Prueba de PCR en tiempo real de fluorescencia de Salmonella

salmonela

Detección in vitro por PCR fluorescente en tiempo real de Salmonella.

Especificación: 96 T / caja
El kit se almacena a 2-8 ℃.
El período de validez es de 12 meses.
Especificación: 96 T / caja

Usos: Detección in vitro por PCR fluorescente en tiempo real de Salmonella.

Principio de detección: El kit contiene cebadores específicos de Salmonella. Cuando la muestra contiene Salmonella, el ADN de Salmonella extraído después del preenriquecimiento se amplifica exponencialmente mediante PCR. Durante la reacción, la sonda fluorescente específica de Salmonella se hibrida con el ácido nucleico diana y es simultáneamente la enzima Taq Hidrólisis para separar el grupo fluorescente del grupo de extinción en la sonda: de modo que la presencia de Salmonella se pueda juzgar en tiempo real por la fluorescencia incremento.

Producto y composición:
Composición (96T / kit)EspecificacionesCantidad
Solución de extracción de ADN3ml1 tubo
Solución de reacción de PCR de Salmonella1100ul1 tubo
Tap enzima (5U / ul)20ul1 tubo
Control positivo de Salmonella40ul1 tubo
Control negativo de Salmonella0.5ml1 tubo
Manual de instrucciones1
Condiciones de almacenamiento y fecha de caducidad del kit:
1. El kit se almacena a 2 - 8 ℃.
2. El período de validez es de 12 meses.

Instrumentos aplicables:
ABI7500, 9600 series, MJ opticon2, Bio-Rad y otros instrumentos de PCR cuantitativos fluorescentes están disponibles

Método experimental:
1. Tomar 1 ml de la solución de enriquecimiento en un tubo de centrífuga estéril de 1.5 ml, centrifugar a 1 rpm durante 10.000 min y desechar el sobrenadante; utilice el método clásico de extracción de fenol cloroformo para probar la plantilla extraída o almacénela a 5 ° C hasta que se pruebe.
2. Coloque la solución de reacción de PCR a temperatura ambiente para equilibrar, tome la enzima Taq después de la fusión y agregue la enzima Taq a 2∪ / tubo, es decir, cada sistema de reacción de prueba se prepara como: solución de reacción de PCR 22.5u1 + 0.4ulTaq enzima.
3. Añadir la plantilla: descongelar el extracto de ácido nucleico almacenado a -20 ° C a temperatura ambiente y centrifugar a 13,000 rpm durante 5 minutos. Los controles negativo y positivo se descongelan a temperatura ambiente antes de su uso. En cada tubo de reacción de PCR, agregue 2 ul de la plantilla o controles negativos y positivos procesados ​​en el paso 1, cubra el tubo, colóquelo en el instrumento de PCR y registre el número de muestra correspondiente.
4. Área de amplificación y detección a bordo: las condiciones de reacción son 95C: 3 min, 1 ciclo; 95C: 5 segundos, 60C: 40 segundos (adquisición de señal), 40 ciclos. El sistema de reacción se fijó en 25 µl.
Para el instrumento de PCR de fluorescencia multicanal, la señal se establece en Fam fluoresceína.

Juicio de resultados:
Consulte el manual para obtener más detalles.

Precauciones para el uso del kit:
1. Este kit solo se utiliza para pruebas in vitro y con fines de investigación. Lea atentamente el texto completo de este manual antes de empezar a utilizarlo.
2. El experimento debe dividirse estrictamente: área de preparación previa a la PCR: preparar reactivos experimentales; área de procesamiento de muestras: muestras para analizar, procesamiento de plantillas; área de detección-amplificación por PCR, detección.
3. Para conocer las normas de gestión de laboratorio pertinentes, consulte la implementación de las normas de gestión para laboratorios de amplificación de genes emitidas por las autoridades nacionales pertinentes.

