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Immunohistochimie (ihc), aussi connu sous le nom immunocytochimie, se réfère à une nouvelle technologie que la détermination qualitative, localisée et quantitative de la antigène est réalisée par réaction antigène-anticorps et réaction de couleur histochimique dans les cellules tissulaires situ par des anticorps marqué avec un réactif chromogène.
Il combine habilement la spécificité de la réponse immunitaire et la visibilité de l'histochimie. À l'aide de l'imagerie et du grossissement des microscopes (y compris les microscopes à fluorescence et les microscopes électroniques), il peut détecter diverses substances antigéniques (telles que de protéines, polypeptide, enzymes, hormones, agents pathogènes et récepteurs, etc.). Immunohistochimie la technologie s'est développée rapidement ces dernières années. Dans les années 1950, elle se limitait à la technologie d'immunofluorescence. Et depuis lors, une technologie immunoenzymatique hautement sensible et plus pratique a été progressivement développée.
La liaison entre anticorps et l'antigène a un degré élevé de spécificité, et immunohistochimie exploite ce principe. Premièrement, une certaine substance chimique du tissu ou de la cellule est extraite et utilisée comme antigène ou haptène. Après avoir immunisé l'animal, un anticorps spécifique est obtenu, puis l'anticorps est utilisé pour détecter la même substance antigénique dans le tissu ou la cellule. Étant donné que le complexe d'antigène et d'anticorps est incolore, il est nécessaire de montrer le site de liaison de l'antigène et de l'anticorps au moyen de l'histochimie pour effectuer des recherches qualitatives, localisées ou quantitatives sur des antigènes inconnus dans les tissus ou les cellules.
A. Forte spécificité
Le principe de base de l'immunologie détermine que la liaison entre l'antigène et l'anticorps est hautement spécifique. Par conséquent, immunohistochimie est théoriquement un affichage spécifique de antigène dans les cellules tissulaires. Par exemple, la kératine montre des composants épithéliaux et l'ACL montre des lymphocytes. ingrédient. Ce n'est que lorsqu'il y a des antigènes croisés dans les cellules tissulaires que des réactions croisées se produisent.
B. Haute sensibilité
Dans la phase initiale de l'application de immunohistochimie, en raison de limitations techniques, seules la méthode directe, la méthode indirecte et d'autres technologies moins sensibles étaient disponibles. A cette époque, l'anticorps ne pouvait être dilué que plusieurs fois ou des dizaines de fois ; maintenant, l'avènement de la méthode ABC ou SP permet aux anticorps d'être dilués des milliers, des dizaines de milliers, voire des centaines de millions de fois, et l'anticorps peut toujours se lier aux antigènes des cellules tissulaires. Cette réaction anticorps-antigène très sensible rend les méthodes d'immunohistochimie de plus en plus pratiques pour le diagnostic pathologique de routine.
C. Positionnement précis, combinaison de forme et de fonction
Cette technologie peut localiser avec précision les antigènes dans les tissus et les cellules grâce à une réaction antigène-anticorps et une réaction colorée, de sorte que différents antigène peuvent être positionnés et observés dans le même tissu ou la même cellule en même temps. Ainsi, la combinaison de la morphologie et de la fonction peut être étudiée, ce qui est très significatif pour mener des recherches approfondies dans le domaine de la pathologie.
A. spécimen
Les expériences utilisent principalement des échantillons de tissus et des échantillons de cellules. Le premier comprend enrobage de paraffine coupes (coupes pathologiques et puces tissulaires) et coupes congelées, et cette dernière comprend les empreintes de tissus, les lames cellulaires et les frottis cellulaires.
Parmi eux, la coupe à la paraffine est la méthode la plus couramment utilisée et la plus basique pour faire des échantillons de tissus. Il est bien conservé pour la morphologie des tissus et peut être utilisé pour des coupes en série, ce qui est propice à diverses observations de contrôle de coloration ; il peut aussi être longtemps archivé pour des recherches rétrospectives ; Cela aura un certain impact sur l'exposition aux antigènes, mais récupération d'antigène peut être effectuée, qui est la méthode préférée de préparation d'échantillons de tissus dans immunohistochimie.
B. anticorps
Les anticorps couramment utilisés dans les expériences immunohistochimiques sont anticorps monoclonal et polyclonal anticorps. Les anticorps monoclonaux sont des anticorps sécrétés par un clone de lymphocytes B et sont préparés en immunisant des animaux avec la technologie des hybridomes de fusion cellulaire. L'anticorps polyclonal est un immunsérum obtenu à partir de sang animal après que l'antigène purifié est directement immunisé. C'est un mélange d'anticorps produits par plusieurs clones de lymphocytes B.
