Lub sijhawm PCR lub hauv paus ntsiab lus
Aetamiprid qauv
Lub sijhawm fluorescence kom muaj nuj nqis PCR yog ib txoj hauv kev ntsuas tag nrho cov khoom lag luam tom qab txhua lub voj voog ntawm polymerase saw cov tshuaj tiv thaiv (PCR) siv cov tshuaj fluorescent hauv DNA cov tshuaj tiv thaiv kev nthuav dav. Ib txoj hauv kev rau kev ntsuas ntau ntawm cov ntu tshwj xeeb DNA hauv cov qauv kom raug sim los ntawm sab hauv lossis sab nraud cov txheej txheem.
PCR lub sijhawm tiag tiag yog kev tshawb pom lub sijhawm tiag tiag ntawm PCR cov txheej txheem los ntawm cov teeb liab fluorescent thaum lub sijhawm PCR kev nthuav dav. Vim tias txoj kab kev sib raug zoo ntawm Ct tus nqi ntawm tus qauv thiab thawj daim qauv ntawm tus qauv thaum lub sijhawm nthuav dav ntawm PCR kev nthuav dav, nws dhau los ua lub hauv paus rau kev ntsuas.
Lub hauv paus ntsiab lus tseem ceeb ntawm PCR thev naus laus zis zoo ib yam li txheej txheem rov ua dua ntawm DNA, thiab nws qhov tshwj xeeb yog nyob ntawm oligonucleotide primers ua tiav rau ob qho kawg ntawm lub hom phiaj ua ntu zus.
PCR cov tshuaj reagents
PCR cov khoom siv suav nrog cov qauv nucleic acid, deoxyribonucleotide (dNTP), oligonucleotide primers thiab DNA polymerase. Nucleic acid purification thiab kev tshuaj xyuas zoo yog cov kauj ruam tseem ceeb hauv txheej txheem kev sim PCR. Nws yog ib qho tseem ceeb uas yuav tsum tau siv cov txheej txheem tsim nyog los cais tawm thiab ua kom cov kua qaub nucleic los ntawm cov khoom siv raw, vim tias cov kauj ruam no yuav cuam tshuam rau cov tshuaj tiv thaiv kev nthuav dav.
DNA polymerase catalyzes qhov sib ntxiv ntawm dNTPs rau txuas ntxiv cov kab DNA los ntawm kev ntxiv cov hauv paus uas ua tiav rau cov qauv txheej txheem. Kev txheeb xyuas cov ntsuas cua sov DNA polymerases thiab kev hloov kho tom ntej rau cov enzymes no ua lub luag haujlwm tseem ceeb hauv kev txhim kho thiab nthuav dav kev pom zoo ntawm PCR cov tshuaj tiv thaiv.
PCR cov tshuaj tiv thaiv
Tsib yam ntawm PCR cov tshuaj tiv thaiv: Muaj tsib yam tshuaj uas koom nrog hauv PCR cov tshuaj tiv thaiv: cov primers (PCR cov txheej txheem yog cov DNA tawg, thiab cov hauv paus rau kev hloov pauv DNA hauv lub xovtooj yog RNA txoj hlua), enzymes, dNTPs, tus qauv thiab tsis ( ntawm qhov twg Mg2+ xav tau).
PCR cov kauj ruam
Tus txheej txheem txheej txheem PCR tau muab faib ua peb theem:
DNA denaturation: (90 ℃ -96 ℃): Muab ob npaug tso rau hauv DNA cov qauv raws li qhov ua kom sov, hydrogen sib txuas sib tawg los tsim ib leeg ib leeg tso tseg DNA.
Annealing: (60 ℃ -65 ℃): Qhov kub ntawm qhov system tau raug txo qis, thiab cov primers tau ua ke nrog DNA tus qauv los tsim ob txoj hlua hauv zos.
Kev txuas ntxiv: (70 ℃ -75 ℃): Raws li qhov ua ntawm Taq enzyme (kwv yees li 72 ℃, kev ua haujlwm zoo tshaj plaws), dNTP yog siv los ua raw khoom, pib los ntawm 3 ′ kawg ntawm cov primer thiab txuas ntxiv los ntawm 5 ′ → 3 ′ kawg. Synthesize DNA strands ntxiv rau tus qauv.
Txhua lub voj voog dhau mus rau qhov tsis lees paub, ua kom rov zoo thiab txuas ntxiv, thiab cov ntsiab lus DNA tau muab ob npaug. Tam sim no qee lub PCRs muaj thaj tsam kev nthuav dav luv luv, thiab txawm hais tias Taq enzyme kev ua haujlwm tsis pom zoo, lawv tuaj yeem rov ua dua nyob rau lub sijhawm luv, yog li nws tuaj yeem hloov pauv mus rau ob txoj hauv kev, uas yog, kho thiab txuas ntxiv yog nqa tawm ntawm 60 ℃ -65 ℃ tib lub sijhawm. Txhawm rau txo qhov kub nce thiab txheej txheem poob, cov tshuaj tiv thaiv tau nce ntxiv.
