Test PCR en temps réel de fluorescence Enterobacter sakazakii

salmonelle

Détection in vitro par PCR fluorescente en temps réel d'enterobacter sakazakii.

Spécification: 96 T/boîte
Le kit est stocké à 2 - 8℃.
La durée de validité est de 12 mois.
Spécification: 96 T/boîte

Utilisations: Détection in vitro par PCR fluorescente en temps réel d'enterobacter sakazakii.

Principe de détection: Le kit contient des amorces spécifiques à enterobacter sakazakii. Lorsque l'échantillon contient enterobacter sakazakii, l'ADN d'enterobacter sakazakii extrait après pré-enrichissement est amplifié de manière exponentielle par PCR. Au cours de la réaction, la sonde fluorescente spécifique d'enterobacter sakazakii s'hybride avec l'acide nucléique cible et est simultanément l'enzyme taq. l'incrément de fluorescence.

Produit et composition :
Composition (96T/kit)SpécificationsQuantité
Solution d'extraction d'ADN3 mlTube 1
Solution de réaction PCR Enterobacter sakazakii1100ulTube 1
Enzyme du robinet (5U/ul)20ulTube 1
Contrôle positif Enterobacter sakazakii40ulTube 1
Contrôle négatif d'Enterobacter sakazakii0.5 mlTube 1
Manuel d'instruction1
Conditions de conservation et date de péremption du kit :
1. Le kit est stocké à 2 -8℃.
2. La période de validité est de 12 mois.

Instruments applicables :
ABI7500, séries 9600, MJ opticon2, Bio-Rad et d'autres instruments de PCR quantitatifs fluorescents sont disponibles

Méthode expérimentale:
1. Prélever 1 ml de solution d'enrichissement dans un tube à centrifuger stérile de 1.5 ml, centrifuger à 1 10.000 tr/min pendant 5 minutes et jeter le surnageant ; utilisez la méthode d'extraction classique au phénol et au chloroforme pour tester le modèle extrait ou stockez-le à 20C jusqu'à ce qu'il soit testé.
2. Placer la solution de réaction PCR à température ambiante pour s'équilibrer, prendre l'enzyme Taq après fusion et ajouter l'enzyme Taq à 2 ∪/tube, c'est-à-dire que chaque système de réaction de test est préparé comme suit : Solution de réaction PCR 22.5u1+0.4ulTaq enzyme.
3. Ajouter la matrice : Décongeler l'extrait d'acide nucléique stocké à -20°C à température ambiante et centrifuger à 13,000 5 tr/min pendant 2 minutes. Les contrôles négatifs et positifs sont décongelés à température ambiante avant utilisation. Dans chaque tube de réaction PCR, ajoutez 1 ul du modèle ou des contrôles négatifs et positifs traités à l'étape XNUMX, couvrez le tube, placez-le sur l'instrument PCR et enregistrez le numéro d'échantillon correspondant.
4. Zone d'amplification et de détection embarquée : les conditions de réaction sont 95C : 3min, 1 cycle ; 95C : 5sec, 60C : 40sec (acquisition du signal), 40 cycles. Le système réactionnel a été réglé à 25ul.
Pour l'instrument PCR à fluorescence multicanaux, le signal est réglé sur Fam fluorescéine.

Jugement des résultats :
Veuillez vous référer au manuel pour plus de détails.

Précautions d'utilisation du kit :
1. Ce kit est uniquement utilisé à des fins de test et de recherche in vitro, veuillez lire attentivement le texte intégral de ce manuel avant de commencer à l'utiliser.
2. L'expérience doit être strictement cloisonnée : zone de préparation pré-PCR-préparer les réactifs expérimentaux ; zone de traitement des échantillons - échantillons à tester, traitement des modèles ; zone de détection-amplification PCR, détection.
3. Pour les normes de gestion de laboratoire pertinentes, veuillez vous référer à la mise en œuvre des normes de gestion pour les laboratoires d'amplification génique émises par les autorités nationales compétentes.

Si vous souhaitez en savoir plus, contactez-nous

    Questions triviales : Enterobacter sakazakii

    À propos d'enterobacter sakazakii

    Qu'est-ce que Enterobacter sakazakii

    Enterobacter sakazakii (ES) est un parasite Gram-négatif non bacille dans les intestins des humains et des animaux, appartenant à la famille des entérobactéries. Ils peuvent causer des maladies aux humains et aux animaux dans certaines conditions, ils sont donc appelés agents pathogènes conditionnels.

