Mise à jour du coronavirus: il y en a au total 3.66 millions (données de couronne du compteur mondial) personnes infectées et confirmer cas de coronavirus dans le monde. Il augmentera de jour en jour, les décès numéros de coronavirus 257,301. Le kit de détection est très important par chaque pays pour améliorer et dépister rapidement les cas suspects. La méthode de détection populaire est le test d'acide nucléique, la seconde est le test d'anticorps covid 19, le test le plus récent est pour la détection de l'antigène covid 19. Quels sont les différents 3 types tester le coronavirus? Comment fonctionnent-ils et principe de test? Cet article vous dira ce qui vous préoccupe.
Aujourd'hui, la National Medical Products Administration (NMPA) a approuvé plus de 113 types de nouveaux dispositifs médicaux d'urgence contre les coronavirus provenant de 113 sociétés qui ont le marquage CE ou l'approbation de la FDA. Parmi cela, 80 sortes pour la détection d'acide nucléique et 33 sortes pour test d'anticorps covid 19. La détection des acides nucléiques et des anticorps sériques (ou antigènes) sont les principales méthodes et procédures de test de la confirmation du nouveau coronavirus et du diagnostic du patient. Quels sont les spécimens requis et la procédure d'opération? Et à quels problèmes sommes-nous confrontés actuellement ?
La détection des acides nucléiques présente les caractéristiques d'un diagnostic précoce, d'une sensibilité et d'une spécificité élevées. C'est également le "gold standard" pour le diagnostic de la nouvelle pneumonie infectée par le coronavirus. La méthode la plus répandue est la réaction en chaîne par polymérase en temps réel (RT-PCR). En général, le résultat positif de SRAS-CoV-2 est basé sur le même échantillon qui porte les gènes ORF1ab et N et répond à la double cible positive, ou à la cible unique positive à partir d'une détection répétée, ou les deux échantillons répondent à la cible unique en même temps.
Le gène du virus en tant que cible de détection permet à la séquence d'ADN cible sélectionnée d'augmenter de façon exponentielle par canal d'amplification PCR. Chaque séquence d'ADN amplifiée peut être associée à une sonde fluorescente que nous avons ajoutée au préalable. Plus les gènes cibles sont amplifiés, plus la couleur fluorescente accumulée est forte. Dans les échantillons sans virus, il n'y a pas d'amplification du gène cible, donc aucun signal de fluorescence plus fort ne peut être détecté. Par conséquent, la détection d'acide nucléique consiste en fait à déterminer l'acide nucléique dans l'échantillon par l'accumulation de signaux fluorescents.
Les prélèvements sont généralement des écouvillonnages nasaux, pharyngés, nasopharyngés, des expectorations, du liquide de lavage bronchique, du liquide de lavage alvéolaire (BALF), etc.
Il y a cinq étapes : l'échantillonnage, la conservation des échantillons, le stockage, l'extraction des acides nucléiques et les tests informatiques. Toutes ces procédures nécessitent des expériences scientifiques rigoureuses :
1. Échantillonnage. Essuyez la paroi postérieure du pharynx et les amygdales pharyngées bilatérales avec un écouvillon pharyngé 5 à 10 fois et faites tourner l'écouvillon en continu
2. Rétention de l'échantillon. Immerger la tête de l'écouvillon dans la solution de conservation des cellules, puis casser l'extrémité de l'écouvillon et serrer immédiatement le bouchon du tube pour retenir l'échantillon.
3. Stockage. Mettez le tube d'échantillon dans un sac scellé et envoyez-le pour inspection à temps. Assurez-vous que l'environnement de stockage est de 2 à 8 degrés℃ lors du passage à l'inspection.
4. Extraction d'acide nucléique. Extrayez l'acide nucléique de l'échantillon de virus inactivé pour une détection ultérieure, vous pouvez utiliser un équipement automatisé, tel qu'un instrument d'extraction d'acide nucléique.
5. Détection d'acide nucléique par PCR par fluorescence, c'est-à-dire, test sur la machine, il faudra 70 à 80 minutes pour terminer la réaction PCR.
Par conséquent, l'ajout d'anticorps IgM et IgG lorsque le test d'acide nucléique est négatif, peut pallier les lacunes du diagnostic manqué.
Après 7 jours d'infection par la pneumonie à coronavirus, des anticorps spécifiques du sérum sont progressivement produits, d'abord l'anticorps immunoglobuline (IgM) puis les anticorps IgG. Par conséquent, les anticorps IgM indiquent une infection aiguë récente et une augmentation des anticorps IgG indique des antécédents d'infection.
Les tests sériques ont été édités dans le Programme de diagnostic et de traitement du COVID-19 (7th Version d'essai), parce qu'il a le plus grand avantage de tests rapides et pratiques, qui peuvent briser la limitation existante de la personne et du lieu, et raccourcir le temps de test. Il peut être diagnostiqué comme une infection COVID-19 s'il y a une suspicion positive des anticorps IgM et IgG spécifiques du sérum, ou si l'anticorps IgG passe de négatif à positif, ou si la période de récupération est 4 fois ou plus élevée que celle de la période aiguë.
Ce kit de test est basé sur immunochromatographie d'or colloïdal test, le roman recombinant marqué à l'or colloïdal coronavirus l'antigène et le marqueur d'or d'anticorps de contrôle de qualité sont pulvérisés sur le tampon de liaison ; deux lignes de détection (G et M) et une ligne de contrôle qualité (ligne C) sont enduites sur la membrane NC. Cette carte de tests fait passer l'échantillon liquide le long de la membrane de nitrocellulose, s'il y a des anticorps IgM COVID-19, les anticorps se combineront avec les antigènes viraux marqués et deviendront le conjugué sandwich, le résultat positif peut être lu. Et s'il y a des anticorps IgG COVID-19 dans l'échantillon, les anticorps se combineront avec les antigènes viraux marqués et deviendront le sandwich conjuguer, puis le résultat positif apparaîtra de la même manière. La carte de test dispose également d'une ligne de contrôle qualité (ligne C) pour juger si le processus de chromatographie est réussi.
