Prueba de PCR en tiempo real de fluorescencia de Enterobacter sakazakii

salmonela

Detección in vitro por PCR fluorescente en tiempo real de enterobacter sakazakii.

Especificación: 96 T / caja
El kit se almacena a 2-8 ℃.
El período de validez es de 12 meses.
Especificación: 96 T / caja

Usos: Detección in vitro por PCR fluorescente en tiempo real de enterobacter sakazakii.

Principio de detección: El kit contiene cebadores específicos de enterobacter sakazakii. Cuando la muestra contiene enterobacter sakazakii, el ADN de enterobacter sakazakii extraído después del preenriquecimiento se amplifica exponencialmente mediante PCR. Durante la reacción, la sonda fluorescente específica de enterobacter sakazakii se hibrida con el ácido nucleico diana y simultáneamente se realiza una hidrólisis de la enzima taq para separar el grupo fluorescente del grupo de extinción en la sonda: de modo que la presencia de enterobacter sakazakii se puede juzgar en tiempo real mediante el incremento de fluorescencia.

Producto y composición:
Composición (96T / kit)EspecificacionesCantidad
Solución de extracción de ADN3ml1 tubo
Solución de reacción de PCR para Enterobacter sakazakii1100ul1 tubo
Tap enzima (5U / ul)20ul1 tubo
Control positivo Enterobacter sakazakii40ul1 tubo
Control negativo de Enterobacter sakazakii0.5ml1 tubo
Manual de instrucciones1
Condiciones de almacenamiento y fecha de caducidad del kit:
1. El kit se almacena a 2-8 ℃.
2. El período de validez es de 12 meses.

Instrumentos aplicables:
ABI7500, 9600 series, MJ opticon2, Bio-Rad y otros instrumentos de PCR cuantitativos fluorescentes están disponibles

Método experimental:
1. Tomar 1 ml de la solución de enriquecimiento en un tubo de centrífuga estéril de 1.5 ml, centrifugar a 1 rpm durante 10.000 min y desechar el sobrenadante; utilice el método clásico de extracción de fenol cloroformo para probar la plantilla extraída o almacénela a 5 ° C hasta que se pruebe.
2. Coloque la solución de reacción de PCR a temperatura ambiente para equilibrar, tome la enzima Taq después de la fusión y agregue la enzima Taq a 2∪ / tubo, es decir, cada sistema de reacción de prueba se prepara como: solución de reacción de PCR 22.5u1 + 0.4ulTaq enzima.
3. Añadir la plantilla: descongelar el extracto de ácido nucleico almacenado a -20 ° C a temperatura ambiente y centrifugar a 13,000 rpm durante 5 minutos. Los controles negativo y positivo se descongelan a temperatura ambiente antes de su uso. En cada tubo de reacción de PCR, agregue 2 ul de la plantilla o controles negativos y positivos procesados ​​en el paso 1, cubra el tubo, colóquelo en el instrumento de PCR y registre el número de muestra correspondiente.
4. Área de amplificación y detección a bordo: las condiciones de reacción son 95C: 3 min, 1 ciclo; 95C: 5 segundos, 60C: 40 segundos (adquisición de señal), 40 ciclos. El sistema de reacción se fijó en 25 µl.
Para el instrumento de PCR de fluorescencia multicanal, la señal se establece en Fam fluoresceína.

Juicio de resultados:
Consulte el manual para obtener más detalles.

Precauciones para el uso del kit:
1. Este kit solo se utiliza para pruebas in vitro y con fines de investigación. Lea atentamente el texto completo de este manual antes de empezar a utilizarlo.
2. El experimento debe dividirse estrictamente: área de preparación previa a la PCR: preparar reactivos experimentales; área de procesamiento de muestras: muestras para analizar, procesamiento de plantillas; área de detección-amplificación por PCR, detección.
3. Para conocer las normas de gestión de laboratorio pertinentes, consulte la implementación de las normas de gestión para laboratorios de amplificación de genes emitidas por las autoridades nacionales pertinentes.