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    Preguntas de trivia: Salmonella

    Acerca de la Salmonella

    Definición de salmonella

    Salmonella, es un término general para un grupo de bacterias. Puede infectar a los seres humanos y causar enfermedades tanto como a los animales. Es una enfermedad zoonótica. Debido a que la Salmonella es una Enterobacteriaceae Gram-negativa, las personas pueden comer alimentos contaminados con Salmonella y causar intoxicación alimentaria. Según las estadísticas, en el mundo de la intoxicación alimentaria, causada principalmente por la dieta Salmonella, es un patógeno común transmitido por los alimentos. Además, Salmonella typhimurium, Salmonella paratyphi, Salmonella choleraesuis, etc., pueden incluso causar epidemias intestinales como fiebre tifoidea, fiebre paratifoidea y cólera. La fiebre tifoidea solo infecta a los seres humanos, no a los animales, y daña la médula ósea, el hígado y el bazo de los seres humanos. Cada año, puede provocar que decenas de millones de personas se enfermen y que más de 600,000 mueran.

    Fuentes de Salmonella

    La salmonela tiene una amplia gama de huéspedes en la naturaleza. Algunas Salmonella son selectivas para el hospedador y la mayoría de ellas son adecuadas para humanos y animales. Pueden vivir en el tracto gastrointestinal de mamíferos, reptiles, aves, insectos y humanos. La tasa de infección con animales salvajes es de más del 1% al 20%.

    La salmonela contamina principalmente los alimentos cárnicos, y estas bacterias también pueden contaminar los alimentos de pescado, aves, leche y huevos. La intoxicación alimentaria por Salmonella puede ocurrir durante todo el año. Comer una enfermedad cruda, carne de ganado muerta o carne de ganado contaminada en otros puntos después del sacrificio es la causa más importante de intoxicación alimentaria por salmonela. Algunos expertos en alimentos señalan que los estadounidenses tienen hábitos alimenticios diferentes a los de los chinos. Les gusta comer huevos a medio cocer o incluso huevos crudos, por lo que una vez que los huevos contienen salmonela, la probabilidad de infección es relativamente alta. "En el país, no es sorprendente que los huevos crudos contengan salmonela, pero a la gente le gusta cocinar los huevos cocidos, lo que reduce en gran medida la posibilidad de infección.

    Infección por Salmonella

    Salmonella pertenece a la familia de las Enterobacteriaceae y puede causar gastroenteritis, fiebre tifoidea, sepsis e infecciones focales extraintestinales. Se denomina colectivamente infección por Salmonella (es decir, salmonelosis). A veces, varios síndromes pueden superponerse. No se incluyen las infecciones causadas por bacterias tifoideas y paratifoideas.

    Las manifestaciones clínicas de las infecciones por Salmonella son diversas. Según sus principales síntomas, se pueden dividir en cuatro tipos: enteritis, tifoidea, septicemia e infecciones supurativas localizadas.

    Especies de Salmonella

    Salmonella typhi

    Salmonella typhi es una bacteria con un tamaño de (0.6 a 0.9) × (1 a 3) micrones sin esporas y generalmente sin cápsula. A excepción de Salmonella gallinarum y Salmonella typhi, la mayoría de ellos tienen flagelos alrededor del cuerpo, causando Salmonella typhi.
    Bacteria Salmonella que causa fiebre tifoidea. Las bacterias tienen forma de varilla, con flagelos por todo el cuerpo y pueden producir endotoxinas. La inyección de endotoxina en las venas de los conejos puede causar lesiones similares a las humanas, como fiebre, leucopenia, etc., y las inyecciones masivas pueden causar la muerte.

    Salmonella typhimurium

    Salmonella typhimurium es un grupo de salmonella no adaptativa o pantrófica. Tiene una amplia gama de hosts y se distribuye en la naturaleza. Existe en el tracto intestinal de varios animales como aves de corral, ganado y roedores. Uno. La bacteria puede causar diversas enfermedades infecciosas de aves de corral y mamíferos, y también puede causar infecciones humanas, y tiene una importancia importante para la salud pública.

