Test PCR en temps réel par fluorescence E coli

salmonelle

Détection in vitro par PCR fluorescente en temps réel d'E coli.

Spécification: 96 T/boîte
Le kit est stocké à 2 - 8℃.
La durée de validité est de 12 mois.
Spécification: 96 T/boîte

Utilisations: Détection in vitro de e coli par PCR fluorescente en temps réel.

Principe de détection: Le kit contient des amorces spécifiques à e coli. Lorsque l'échantillon contient des e coli, l'ADN de e coli extrait après pré-enrichissement est amplifié de façon exponentielle par PCR. Au cours de la réaction, la sonde fluorescente spécifique à e coli s'hybride avec l'acide nucléique cible et est simultanément hydrolyse enzymatique Taq pour séparer le groupe fluorescent du groupe d'extinction sur la sonde : de sorte que la présence d'e coli puisse être jugée en temps réel par l'incrément de fluorescence.

Produit et composition :
Composition (96T/kit)SpécificationsQuantité
Solution d'extraction d'ADN3 mlTube 1
Solution de réaction PCR E coli1100ulTube 1
Enzyme du robinet (5U/ul)20ulTube 1
Contrôle positif E coli40ulTube 1
Contrôle négatif E coli0.5 mlTube 1
Manuel d'instruction1
Conditions de conservation et date de péremption du kit :
1. Le kit est stocké à 2 - 8℃.
2. La période de validité est de 12 mois.

Instruments applicables :
ABI7500, séries 9600, MJ opticon2, Bio-Rad et d'autres instruments de PCR quantitatifs fluorescents sont disponibles

Méthode expérimentale:
1. Prélever 1 ml de solution d'enrichissement dans un tube à centrifuger stérile de 1.5 ml, centrifuger à 1 10.000 tr/min pendant 5 minutes et jeter le surnageant ; utilisez la méthode d'extraction classique au phénol et au chloroforme pour tester le modèle extrait ou stockez-le à 20C jusqu'à ce qu'il soit testé.
2. Placer la solution de réaction PCR à température ambiante pour s'équilibrer, prendre l'enzyme Taq après fusion et ajouter l'enzyme Taq à 2 ∪/tube, c'est-à-dire que chaque système de réaction de test est préparé comme suit : Solution de réaction PCR 22.5u1+0.4ulTaq enzyme.
3. Ajouter la matrice : Décongeler l'extrait d'acide nucléique stocké à -20°C à température ambiante et centrifuger à 13,000 5 tr/min pendant 2 minutes. Les contrôles négatifs et positifs sont décongelés à température ambiante avant utilisation. Dans chaque tube de réaction PCR, ajoutez 1 ul du modèle ou des contrôles négatifs et positifs traités à l'étape XNUMX, couvrez le tube, placez-le sur l'instrument PCR et enregistrez le numéro d'échantillon correspondant.
4. Zone d'amplification et de détection embarquée : les conditions de réaction sont 95C : 3min, 1 cycle ; 95C : 5sec, 60C : 40sec (acquisition du signal), 40 cycles. Le système réactionnel a été réglé à 25ul.
Pour l'instrument PCR à fluorescence multicanaux, le signal est réglé sur Fam fluorescéine.

Jugement des résultats :
Veuillez vous référer au manuel pour plus de détails.

Précautions d'utilisation du kit :
1. Ce kit est uniquement utilisé à des fins de test et de recherche in vitro, veuillez lire attentivement le texte intégral de ce manuel avant de commencer à l'utiliser.
2. L'expérience doit être strictement cloisonnée : zone de préparation pré-PCR-préparer les réactifs expérimentaux ; zone de traitement des échantillons - échantillons à tester, traitement des modèles ; zone de détection-amplification PCR, détection.
3. Pour les normes de gestion de laboratoire pertinentes, veuillez vous référer à la mise en œuvre des normes de gestion pour les laboratoires d'amplification génique émises par les autorités nationales compétentes.

Si vous souhaitez en savoir plus, contactez-nous

    Questions triviales : E coli

    À propos d'e coli

    E. coli, également connue sous le nom d'Escherichia coli, a été découverte par Escherich en 1885. Escherichia coli est une bactérie pathogène conditionnelle. Dans certaines conditions, il peut provoquer des infections gastro-intestinales ou des infections des voies urinaires de divers tissus et organes chez l'homme et divers animaux.

