Tampon d'échantillon et tampon de conjugué pour les dosages à flux latéral

Le dosage immunologique latéral (dosages immunologiques à flux latéral) est une forme principale de test au point de service (POCT), son essence est toujours la réponse immunitaire de l'antigène anticorps. Cependant, la méthode traditionnelle consiste à placer la réaction antigène anticorps sur une plaque à 96 puits, ou à la surface de microsphères magnétiques, tandis que la détection par immunochromatographie latérale place la réaction immunitaire dans une membrane poreuse de nitrocellulose (membrane NC). Par conséquent, elle est également appelée détection de bandelettes de test.

Les principaux composants de la détection par immunoessai à flux latéral comprennent le papier absorbant, la membrane chromatographique, le tampon conjugué et le tampon échantillon, ainsi qu'une plaque de base en plastique supportant tous les matériaux. L'échantillon liquide est ajouté à partir du tampon d'échantillon et s'écoule vers le côté du papier absorbant. Lors du passage à travers le tampon conjugué, les immunosondes (or colloïdal, microsphères fluorescentes, etc.) sur le tampon conjugué sont libérées et réagissent avec l'analyte dans l'échantillon pendant le processus d'écoulement, puis fixées à la ligne de détection sur le membrane NC (Ligne de test) L'anticorps capture et s'agrège pour former un signal optique.

Dosages à flux latéral est née dans les années 1990. Grâce à la stabilité de la technologie de préparation de l'or colloïdal, une méthode de diagnostic rapide développée en conjonction avec le dosage immunologique s'est développée. Selon le développement des sondes, la technologie du test de flux latéral est passée par trois étapes principales : l'or colloïdal, les microsphères de latex teintées et les microsphères fluorescentes. En conséquence, les résultats de détection sont également passés par trois étapes : qualitative, semi-quantitative et quantitative.

Le tampon échantillon peut être utilisé pour effectuer plusieurs tâches, dont la plus importante est de favoriser une distribution uniforme et contrôlée de l'échantillon sur le tampon conjugué. Il contrôle également la vitesse à laquelle le liquide pénètre dans le tampon conjugué, empêchant ainsi le dispositif de déborder. Lorsqu'il est imprégné de protéines, de détergents, d'agents collants et de sels tampons.
Il existe généralement deux types de matériaux utilisés comme tampons d'échantillonnage : les filtres en fibre de cellulose et les mailles tissées.

En ajoutant un retardateur au tampon d'échantillon, le retardement de la membrane peut être éliminé. Cette méthode peut être plus facile et plus rentable que d'essayer de bloquer directement la membrane. À moins que l'anticorps (ou l'antigène) ne soit lié de manière covalente aux particules du détecteur, en présence de protéines bloquantes ou de détergents, il est recommandé de ne pas sécher les réactifs du détecteur dans le tampon de liaison.

Augmenter la viscosité de l'échantillon (ajuster les caractéristiques de débit).
Améliorez la capacité des échantillons à dissoudre les réactifs de détection.
Empêcher les conjugués et les analytes de se lier de manière non spécifique à des matériaux en aval.
Modifiez les propriétés chimiques de l'échantillon pour le rendre compatible avec le complexe immun sur la ligne de test.
Favoriser un écoulement uniforme de l'échantillon le long de la membrane.
La supplémentation en protéines, en détergents et en tensioactifs peut favoriser la reconjugaison des conjugués, réduire la liaison des liants non spécifiques et minimiser la membrane d'adsorption de l'analyte.

Les tampons conjugués peuvent effectuer plusieurs tâches, dont la plus importante est le transfert uniforme des réactifs de détection et des échantillons de test vers la membrane. Lorsque l'échantillon s'écoule dans le tampon de conjugué, le réactif de détection se dissout, soulève le matériau du tampon et se déplace dans la membrane avec l'échantillon.
La fonction importante du tampon de conjugué est de délivrer les particules d'agent de test sous la forme d'un volume constant d'échantillon sur chaque bandelette de test vers la membrane.

Faible liaison non spécifique. Si le réactif de détection ou l'analyte se lie au tampon de liaison, il ne pourra pas former de complexes immuns sur la ligne de test, réduisant ainsi la force et la sensibilité du signal.

Caractéristiques de débit constantes. Des caractéristiques de débit incohérentes peuvent entraîner de graves problèmes de performances. Si le matériau ne parvient pas à déposer l'échantillon uniformément sur la membrane, le réactif de détection peut être dirigé sur la membrane et des stries peuvent apparaître lorsque l'échantillon migre le long de la membrane. Par conséquent, des signaux irréguliers apparaîtront sur les lignes de test et de contrôle.

Le volume du lit est constant. Lors du chargement dans un tampon de conjugué par immersion, la quantité de réactif de détection dans chaque bandelette réactive dépend du volume de lit du matériau. Si le volume du lit varie fortement, une intensité de signal variable sera observée même si tous les autres composants de la bande restent inchangés.

Extrait faible. En plus des extraits chimiques, le matériau doit également être exempt de particules pouvant bloquer la membrane à l'interface tampon conjugué/membrane.

Bonnes caractéristiques de traitement de la bande et compressibilité constante. Ces attributs sont très importants pour incorporer la production de bandelettes réactives et transférer de manière stable le liquide vers la membrane.

Les deux sont utilisés pour stocker différents échantillons. Le tampon conjugué est un support pour le marquage des protéines, tandis que le tampon échantillon est un support pour le prétraitement des solutés biochimiques. Par conséquent, compte tenu de la coexistence à long terme avec la protéine, le tampon conjugué ne peut maintenir qu'un pH neutre, une faible concentration en ions sel, etc., pour créer un bon environnement de conservation pour la protéine. Le tampon d'échantillon est confronté à une solution d'échantillon plus complexe, il nécessite donc de plus grandes capacités de prétraitement et de filtration.

Du point de vue de la technologie de marquage, le dosage à flux latéral est passé par plusieurs étapes telles que l'or colloïdal, les microsphères de latex colorées et les microsphères fluorescentes. De plus, la fluorescence des points quantiques et les particules magnétiques ont été développées ces dernières années. Les microsphères d'or colloïdal et de latex sont principalement jugées à l'œil nu pour le changement de couleur, généralement uniquement pour une détection qualitative, et doivent coopérer avec l'instrument pour obtenir un résultat semi-quantitatif. Avec l'aide de l'amplification du signal de fluorescence et de l'analyseur fluorescent pour lire l'intensité de fluorescence, les microsphères fluorescentes peuvent déjà réaliser une détection quantitative, qui est le courant dominant du développement d'aujourd'hui.

L'immunochromatographie à flux latéral est une méthode de dosage immunologique rapide qui combine l'immunologie et la chromatographie. Il est principalement utilisé pour la détection d'agents pathogènes, d'hormones, de médicaments et de métabolites. Le principe est d'identifier des antigènes ou des anticorps en étiquetant l'objet Inspection.
BALLIA est engagé dans la recherche des sciences biologiques et possède sa propre expérience et une expérience approfondies dans l'utilisation de l'immunochromatographie latérale. En utilisant l'immunochromatographie latérale, Ballya a développé avec succès une variété de kit de test rapide pour les produits laitiers, le miel, les produits aquatiques, les pesticides, la falsification, les maladies des animaux de compagnie et les maladies du bétail. À l'avenir, Ballya continuera à mener des recherches plus approfondies sur d'autres aspects des tests.