    Salmonella enteritidis

    Salmonella enteritidis es el principal patógeno que causa gastroenteritis aguda. Los síntomas típicos después de la infección incluyen fiebre, diarrea y vómitos. Salmonella enteritidis es una de las bacterias patógenas que no tiene especificidad de hospedador y es invasiva. El anfitrión incluye humanos y varios animales. Las bacterias no solo pueden causar graves pérdidas económicas a la morbilidad y mortalidad de las aves de corral, sino que los productos avícolas contaminados como portadores de Salmonella enteritidis también ponen en grave peligro la salud humana.

    Salmonella choleraesuis

    La Salmonella choleraesuis es un tipo de Salmonella no tifoidea, que es la principal bacteria patógena causante de paratifoidea en los lechones, causando un gran daño a la industria porcina.
    Cuando la septicémica Salmonella choleraesuis invade el cuerpo del cerdo, inmediatamente invade el espacio linfático de la pared intestinal, invadiendo nuevamente la sangre y multiplicándose en la sangre, provocando septicemia. Se produce una gran cantidad de endotoxinas cuando las bacterias se reproducen y las endotoxinas actúan sobre los glóbulos blancos y causan inflamación, fiebre alta y diarrea.
    La infección por Salmonella choleraesuis se transmite principalmente a través del orificio fecal. Si el paciente tiene una granja de cerdos en el hogar, los hábitos de higiene son deficientes, y la base de la enfermedad hepática crónica es baja, la inmunidad es baja, por lo que puede deberse a la ingesta de alimentos o agua contaminados con Salmonella Causa infección.

    Después de la infección del adulto por Salmonella choleraesuis, el inicio es insidioso y las manifestaciones clínicas no son típicas. Es fácil pasar por alto el diagnóstico y el diagnóstico erróneo y retrasar el tratamiento. Si el curso de la medicación es insuficiente, el control insidioso de la bacteriemia es incompleto y la condición puede prolongarse repetidamente.

    Intoxicación por Salmonella

    La especificidad del hospedador de Salmonella es muy débil, lo que puede infectar tanto a animales como a humanos, y es fácil de causar intoxicación alimentaria en humanos. La más patógena es Salmonella cholerae, seguida de Salmonella typhimurium y Salmonellaenteritidis.
    La ingestión de alimentos contaminados con Salmonella no tifoidea por vía oral provocó enfermedades. Los alimentos comunes que causan enfermedades son principalmente alimentos de origen animal, principalmente carne de ganado, carne de aves, huevos, leche y sus productos.

    Síntomas de salmonella

    Los síntomas de intoxicación alimentaria causada por salmonella principalmente incluyen náuseas, vómitos, dolor abdominal, dolor de cabeza, escalofríos y diarrea, así como fatiga, dolores musculares, visión borrosa, fiebre moderada, inquietud y somnolencia, la duración es de 2 a 3 días, promedio de la la tasa letal fue del 4.1%. La causa principal es la ingestión de alimentos que contienen grandes cantidades de bacterias o serotipos de Salmonella no específicos del huésped.

    Patogenia de la salmonella

    1. La invasión de bacterias salmonelas vivas en la mucosa intestinal y el efecto sinérgico de las endotoxinas; es la principal causa de intoxicación alimentaria causada por salmonella.

    2. Intoxicación por enterotoxina: Salmonella enteritidis y Salmonella typhi pueden producir enterotoxina. El mecanismo es el mismo que el tipo de intoxicación alimentaria bacteriana por enterotoxina.

    Período de incubación de Salmonella

    Después de ingerir alimentos tóxicos. Los síntomas generalmente aparecen dentro de las 12 a 14 horas y algunos tienen un período de incubación más prolongado.

    Tratamiento de la salmonela

    La gastroenteritis causada por Salmonella generalmente no requiere tratamiento con antibióticos; se complementa principalmente con agua y electrolitos; pero para neonatos, pacientes inmunodeprimidos y pacientes con heridas especiales; Se requiere tratamiento con antibióticos dependiendo de la situación.