    Les dangers d'enterobacter sakazakii

    Enterobacter sakazakii peut provoquer une méningite néonatale sévère, une entérocolite, une bactériémie et un dysfonctionnement neurologique. En 1961, le Royaume-Uni a signalé pour la première fois deux cas de méningite causée par Enterobacter sakazakii. Plus tard, les États-Unis, les Pays-Bas, le Canada et d'autres pays ont successivement signalé des infections néonatales à Enterobacter sakazakii. Les nourrissons infectés par Enterobacter sakazakii ont un taux de mortalité pouvant atteindre 20 à 50 %, et les nourrissons et les jeunes enfants survivants peuvent également avoir des séquelles neurologiques graves.

    Maladie à Enterobacter sakazakii

    En 1961, deux scientifiques, Urmenyi et Franklin au Royaume-Uni, ont signalé pour la première fois deux cas de méningite causée par la bactérie, suivis d'une méningite, d'une septicémie et d'un côlon nécrosant de l'intestin grêle causé par Enterobacter sakazakii dans des rapports successifs dans le monde.

    Infection à Enterobacter sakazakii chez le nouveau-né

    Des cas sporadiques et épidémiques de méningite, de septicémie et de colite nécrosante causées par Enterobacter sakazakii chez les nourrissons et les prématurés se sont succédé dans le monde. Plusieurs études ont montré que les préparations pour nourrissons sont actuellement le principal canal d'infection responsable de la méningite, de la septicémie et de la colite nécrosante chez les nourrissons et les prématurés. Dans certains cas, la mortalité causée par une maladie causée par Enterobacter sakazakii peut atteindre 40 à 80 %. Enterobacter sakazakii a attiré l'attention des services concernés dans de nombreux pays à travers le monde.

    Symptômes d'Enterobacter sakazakii

    La plupart des enfants présentent des symptômes cliniques légers et atypiques et passent facilement inaperçus. Les cas graves peuvent provoquer une entérocolite nécrosante, une septicémie et une méningite.
    (1) Symptômes du système : Fièvre. Les nouveau-nés peuvent montrer des signes d'hypothermie, de dépression mentale, de rejet du lait, d'augmentation de la jaunisse, de teint gris, de peau squameuse et même de choc.
    (B) Symptômes du système digestif : vomissements, distension abdominale, diarrhée, selles sanglantes de mucus, selles s'affaiblissent voire disparaissent, dans les cas graves, une perforation intestinale et une péritonite peuvent survenir.
    (3) Symptômes du système nerveux : irritabilité, pleurs aigus, somnolence et même coma, regard, des convulsions peuvent apparaître, l'examen physique peut inclure une augmentation du périmètre crânien, une craniotomie fendue, une augmentation de la tension du bregma et des signes positifs d'irritation méningée.

    Traitement Enterobacter sakazakii

    (1) Les cas bénins doivent être renforcés et traités de manière symptomatique pour assurer l'apport de liquides et d'électrolytes, et faire attention au suivi.
    (2) Ceux qui ont des symptômes intestinaux évidents devraient choisir des médicaments antibactériens. L'amoxicilline/l'acide clavulanique et d'autres médicaments antibactériens peuvent être sélectionnés et ajustés en fonction des résultats des tests de sensibilité aux médicaments. Des agents protecteurs de la muqueuse intestinale et des agents microécologiques peuvent être utilisés en même temps.
    (3) Dans les cas graves, la ceftazidime, le céfépime, le melopenem, etc. peuvent être utilisés pour le traitement antibactérien et ajustés en fonction de l'effet du traitement clinique et des résultats des tests de sensibilité aux médicaments. Le traitement de soutien symptomatique doit être renforcé ; les enfants atteints d'entérocolite nécrosante doivent être à jeun, une décompression gastro-intestinale doit être administrée à ceux présentant une distension abdominale sévère et un traitement chirurgical doit être administré si nécessaire ; les enfants atteints de méningite doivent recevoir une sédation, une réduction de l'anxiété, une réduction de la pression intracrânienne et des complications Traitement ; donner un traitement anti-choc à temps quand il y a un choc.

    Comment se transmet Enterobacter sakazakii

    Enterobacter sakazakii est une entérobactérie, un bacille à Gram négatif. Enterobacter sakazakii est largement répandu dans la nature et se reproduit rapidement, mais il n'est pas résistant à la chaleur et peut être tué par pasteurisation. Enterobacter sakazakii est une bactérie conditionnellement pathogène. Dans des circonstances normales, il ne nuit pas à la santé humaine, mais il peut provoquer des maladies chez les personnes à faible immunité et les nourrissons, les nouveau-nés, en particulier les prématurés et les nourrissons de faible poids à la naissance.

    Enterobacter sakazakii sources de nourriture courantes

    L'alimentation et l'environnement sont les principales sources de contamination par E. sakazakii. Les scientifiques ont isolé Enterobacter sakazakii à partir d'une variété d'aliments et de boissons. Diverses matières premières de ces aliments et boissons, telles que le lait en poudre, les produits carnés, les produits à base de soja, le pain, etc., peuvent être infectées par enterobacter sakazakii, ce qui entraîne la détection de la bactérie dans le produit final. Parmi eux, le lait en poudre pour nourrissons est considéré comme la source alimentaire la plus courante et la plus sensible d'enterobacter sakazakii.