Si desea saber más, póngase en contacto con nosotros

    Preguntas de trivia: Enterobacter sakazakii

    Acerca de enterobacter sakazakii

    ¿Qué es enterobacter sakazakii?

    Enterobacter sakazakii (ES) es un parásito Gram-negativo no Bacillus en el intestino de humanos y animales, perteneciente a la familia Enterobacteriaceae. Pueden causar enfermedades a humanos y animales bajo ciertas condiciones, por lo que se denominan patógenos condicionales.

    Los peligros de enterobacter sakazakii

    Enterobacter sakazakii puede causar meningitis neonatal grave, enterocolitis, bacteriemia y disfunción neurológica. En 1961, el Reino Unido notificó por primera vez dos casos de meningitis causada por Enterobacter sakazakii. Posteriormente, los Estados Unidos, los Países Bajos, Canadá y otros países informaron sucesivamente de infecciones neonatales por Enterobacter sakazakii. Los lactantes infectados con Enterobacter sakazakii tienen una tasa de mortalidad de hasta el 20% -50%, y los lactantes y niños pequeños que sobreviven también pueden tener secuelas neurológicas graves.

    Enfermedad por Enterobacter sakazakii

    En 1961, dos científicos, Urmenyi y Franklin en el Reino Unido, informaron por primera vez de dos casos de meningitis causada por la bacteria, seguidos de meningitis, septicemia y colon necrosante del intestino delgado causada por Enterobacter sakazakii en sucesivos informes mundiales.

    Infección por Enterobacter sakazakii en el recién nacido

    Casos esporádicos y brotes de meningitis, septicemia y colitis necrosante causados ​​por Enterobacter sakazakii en lactantes y prematuros han aparecido uno tras otro en el mundo. Varios estudios han demostrado que la fórmula infantil es actualmente el principal canal de infección que causa meningitis, sepsis y colitis necrotizante en bebés y bebés prematuros. En algunos casos, la mortalidad causada por la enfermedad causada por Enterobacter sakazakii puede alcanzar el 40% ± 80%. Enterobacter sakazakii ha atraído la atención de departamentos relevantes en muchos países del mundo.

    Síntomas de Enterobacter sakazakii

    La mayoría de los niños tienen síntomas clínicos leves y atípicos y se pasan por alto fácilmente. Los casos graves pueden causar enterocolitis necrotizante, sepsis y meningitis.
    (1) Síntomas del sistema: fiebre. Los recién nacidos pueden mostrar signos de hipotermia, depresión mental, rechazo de la leche, aumento de la ictericia, tez gris, piel escamosa e incluso shock.
    (B) Síntomas del aparato digestivo: vómitos, distensión abdominal, diarrea, heces con mucosidad sanguinolenta, los ruidos intestinales se debilitan o incluso desaparecen, en casos severos, puede ocurrir perforación intestinal y peritonitis.
    (3) Síntomas del sistema nervioso: irritabilidad, llanto agudo, somnolencia e incluso coma, mirada, pueden aparecer convulsiones, el examen físico puede incluir circunferencia de la cabeza agrandada, craneotomía dividida, aumento de la tensión del bregma y signos positivos de irritación meníngea.

    Tratamiento de Enterobacter sakazakii

    (1) Los casos leves deben fortalecerse y tratarse sintomáticamente para asegurar la ingesta de líquidos y electrolitos, y prestar atención al seguimiento.
    (2) Aquellos que tienen síntomas intestinales evidentes deben elegir medicamentos antibacterianos. La amoxicilina / ácido clavulánico y otros fármacos antibacterianos pueden seleccionarse y ajustarse de acuerdo con los resultados de las pruebas de susceptibilidad a fármacos. Pueden usarse al mismo tiempo agentes protectores de la mucosa intestinal y agentes microecológicos.
    (3) En casos graves, se pueden utilizar ceftazidima, cefepima, melopenem, etc. para el tratamiento antibacteriano, y se pueden ajustar de acuerdo con el efecto del tratamiento clínico y los resultados de la prueba de sensibilidad al fármaco. Se debe fortalecer el tratamiento de apoyo sintomático; los niños con enterocolitis necrotizante deben estar en ayunas, se debe administrar descompresión gastrointestinal a aquellos con distensión abdominal severa y se debe administrar tratamiento quirúrgico si es necesario; los niños con meningitis deben recibir sedación, reducción de la ansiedad, reducción de la presión intracraneal y tratamiento de complicaciones; Dar tratamiento antichoque a tiempo cuando hay un shock.