PCR cov txiaj ntsig thiab kev tshuaj xyuas PCR
1. Yog tias muaj bai tus qauv nkhaus, suav raws tus qauv nkhaus. ua du
2. Feem ntau, qhov txheeb ze muaj nuj nqis yog xam los ntawm delta CT txoj hauv kev.
3. Piv txwv yog raws li hauv qab no: CT tus nqi ntawm noob A hauv pawg tswj hwm dao yog 20, thiab CT tus nqi ntawm kev tswj hwm sab hauv (xws li βactin) yog 15. Tus nqi CT ntawm cov noob A hauv pawg sim yog 18, thiab CT tus nqi ntawm kev siv sab hauv yog 14.
4. Xam cov qauv ntim ua ntej: delta CT = 15-14 = 1. Lub zog ntawm 2 yog 2. Hauv lwm lo lus, cov qauv ntim ntawm pawg sim yog ob zaug ntawm pawg tswj hwm. Gene A: delta CT = 20-18 = 2. Lub zog ntawm 2 yog 4. Hauv lwm lo lus, tus nqi ntawm cov noob A hauv pawg sim yog 4 npaug ntawm pawg tswj hwm. Txawm li cas los xij, vim tias tus nqi piv txwv ntxiv yog ob zaug, yog li 4 = 2 = 2, tus txheeb ze zaum kawg yog 2 zaug.
5. Ob peb ntsiab lus: Qhov tshwj xeeb ntawm kev nthuav dav yuav tsum txiav txim siab. Tsuas yog CT tus nqi ntawm tib lub hom phiaj tuaj yeem raug rho tawm (qhov ua kom tau zoo tuaj yeem sib txawv). Lub zog ntawm 2 tsuas yog tus nqi theoretical, thiab qhov ua tau zoo ntawm kev ua haujlwm tsawg dua 2. Syber Green.
PCR daim ntawv thov
PCR feem ntau yog siv rau cov hauv qab no:
1. Kev tshawb fawb yooj yim ntawm nucleic acid: genome cloning
2. Asymmetric PCR los npaj du ib leeg-tso tseg DNA rau DNA ua ntu zus
3. Rov qab PCR los txiav txim thaj tsam DNA tsis paub
4. Rov qab sau cov ntawv daoPCR (RT-PCR) yog siv txhawm rau txheeb xyuas qib kev qhia hauv cov noob, hauv tus lej RNA tus kab mob thiab ncaj qha clone cDNA ntawm cov noob tshwj xeeb
5. Fluorescence quantitative PCR yog siv rau lub sijhawm saib xyuas cov khoom PCR
6. Kev nthuav dav sai ntawm cDNA xaus
7. Tshawb nrhiav kev qhia noob
8. Cov ntawv kho mob: kuaj kab mob thiab kab mob kis; kuaj kab mob caj ces; kuaj cov qog; ua ntawv thov rau forensics.
PCR tshuab
PCR tshuab tseem hu ua PCR gene amplifier, PCR nucleic acid amplifier, polymerase chain reaction nucleic acid amplifier, nws yog ib yam cuab yeej thiab khoom siv uas siv PCR (Polymerase chain reaction, polymerase chain reaction) thev naus laus zis los nthuav dav tshwj xeeb DNA Nws tau siv dav hauv chav kuaj mob thiab tshuaj lom neeg, piv txwv, txhawm rau txiav txim siab seb tus qauv yuav qhia txog kab mob caj ces daim ntawv qhia, kuaj kab mob sib kis, hloov pauv noob neej, thiab kuaj txiv.
PCR Inc.
Cov Tuam Txhab Loj Tshaj Plaws hauv Kev Tshawb Fawb Ntiaj Teb PCR Kev Lag Luam yog: Abbott Laboratories,
Agilent Technologies Inc.
Alere Inc., Asuragen Inc., UA
Biocartis Group Nv, Biofire Diagnostics LLC. (Tau los ntawm Biomerieux),
Biomerieux Saib,
Bio-Rad Laboratories Inc.
Cepheid (Lub tuam txhab Danaher),
Genmark Diagnostics Inc.
Hologic Inc., Luminex Corporation,
Meridian Bioscience Inc.
Qiagen NV,
Quantumdx Pab Pawg,
Pob zeb,
Spartan Bioscience, uas
T2 Cov Hluav Taws Xob