    Prevención de la salmonela

    1. Lávese las manos cuidadosamente antes de comer, después de ir al baño, antes de tocar la comida, después de tocar animales o huevos crudos.
    2. Separe las tablas de cortar para alimentos crudos y cocidos.
    3. Coma bien los alimentos (especialmente huevos y aves).
    4. Los alimentos que no están listos para comer deben envolverse en plástico y almacenarse en el refrigerador. Debe calentarse o cocinarse antes de volver a comerlo.
    5. Lucha y bloquea vectores como las moscas. Los alimentos sucios contaminados con moscas, vencidos o en mal estado deben desecharse y no comerse.
    6. La torre de agua debe limpiarse y desinfectarse con frecuencia.
    7. El agua potable durante el viaje o el campamento debe hervirse y desinfectarse.
    8. Si tiene síntomas como vómitos, diarrea o fiebre, debe buscar tratamiento médico lo antes posible.

    Prueba de salmonella

    Detección de anticuerpos

    La significativa especificidad de la reacción antígeno-anticuerpo se ha utilizado para la identificación bacteriana y la tipificación serológica durante más de medio siglo. La presencia de anticuerpos específicos contra células bacterianas o antígenos flagelares permite a las personas establecer métodos rápidos para detectar patógenos transmitidos por los alimentos. Hay muchos métodos de detección inmunológica establecidos para Salmonella, que se pueden dividir aproximadamente en métodos basados ​​en anticuerpos marcados con enzimas (ELISA), tinción de anticuerpos fluorescentes (inmunofluorescencia), anticuerpos marcados con isótopos (radioinmunoensayo) y muchos otros métodos. Métodos basados ​​en anticuerpos que utilizan aglutinación de látex, inmunosensores, inmunodifusión e inmunocromatografía. Sin embargo, el método más utilizado se basa en la técnica ELISA de dos sitios, a saber, ELISA sándwich. Después de la mejora de este método, se utilizan isótopos radiactivos para reemplazar los anticuerpos marcados. En pocas palabras, se refiere al uso de anticuerpos de "captura" inmovilizados sobre un sustrato sólido para capturar el antígeno diana. Después del lavado para eliminar los componentes no unidos, se agrega una segunda etiqueta de enzima.Los anticuerpos, que están unidos a diferentes sitios del antígeno capturado, se agregan al sustrato de la enzima después del segundo lavado y se dejan reaccionar con los componentes de color, y luego el objetivo. el antígeno se puede detectar fácilmente mediante espectrofotometría. Utilizando placas de microtitulación como matriz sólida estandariza el formato de reacción y facilita su automatización.

    Método de ácido nucleico

    El ADN y el ARN del ácido nucleico celular son las únicas moléculas grandes que pueden transportar información. Dado que todas las células contienen esta molécula, se puede utilizar como objetivo para la detección. La diana suele ser una secuencia de ácido nucleico específica, que puede detectarse utilizando moléculas de ácido nucleico del complemento como sondas. De manera similar a los métodos inmunológicos, la sonda también necesita estar etiquetada de manera apropiada, como radioisótopos, enzimas o marcadores luminiscentes. Fitts y col. introdujo la primera generación de tecnología de hibridación de ADN-ARN en la detección de Salmonella en los alimentos. Las sondas utilizadas en este método contienen fragmentos de ADN de Salmonella typhi que están marcados con isótopos radiactivos. Su sensibilidad es alta. Transcurridas aproximadamente 48 h del paso de enriquecimiento, el límite de detección puede llegar a 108 bacterias / ml, pero debido al uso de radioisótopos, que solo pueden aplicarse en laboratorios especializados, las ventajas de este método se ven compensadas. Para ello, se ha desarrollado una tecnología de segunda generación basada en la hibridación de ácidos nucleicos, un colorímetro.

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