    ¿Cómo se transmite la enterobacter sakazakii?

    Enterobacter sakazakii es Enterobacteriaceae, bacilos gramnegativos. Enterobacter sakazakii se distribuye ampliamente en la naturaleza y se reproduce rápidamente, pero no es resistente al calor y puede morir por pasteurización. Enterobacter sakazakii es una bacteria condicionalmente patógena. En circunstancias normales, no causa daños a la salud humana, pero puede causar enfermedades en personas con baja inmunidad y en bebés, recién nacidos, especialmente bebés prematuros y bebés de bajo peso al nacer.

    Fuentes alimenticias comunes de Enterobacter sakazakii

    Los alimentos y el medio ambiente son las principales fuentes de contaminación por E. sakazakii. Los científicos han aislado enterobacter sakazakii de una variedad de alimentos y bebidas. Varias materias primas de estos alimentos y bebidas, como leche en polvo, productos cárnicos, productos de soja, pan, etc., pueden infectarse con enterobacter sakazakii, lo que da como resultado la detección de bacterias en el producto final. Entre ellos, la leche en polvo de fórmula infantil se considera la fuente alimentaria más común y sensible de enterobacter sakazakii.

    Enterobacter sakazakii en fórmula infantil en polvo

    Enterobacter sakazakii es una criatura que existe en el medio ambiente y se encuentra comúnmente en instalaciones y entornos domésticos donde se produce la fórmula infantil. Aunque la fórmula infantil no es un producto estéril y puede estar contaminada con patógenos que pueden causar enfermedades graves, si la fórmula infantil se prepara y almacena adecuadamente, el riesgo de infección por Enterobacter sakazakii puede reducirse en gran medida. Para preparar de forma segura la fórmula infantil, primero debe limpiar y esterilizar el equipo de alimentación y preparación.

    Prevención de Enterobacter sakazakii

    Para la contaminación de Enterobacter sakazakii en los alimentos para lactantes, la contaminación de las bacterias debe controlarse desde la fuente, el procesamiento y los materiales de envasado de los alimentos para lactantes. En primer lugar, debemos fortalecer la prevención de la contaminación y el control de los ingredientes alimentarios para bebés y niños pequeños. Se debe realizar una estricta desinfección e inspección de las materias primas. Las materias primas contaminadas deben procesarse a tiempo. No ingrese al taller de producción para evitar la contaminación a otras materias primas.

    En segundo lugar, esterilizar estrictamente todos los eslabones en el proceso de procesamiento, como la boca del operador, manos, pies, cabeza, zapatos, ropa de trabajo, gorras, etc., debe realizarse un trabajo higiénico. Al mismo tiempo, las bacterias mueren por completo mediante pasteurización, esterilización a temperatura ultra alta u otros procesos de alta temperatura durante el procesamiento.

    Para prevenir la contaminación por E. sakazakii, también se debe establecer y aplicar estrictamente durante el proceso de producción un sistema eficaz de análisis de peligros y control de calidad para los puntos críticos de control. Además, los materiales de envasado deben desinfectarse eficazmente y todo el entorno del taller para la producción y el envasado debe desinfectarse con regularidad.

    Además, en la alimentación de bebés y niños pequeños, dado que también existe el riesgo de infección por Enterobacter sakazakii en la familia, se recomienda que los biberones y otros utensilios de alimentación para leche en polvo se limpien y desinfecten a fondo. Además, la lactancia materna también es uno de los medios eficaces para reducir el riesgo de infección neonatal por E. sakazakii.