    Taille d'E coli

    La taille est de 0.5 × 1~3 microns. Chow flagelles, peut se déplacer sans du spores. Il peut fermenter une variété de sucres pour produire de l'acide et du gaz. C'est une bactérie résidente normale dans les intestins des humains et des animaux. Il pénètre dans les intestins des nourrissons après la naissance et est accompagné par les humains à vie, représentant près d'un tiers du poids sec des matières fécales.

    E coli forme

    E coli est Brevibacterium, avec des extrémités arrondies émoussées et Gram négatif. Parfois, en raison d'environnements différents, les cellules individuelles semblent être sphériques ou filamenteuses; E. coli sont pour la plupart simples ou deux, mais ils ne seront pas disposés en une longue chaîne; la plupart des souches d'E. coli ont une structure de capsules ou de microcapsules, mais ne peuvent pas former de spores; la plupart des souches d'E. coli développent des fimbriae, dont certaines sont des fimbriae spécifiques à l'hôte qui adhèrent à l'hôte et à d'autres tissus ou cellules.

    Classement E. coli

    Effet pathogène
    À l'heure actuelle, la classification internationalement reconnue comprend principalement six types d'E. coli, à savoir E. coli pathogène intestinal (EPEC), E. coli toxigène intestinal (ETEC) et l'invasion intestinale pouvant provoquer des infections gastro-intestinales. E coli (EIEC), E coli hémorragique intestinal (EHEC), E coli intestinal aggrégatif (EAEC) et les toxines intestinales de type Shiga trouvées ces dernières années ont également certains E coli invasifs (ESIES). UPEC) qui peuvent provoquer une infection des voies urinaires, et le nouveau E. coli adhérent agglomérant intestinal (EAggEC).

    Hémolytique
    Selon la capacité d'E. coli à produire de l'hémolysine et sa capacité à hémolyser, E. coli peut être divisé en deux catégories : E. coli hémolytique et E. coli non hémolytique.

    Entérotoxinogène
    Selon la capacité d'E coli à produire une entérotoxine au cours du processus d'infection, E coli peut être divisé en deux catégories : E coli entérotoxinogène et E. coli non entotoxinogène. E. coli entérotoxinogène est un agent pathogène important de toute diarrhée infectieuse chez l'homme et divers animaux. L'identification des E. coli entérotoxinogènes consiste principalement à déterminer le type d'entérotoxine sécrétée par les E. coli isolés. De plus, selon la capacité d'E. coli à produire des entérotoxines, combinée à sa sensibilité aux différentes entérotoxines, E. coli peut être classé comme type d'entérotoxine.

    Infection à E. coli

    E. coli est une bactérie résidente normale dans les intestins des animaux, et une petite partie d'entre elles provoque des maladies dans certaines conditions. Les sérotypes d'E. coli peuvent provoquer des infections gastro-intestinales chez les humains ou les animaux, principalement causées par des antigènes de fimbria spécifiques, des toxines pathogènes et d'autres infections. En plus des infections gastro-intestinales, ils peuvent également provoquer des infections des voies urinaires, de l'arthrite et des méninges. Inflammation et infections septiques.
    Escherichia coli comprend plusieurs groupes bactériens avec une pathogénicité différente. Les infections humaines à E. coli sont grossièrement divisées en deux types : les infections intestinales et les infections extra-intestinales.

    Symptômes d'E. coli

    Le symptôme le plus typique d'une infection intestinale peut être la diarrhée. Si l'infection est grave, un choc peut survenir, la pression artérielle peut chuter et la fréquence cardiaque peut augmenter. S'il s'agit d'une infection intestinale, des nausées, des vomissements, de la fièvre, une fréquence urinaire et une miction impérieuse peuvent survenir après une infection à E. coli.

    E. coli pathogène

    Généralement, E. coli est divisé en quatre groupes bactériens selon sa pathogénicité pour l'homme : E. coli commun, E. coli entéropathogène, E. coli entérotoxinogène et E. coli invasif. Les trois derniers sont des bactéries pathogènes qui causent la diarrhée.