C. Méthodes de teinture courantes
Selon les différents marqueurs, il est divisé en immunofluorescence méthode, méthode de marquage immunoenzymatique et méthode d'histochimie d'affinité. Ce dernier est une méthode de détection basée sur une substance ayant une forte affinité pour un certain composant tissulaire. Cette méthode est plus sensible et facilite la localisation des traces d'antigènes (anticorps) au niveau cellulaire ou subcellulaire. Parmi elles, la méthode de coloration biotine-avidine est la plus couramment utilisée.
Coloration immunohistochimique a un rôle très large dans la recherche biomédicale et implique de nombreux domaines de recherche. Cependant, immunohistochimie la technologie a aussi ses limites. Par exemple, la substance d'essai dans les cellules tissulaires doit être antigénique et une certaine concentration est requise. La protéine immunoréactive détectée ne peut pas être déterminée comme étant nouvellement synthétisée par la cellule ou transportée à travers les cellules.
Par conséquent, ces caractéristiques doivent être pleinement prises en compte dans la conception expérimentale. Si l'expérience doit prouver par quel type de cellule la protéine connue est synthétisée, hybridation in situ la technologie est privilégiée. Afin de guider les débutants à utiliser immunohistochimie technologie raisonnablement et habilement dans la conception expérimentale, les principes de base de son application sont brièvement décrits comme suit :
C'est la première technique d'immunohistochimie établie. Il utilise le principe de la liaison spécifique antigène-anticorps. Tout d'abord, l'anticorps connu est marqué à la fluorescéine, qui est utilisée comme sonde pour vérifier l'antigène correspondant dans la cellule ou le tissu. Si vous l'observez au microscope à fluorescence, il émettra une fluorescence d'une certaine longueur d'onde lorsque la fluorescéine du complexe antigène-anticorps est irradiée par la lumière d'excitation, elle. Ensuite, la localisation d'un certain antigène dans le tissu peut être déterminé et une analyse quantitative peut être effectuée. En raison de sa forte spécificité, de sa sensibilité élevée, de sa rapidité et de sa simplicité, la technologie d'immunofluorescence est largement utilisée dans le diagnostic et les tests pathologiques cliniques.
Application
La méthode de marquage immunoenzymatique est une technique développée dans les années 1960 suivie par immunofluorescence. Le principe de base est d'utiliser d'abord des anticorps marqués par une enzyme pour interagir avec les tissus ou les cellules, puis d'ajouter des substrats enzymatiques pour générer des produits ou des particules insolubles colorés avec une certaine densité électronique.
Grâce à la microscopie optique ou électronique, divers types de surfaces cellulaires et de composants antigéniques dans les cellules font l'objet de recherches de localisation. La technologie de marquage aux immunoenzymes est la technologie la plus couramment utilisée. Les principaux avantages de cette méthode par rapport à la technologie d'immunofluorescence sont : un positionnement précis, un bon contraste, une conservation à long terme des échantillons colorés, et adapté aux études de microscopie optique et électronique.
La méthode de marquage par immunoenzyme s'est développée très rapidement et diverses méthodes de marquage ont été dérivées. Avec l'amélioration continue et l'innovation de la méthode, sa spécificité et sa sensibilité ont été considérablement améliorées, plus pratiques à utiliser. La méthode ABC, la méthode en trois étapes SP, les systèmes de détection de méthode en deux étapes prêts à l'emploi sont largement utilisés dans le diagnostic pathologique.
Application
La technologie immunitaire de l'or colloïdal utilise une particule métallique spéciale telle que l'or colloïdal comme marqueur. L'or colloïdal fait référence à l'hydrolat d'or, qui peut adsorber les protéines rapidement et de manière stable sans effet évident sur l'activité biologique du de protéines. Par conséquent, en utilisant de l'or colloïdal marqué anticorps primaire, anticorps secondaire, ou d'autres molécules qui se lient spécifiquement à immunoglobulines (telle que la protéine staphylococcique A) en tant que sondes, peuvent localiser qualitativement, voire quantifier, des antigènes dans des tissus ou des cellules.
Étant donné que l'or colloïdal a des particules de différentes tailles et que la densité électronique de l'or colloïdal est élevée, la technique de l'or immuno-colloïdal est particulièrement adaptée aux études de localisation monomarque ou multimarque de la microscopie immunoélectronique. Et en raison de la couleur de l'or colloïdal du rouge clair au rouge foncé, il convient également à l'observation au microscope optique. Telles que l'application de l'immuno-or et de la loi de l'argent améliorées par l'argent, elles sont plus pratiques pour l'observation au microscope optique.
En raison de ses propres caractéristiques uniques, immunohistochimie la technologie est devenue une technique souvent choisie par la majorité des chercheurs scientifiques en positionnement de cellules tissulaires, en recherche qualitative et quantitative. Par conséquent, avec la mise à jour des outils de recherche scientifique, les scientifiques doivent avoir une compréhension plus étendue et approfondie de immunohistochimie, optimiser la conception des itinéraires techniques et favoriser le développement ultérieur des immunohistochimie .
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Références