Les échantillons sont généralement du sang, notamment du sérum, du plasma ou du sang total.
1. Ouvrez le sac en aluminium, sortez la carte de test et placez-la horizontalement sur le bureau ;
2. Utilisez une pipette pour prélever l'échantillon de sérum/plasma/sang total et ajoutez-le au puits d'échantillon, puis aspirez la solution tampon dans le puits d'échantillon.
3. Attendez 15 minutes, puis lisez les résultats.
1. Résultat de faux positifs. Certains échantillons de sang du patient contiennent le facteur rhumatoïde, des anticorps hétérophiles, des autoanticorps, des médicaments et des cellules tumorales, etc., qui provoquent facilement des réactions croisées dans le test, et il y aura parfois des résultats faussement positifs.
2. Résultat faux négatif. La période de fenêtre de la méthode de test des anticorps sériques et la sensibilité différente du kit de test entraîneront également un résultat faussement négatif.
Par conséquent, la détection des anticorps sériques n'est utilisée que comme test supplémentaire pour les cas suspects de test d'acide nucléique négatif de COVID-19, et ne peut pas être appliquée comme indicateur de diagnostic pour le dépistage seul. L'utilisation combinée de la détection des anticorps sériques et de la détection des acides nucléiques peut aider à améliorer le taux de détection du COVID-19, à découvrir autant que possible les patients diagnostiqués et à être plus propice au contrôle de l'épidémie.
La détection de l'antigène COVID-19 peut détecter directement si l'échantillon humain contient le nouveau coronavirus. Le diagnostic est rapide, précis et nécessite peu d'équipement et de personnel. L'ELISA Sandwich permet à deux anticorps spécifiques de l'antigène d'identifier et de se lier à une cible à travers des épitopes différents, ce qui peut réduire considérablement la réaction croisée et améliorer la spécificité du test.
Les antigènes tels que la protéine N, la protéine E et la protéine S du nouveau coronavirus peuvent être utilisés comme immunogènes pour stimuler les plasmocytes à produire des anticorps spécifiques après que le virus infecte le corps humain. Selon le principe Sandwich ELISA, lorsque l'échantillon est déposé sur le tampon d'échantillon, il traversera le tampon de conjugaison, la ligne de test (T) et la ligne de contrôle qualité (C) sur la membrane NC.
Le tampon de conjugaison contient un anticorps spécifique à l'antigène marqué, qui peut se lier à l'antigène (protéine virale) dans l'échantillon. Lorsque l'échantillon atteint la ligne de test (ligne T), le deuxième anticorps spécifique de l'antigène fixé sur cette ligne sera à nouveau combiné avec l'antigène, le résultat positif sera lu. La ligne de contrôle qualité (ligne C) est recouverte d'anticorps IgG et peut être combinée avec l'anticorps dans le tampon d'échantillon pour juger si le processus de chromatographie est réussi.
Les échantillons proviennent généralement de sites d'infection, tels que des écouvillonnages oropharyngés, des écouvillons nasopharyngés, des expectorations, du sérum, du plasma, etc.
1. Déposez le traitement de l'échantillon dans le tube à échantillon ;
2. Agiter l'écouvillon d'échantillonnage et presser contre la paroi du tube, de sorte que l'échantillon soit complètement mélangé à la solution de traitement ;
3. Préparez la carte de test et ajoutez l'échantillon au puits d'échantillon;
4. Attendez 15 minutes, puis lisez les résultats.
1. Faux négatif. La détection des antigènes nécessite une sensibilité plus élevée, car le nouveau coronavirus infecte toujours les voies respiratoires inférieures telles que les alvéoles. Si vous prélevez l'échantillon, les voies respiratoires supérieures telles que le nasopharynx et l'oropharynx peuvent ne pas être en mesure d'attraper des agents pathogènes ou suffisamment COVID-19 virus et provoquer un diagnostic manqué ;
2. Le processus de préparation est difficile et prend du temps. Il faut environ deux ou trois mois pour préparer l'antigène recombinant, puis préparer l'anticorps monoclonal chez la souris. Si l'anticorps préparé a des performances médiocres, il doit être à nouveau préparé pendant deux ou trois mois.
Par conséquent, la méthode de détection d'antigène n'est pas encore mature, et actuellement aucun kit de détection d'antigène n'a été approuvé et enregistré par la National Medical Products Administration.
La nouvelle détection d'acide nucléique / anticorps / antigène de coronavirus a ses propres points et ne peut pas être remplacée les unes par les autres. Une variété de méthodes de détection peuvent être appliquées ensemble en complément, qui peuvent combiner la biologie moléculaire avec la détection immunitaire, faisant pleinement jouer leurs avantages respectifs, améliorant la sensibilité et la spécificité. Tous ces éléments peuvent raccourcir efficacement la période de la fenêtre de détection, augmenter le taux de détection positive et offrir une double protection à tous les groupes à risque possibles.
Référence:
Zhengtu Li, Yongxiang Yi et al. Développement et application clinique d'un test rapide d'anticorps combinés IgM-IgG pour le diagnostic de l'infection par le SRAS-CoV-2. J Med Virol.2020；1-7