    Pathogénie E coli

    Chaque flore comprend un certain nombre de sérotypes. Escherichia coli entérotoxinogène peut produire une entérotoxine résistante à la chaleur et une entérotoxine résistante à la chaleur. La production de ces deux entérotoxines est génétiquement contrôlée par des plasmides. Le plasmide est une sorte d'ADN non chromosomique qui peut être facilement transmis. La transmission mutuelle de plasmides peut permettre aux souches non productrices de toxines d'obtenir une capacité de production de toxines. En raison de la délivrance du plasmide, Escherichia coli de n'importe quel sérotype peut produire une entérotoxine et un facteur de colonie, ayant ainsi une pathogénicité.

    Traitement E. coli

    Premièrement, si les symptômes de l'infection ne sont pas très graves et que la diarrhée et les douleurs abdominales sont légères, l'administration orale de bifidobactéries peut améliorer le dysfonctionnement gastro-intestinal et réguler les troubles de la microflore intestinale.
    Si les douleurs abdominales et la diarrhée sont graves et que les selles sont liquides, envisagez de donner un traitement anti-inflammatoire tel que des antibiotiques quinolones ou de la berbérine, et un remplacement liquidien approprié pour améliorer les symptômes de déshydratation.

    D'où vient e coli

    Escherichia coli est l'un des micro-organismes les plus communs, largement répandus dans la nature, dont la plupart ne sont pas pathogènes, principalement parasitaires dans les intestins de l'homme ou des animaux, et sont appelés « flore normale » par l'homme.

    Transmission d'E. coli

    La principale source d'infection de la maladie humaine à E. coli est qu'un grand nombre d'agents pathogènes E. coli sont excrétés dans les selles des patients atteints d'une infection gastro-intestinale. La voie de transmission d'E. coli parmi les humains se fait principalement par voie fécale-orale, ce qui peut provoquer la propagation ou l'épidémie de la maladie à E. coli dans certaines conditions.

    Enterobacter sakazakii dans les préparations en poudre pour nourrissons

    Enterobacter sakazakii est une créature qui existe dans l'environnement et se trouve couramment dans les installations et les environnements domestiques où les préparations pour nourrissons sont produites. Bien que les préparations pour nourrissons ne soient pas un produit stérile et puissent être contaminées par des agents pathogènes pouvant causer des maladies graves, si les préparations pour nourrissons sont correctement préparées et conservées, le risque d'infection par Enterobacter sakazakii peut être considérablement réduit. Pour préparer en toute sécurité les préparations pour nourrissons, vous devez d'abord nettoyer et stériliser le matériel d'alimentation et de préparation.

    Prévention contre E. coli

    1. Gardez l'endroit et les ustensiles de cuisine propres et jetez correctement les ordures.
    2. Gardez vos mains propres et coupez vos ongles fréquemment.
    3. Lavez-vous les mains à l'eau et au savon avant de manger ou de manipuler des aliments. Vous devez également vous laver les mains après être allé aux toilettes ou avoir changé des couches.
    4. L'eau du robinet doit être utilisée pour l'eau potable, et il est préférable de la faire bouillir avant de la boire.
    5. Les aliments frais doivent être achetés dans un endroit fiable, et non en fréquentant des colporteurs sans licence.
    6. Évitez de manger des aliments à haut risque, tels que du lait qui n'a pas été traité par stérilisation à basse température, ainsi que des steaks de hamburger insuffisamment cuits, du bœuf haché et d'autres aliments à base de viande.
    7. Lors de la cuisson des aliments, portez un tablier propre et lavable et un chapeau.
    8. Les aliments doivent être soigneusement lavés.
    9. Les aliments périssables doivent être recouverts d'un couvercle et conservés au réfrigérateur.
    10. Les aliments crus et les aliments cuits, en particulier le bœuf et les abats de bœuf, doivent être manipulés et stockés séparément (stockez les aliments cuits en haut du réfrigérateur et les aliments crus en bas) pour éviter la contamination croisée.
    11. Le réfrigérateur doit être nettoyé et fondu régulièrement, et la température doit être maintenue à 4 degrés Celsius ou moins.
    12. Si toutes les parties des aliments sont chauffées à 75 degrés Celsius, E. coli O157:H7 peut être éliminé; par conséquent, le bœuf haché et le steak de hamburger doivent être bien cuits à 75 degrés Celsius pendant 2 à 3 minutes, jusqu'à ce que la viande cuite soit complètement tournée. Elle est brune et la sauce devient claire.
    13. Ne manipulez pas les aliments cuits à mains nues ; si nécessaire, portez des gants.
    14. Les aliments doivent être consommés le plus tôt possible après la cuisson.
    15. S'il est nécessaire de conserver les restes d'aliments cuits, ceux-ci doivent être réfrigérés et consommés dès que possible. Bien réchauffer avant de manger. Les aliments avariés doivent être jetés.