    Identificación bioquímica de Enterobacter sakazakii

    Métodos de inspección tradicionales

    El método tradicional de separación y detección de Enterobacter sakazakii depende de las características bioquímicas y morfológicas. A nivel internacional, la "Separación y recuento de Enterobacter sakazakii en fórmulas para lactantes" promulgada por la FDA de EE. UU. Se utiliza generalmente como método clásico.

    Espectrometría de masas de tiempo de vuelo de ionización por desorción láser asistida por matriz

    El método de espectrometría de masas de tiempo de vuelo de ionización por desorción láser asistida por matriz (MAL-DITOF-MS) consiste en mezclar la muestra que se va a medir con la solución de matriz en una proporción determinada, y utilizar irradiación de láser pulsado para excitar la matriz, lo que hace que polímero para generar iones moleculares y polimerización de iones moleculares El cuerpo se acelera y se detecta en un espectrómetro de masas de tiempo de vuelo. Como resultado, el polímero medido se separa de acuerdo con el número de masa, se procesa para formar un espectro de masas y se analiza y compara mediante software para seleccionar y determinar el espectro de especificidad (huella dactilar) para lograr la diferenciación e identificación de las especies o cepas de microorganismos objetivo.

    Métodos de prueba de biología molecular.

    En la actualidad, los métodos de prueba de biología molecular de E. sakazakii utilizados en productos lácteos incluyen el método de PCR ordinario (método de electroforesis), el método de prueba de amplificación constante mediada por bucle de ADN (LAMP) y el método de PCR fluorescente. Este método supera las deficiencias de los métodos de inspección tradicionales, como una operación engorrosa, que requiere mucho tiempo y resultados difíciles de distinguir. También ha conducido al rápido desarrollo de métodos de detección rápida de Enterobacter sakazakii. Sin embargo, este método también tiene las desventajas de una alta concentración de bacterias a medir en la muestra, alto costo de análisis, operación engorrosa e incapacidad para identificar la presencia de bacterias vivas.

    Publicaciones Recientes

    Etiquetas

    BALLYA balyabio biografía de ballya abuso de vacas lecheras video de abuso de vacas lecheras articulos para vacas lecheras subastas de vacas lecheras michigan comportamiento de la vaca lechera puntuación de la condición corporal de la vaca lechera partes del cuerpo de la vaca lechera tabla de cría de vacas lecheras subproductos de la vaca lechera calendario de la vaca lechera lona de vaca lechera dibujos animados de vaca lechera Imágenes Prediseñadas de vaca lechera collares para vacas lecheras abono para vacas lecheras ciclo de la vaca lechera exportadores de vacas lecheras australia granjas de vacas lecheras granjas de vacas lecheras cerca de mí calculadora de piensos para vacas lecheras consumo de alimento para vacas lecheras por día requisito de alimentación de las vacas lecheras gestión de la alimentación de las vacas lecheras alimento para vacas lecheras por día raciones de pienso para vacas lecheras receta de pienso para vacas lecheras vaca lechera para la venta en bangladesh vaca lechera en venta en tamilnadu enfermedades de las pezuñas de las vacas lecheras problemas de pezuñas de vacas lecheras vacas lecheras para la venta en sudáfrica vacas lecheras en venta qld vacas lecheras en venta vic vacas lecheras siendo ordeñadas el calentamiento global de las vacas lecheras las vacas lecheras deben estar preñadas historia de las vacas lecheras vacas lecheras en california línea de tiempo de la vaca lechera diagnóstico in vitro fabrica de leche sustituto de leche en polvo
    © derechos de autor 2020 - BALLYA reservado.
    sobreauricular de teléfonomapa del marcador Linkedin Facebook pinterest Youtube rss Twitter Instagram facebook en blanco rss-blank linkedin en blanco pinterest Youtube Twitter Instagram