    Enterobacter sakazakii dans les préparations en poudre pour nourrissons

    Enterobacter sakazakii est une créature qui existe dans l'environnement et se trouve couramment dans les installations et les environnements domestiques où les préparations pour nourrissons sont produites. Bien que les préparations pour nourrissons ne soient pas un produit stérile et puissent être contaminées par des agents pathogènes pouvant causer des maladies graves, si les préparations pour nourrissons sont correctement préparées et conservées, le risque d'infection par Enterobacter sakazakii peut être considérablement réduit. Pour préparer en toute sécurité les préparations pour nourrissons, vous devez d'abord nettoyer et stériliser le matériel d'alimentation et de préparation.

    Prévention d'Enterobacter sakazakii

    Pour la contamination par Enterobacter sakazakii dans les aliments pour nourrissons, la contamination de la bactérie doit être contrôlée à partir de la source, des matériaux de transformation et d'emballage des aliments pour nourrissons. Tout d'abord, nous devons renforcer la prévention de la pollution et le contrôle des ingrédients alimentaires pour les nourrissons et les jeunes enfants. Une désinfection et une inspection strictes des matières premières doivent être effectuées. Les matières premières contaminées doivent être traitées à temps. Ne pas entrer dans l'atelier de production pour éviter la pollution d'autres matières premières.

    Deuxièmement, stériliser strictement tous les maillons du processus de traitement, tels que la bouche, les mains, les pieds, la tête, les chaussures, les vêtements de travail, les casquettes, etc. de l'opérateur, doivent être effectués de manière hygiénique. Dans le même temps, les bactéries sont complètement tuées par la pasteurisation, la stérilisation à ultra haute température ou d'autres processus à haute température pendant le traitement.

    Pour prévenir la contamination par E. sakazakii, un système efficace d'analyse des risques et de contrôle de la qualité pour les points de contrôle critiques doit également être établi et strictement mis en œuvre pendant le processus de production. De plus, les matériaux d'emballage doivent être efficacement désinfectés et l'ensemble de l'environnement de l'atelier de production et d'emballage doit être désinfecté régulièrement.

    De plus, dans l'alimentation des nourrissons et des jeunes enfants, puisqu'il existe également un risque d'infection à Enterobacter sakazakii dans la famille, il est recommandé de nettoyer et de désinfecter soigneusement les biberons et autres ustensiles d'alimentation pour le lait en poudre. De plus, l'allaitement est également l'un des moyens efficaces de réduire le risque d'infection néonatale à E. sakazakii.

    Identification biochimique d'Enterobacter sakazakii

    Méthodes d'inspection traditionnelles

    La méthode traditionnelle de séparation et de détection d'Enterobacter sakazakii dépend des caractéristiques biochimiques et morphologiques. Au niveau international, « Séparation et comptage d'Enterobacter sakazakii dans les préparations pour nourrissons » promulguée par la FDA des États-Unis est généralement utilisé comme méthode classique.

    Spectrométrie de masse à temps de vol à ionisation par désorption laser assistée par matrice

    La méthode de spectrométrie de masse à temps de vol à ionisation par désorption laser assistée par matrice (MAL-DITOF-MS) consiste à mélanger l'échantillon à mesurer avec la solution matricielle dans un certain rapport et à utiliser une irradiation laser pulsée pour exciter la matrice, provoquant la polymère pour générer des ions moléculaires et polymérisation des ions moléculaires Le corps est accéléré et détecté dans un spectromètre de masse à temps de vol. En conséquence, le polymère mesuré est séparé en fonction du nombre de masse, traité pour former un spectre de masse, et analysé et comparé par un logiciel pour cribler et déterminer le spectre de spécificité (empreinte digitale) pour réaliser la différenciation et l'identification des espèces ou souches de micro-organismes cibles.

    Méthodes d'essai de biologie moléculaire

    À l'heure actuelle, les méthodes de test de biologie moléculaire d'E. sakazakii utilisées dans les produits laitiers comprennent la méthode PCR ordinaire (méthode d'électrophorèse), la méthode de test d'amplification constante par boucle d'ADN (LAMP) et la méthode PCR fluorescente. Cette méthode surmonte les lacunes des méthodes d'inspection traditionnelles telles que les opérations lourdes, chronophages et difficiles à distinguer les résultats. Il a également conduit au développement rapide de méthodes de détection rapide pour Enterobacter sakazakii. Cependant, cette méthode présente également les inconvénients d'une concentration élevée de bactéries à mesurer dans l'échantillon, d'un coût d'analyse élevé, d'une opération lourde et d'une incapacité à identifier la présence de bactéries vivantes.

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