    Tester e coli

    Méthode de fermentation

    Cette méthode est principalement destinée à la culture d'E. coli sur un milieu à 44.5°C, qui contient un substrat fluorescent et nécessite 24 heures de culture. Les principales étapes comprennent la fermentation, la culture de séparation, la fermentation secondaire, l'observation au microscope, etc.

    Spectrométrie de masse à temps de vol à ionisation par désorption laser assistée par matrice

    La méthode de spectrométrie de masse à temps de vol à ionisation par désorption laser assistée par matrice (MAL-DITOF-MS) consiste à mélanger l'échantillon à mesurer avec la solution matricielle dans un certain rapport et à utiliser une irradiation laser pulsée pour exciter la matrice, provoquant la polymère pour générer des ions moléculaires et polymérisation des ions moléculaires Le corps est accéléré et détecté dans un spectromètre de masse à temps de vol. En conséquence, le polymère mesuré est séparé selon la nombre de masse, traités pour former un spectre de masse, et analysés et comparés par un logiciel pour cribler et déterminer le spectre de spécificité (empreinte digitale) pour réaliser la différenciation et l'identification des espèces ou souches de micro-organismes cibles.

    Méthode des billes immunomagnétiques

    Le principe principal de la technologie de séparation est d'utiliser des billes magnétiques comme support et un anticorps pour combiner l'anticorps et les billes magnétiques, puis de compléter le mouvement mécanique grâce à la technologie magnétique pour séparer E. coli. Par rapport à d'autres méthodes de séparation des bactéries, cette méthode présente certains avantages. Cette technologie peut améliorer le taux de réussite de détection de Vibrio pathogène dans les échantillons, et la technologie des billes immunomagnétiques peut traiter différents micro-organismes dans différentes espèces bactériennes. , Et dans une large mesure améliorer l'efficacité de détection.

    Tests d'instruments automatisés

    Principale utilisation de l'analyseur automatisé immunitaire, cette technologie a été produite et utilisée en 1970. Avec le développement et les progrès de la science et de la technologie, la technologie de détection automatique des instruments est largement utilisée et elle est très pratique à utiliser, elle peut faire gagner beaucoup de temps , son degré d'interférence est faible, il peut économiser de la main-d'œuvre et du matériel, et peut également améliorer la précision de la détection. Dans le processus de développement actuel, l'application du système de dosage immunoenzymatique automatique est très étendue.

    Bioluminescence ATP

    Dans le processus de développement de ces dernières années, la technologie de bioluminescence est largement utilisée et il s'agit d'une technologie relativement rapide pour détecter les micro-organismes. Dans les cellules actives, l'ATP est son produit métabolique énergétique commun, qui peut fournir l'énergie nécessaire pendant les activités physiologiques des cellules. Et, cette technologie peut maintenir un certain contenu dans une certaine plage dans le corps vivant. La technologie de détection d'Escherichia coli dans les aliments peut adopter la méthode de photométrie par fluorescence, car la raison pour laquelle l'organisme émet de la lumière est le rôle de la luciférase, qui produit l'effet d'émission lumineuse. La substance provient des lucioles d'Amérique du Nord et peut catalyser l'oxydation de la fluorescéine. Cependant, la substance est instable et peut décomposer rapidement la fluorescence. De plus, le processus d'acquisition des résultats de la technologie de détection est très rapide et l'appareil est facile à transporter et convient parfaitement à la détection sur site.

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