana PCR. Zava-dehibe ny fampiasana teknika mifanentana amin'ny fitokanana sy fanadiovana ny asidra niokika avy amin'ny akora, satria io dingana io dia hisy fiantraikany amin'ny fihetsika fanamafisana.
Ny polymerase ADN dia manosika ny fampidirana dNTP ho an'ny kofehy ADN miitatra amin'ny alàlan'ny fampidirana ireo fotony izay mifameno amin'ny kofehy modely. Ny famantarana ny polymerases ADN azo hafanaina indrindra sy ny fanovana manaraka ireo enzima ireo dia mitana andraikitra lehibe amin'ny fampandrosoana sy ny fandraisan'ny olona ny fihetsika PCR.
Fanehoan-kevitra PCR
Singa dimy amin'ny fanehoan-kevitry PCR: Misy karazana akora dimy mandray anjara amin'ny fanehoan-kevitra PCR: primera (sombin-kazo PCR dia sombina ADN, ary ny primer ho an'ny replika ADN ao anaty sela dia strand RNA), anzima, dNTP, template ary buffer ( izay takiana Mg2 +).
Dingana PCR
Ny fizotran'ny PCR mahazatra dia mizara telo:
Denaturation ADN: (90 ℃ -96 ℃): Modely ADN misy kofehy indroa mihetsiketsika eo ambany fiasan'ny hafanana, tapaka ny fifamatorana hidrogen mba hamorona ADN tokana.
Fametahana: (60 ℃ -65 ℃): mihena ny maripanan'ny rafitra ary atambatra miaraka amin'ny môdely ADN ny primera hamoronana kofehy roa sosona eo an-toerana.
Fanitarana: (70 ℃ -75 ℃): Eo ambanin'ny asan'ny enzyme Taq (manodidina ny 72 ℃, ny hetsika tsara indrindra), ny dNTP dia ampiasaina ho akora fototra, manomboka amin'ny faran'ny 3 the ny primer ary manomboka amin'ny 5 ′ → Faran'ny 3 '. Synthesize ADN kofehy mifameno amin'ilay modely.
Ny tsingerina tsirairay dia iharan'ny denaturation, annealing ary extension, ary hitombo avo roa heny ny atin'ny ADN. Ankehitriny ny PCR sasany dia manana faritra fanamafisana fohy, ary na dia tsy mitombina aza ny asan'ny anzima Taq dia azo averina ao anatin'ny fotoana fohy izy ireo, ka azo ovaina amin'ny fomba roa, izany hoe notontosaina tamin'ny 60 ℃ -65 ℃ niaraka tamin'izany. Mba hampihenana ny fiakaran'ny maripana sy ny fizotran'ny fahalavoana dia mihombo ny hafainganam-pandehan'ny fanehoan-kevitra.
Valin'ny PCR sy fanadihadiana PCR
1. Raha misy fiolahana fenitra bai dia manisa arakaraka ny fiolahana mahazatra. le
2. Amin'ny ankapobeny, ny habetsaky ny havana dia refesina amin'ny fomba delta delta CT.
3. Ireto misy ohatra: ny sanda CT an'ny génétique A ao amin'ny vondrona dao control dia 20, ary ny sanda CT amin'ny fifehezana anatiny (toy ny βactin) dia 15. Ny sanda CT an'ny zana A ao amin'ny vondrona andrana dia 18, ary ny tombam-bidin'ny CT amin'ny referansa anatiny dia 14.
4. Kajy aloha ny volan'ny santionany: delta CT = 15-14 = 1. Ny herin'ny 2 dia 2. Raha lazaina amin'ny teny hafa, ny habetsahan'ny santionan'ny vondrona andrana dia indroa noho ny vondrona fanaraha-maso. Gene A: delta CT = 20-18 = 2. Ny herin'ny 2 dia 4. Raha lazaina amin'ny teny hafa, ny habetsaky ny gen A ao amin'ny vondrona andrana dia in-4 heny noho ny vondrona mpitantana. Na izany aza, satria ny isan'ny santionany nampiana dia in-droa, ka 4 = 2 = 2, ny habetsahan'ny havany farany dia in-2.
5. teboka vitsivitsy: Ny famaritana ny fanamafisana dia tsy maintsy faritana. Ny soatoavina CT an'ny tanjona kendrena mitovy ihany no azo esorina (mety hafa ny fahombiazan'ny fanamafisana). Ny herin'ny 2 dia ny sanda teôlôjika fotsiny, ary ny fahombiazan'ny fanamafisana dia ambany noho ny 2. Syber Green.
Fampiharana PCR
Matetika ampiharina amin'ireto lafiny ireto ny PCR:
1. Fikarohana ifotony momba ny asidra niokleika: fanasivanana ny génome
2. PCR asymmetric hanomanana ny ADN tokana tokana amin'ny filaharana ADN
3. Avereno PCR hamaritana ireo faritra DNA tsy fantatra
4. Reverse transcription daoPCR (RT-PCR) dia ampiasaina mba hamantarana ny haavon'ny fitenenana ao anaty sela, ny habetsaky ny virus RNA ary hanangona mivantana ny cDNA an'ny fototarazo manokana
5. Fluorescence qualitative PCR dia ampiasaina amin'ny fanaraha-maso ny vokatra PCR amin'ny fotoana tena izy
6. Tapitra haingana ny fanamafisana ny cDNA
7. Famantarana ny fitenin'ny fototarazo
8. Fampiharana ara-pitsaboana: mamantatra aretina mikraoba sy virosy; mamantatra aretina genetika; mamantatra ny fivontosana; fampiharana amin'ny forensika.
Masinina PCR
Ny milina PCR dia antsoina koa hoe amplière PCR, amplifier asidra nuklear PCR, amplifier asidra nuklealy polymerase, karazana fitaovana sy fitaovana izay mampiasa teknolojia PCR (Polymerase chain, polymerase chain reaction) teknolojia hanamafisana ADN manokana Nampiasaina be io any amin'ny laboratoara ara-pitsaboana sy biolojika, ohatra, hamaritana raha toa ka hampiseho ny sarintany momba ny aretina ny génétique, ny aretina azo avy amin'ny areti-mifindra, ny famerenana ny fototarazo ary ny fitsapana ny ray.
PCR inc
Orinasa lehibe voalaza ao amin'ny tsenan'ny PCR Diagnostics Global dia: Abbott Laboratories,
Agilent Technologies Inc.
Alere Inc., Asuragen Inc.,
Biocartis Group Nv, Biofire Diagnostics LLC. (Nahazo an'i Biomerieux),
Biomerieux Sa,
Bio-Rad Laboratories Inc., NY
Cepheid (Orinasa Danaher),
Genmark Diagnostics Inc., NY
Hologic Inc., Luminex Corporation,
Meridian Bioscience Inc., NY
Qiagen NV,
Vondrona Quantumdx,
Rock,
Spartan Bioscience,
T2 biosystems