Prueba de PCR en tiempo real de fluorescencia de E. coli

salmonela

Detección in vitro por PCR fluorescente en tiempo real de E. coli.

Especificación: 96 T / caja
El kit se almacena a 2-8 ℃.
El período de validez es de 12 meses.
Especificación: 96 T / caja

Usos: Detección in vitro por PCR fluorescente en tiempo real de E. coli.

Principio de detección: El kit contiene cebadores específicos de E. coli. Cuando la muestra contiene e coli, el ADN de e coli extraído después del preenriquecimiento se amplifica exponencialmente mediante PCR. Durante la reacción, la sonda fluorescente específica de e coli se hibrida con el ácido nucleico diana y es simultáneamente la enzima Taq Hidrólisis para separar el grupo fluorescente del grupo de extinción en la sonda: de modo que la presencia de e coli se pueda juzgar en tiempo real por el incremento de fluorescencia.

Producto y composición:
Composición (96T / kit)EspecificacionesCantidad
Solución de extracción de ADN3ml1 tubo
Solución de reacción de E coli PCR1100ul1 tubo
Tap enzima (5U / ul)20ul1 tubo
Control positivo de E. coli40ul1 tubo
Control negativo de E coli0.5ml1 tubo
Manual de instrucciones1
Condiciones de almacenamiento y fecha de caducidad del kit:
1. El kit se almacena a 2 - 8 ℃.
2. El período de validez es de 12 meses.

Instrumentos aplicables:
ABI7500, 9600 series, MJ opticon2, Bio-Rad y otros instrumentos de PCR cuantitativos fluorescentes están disponibles

Método experimental:
1. Tomar 1 ml de la solución de enriquecimiento en un tubo de centrífuga estéril de 1.5 ml, centrifugar a 1 rpm durante 10.000 min y desechar el sobrenadante; utilice el método clásico de extracción de fenol cloroformo para probar la plantilla extraída o almacénela a 5 ° C hasta que se pruebe.
2. Coloque la solución de reacción de PCR a temperatura ambiente para equilibrar, tome la enzima Taq después de la fusión y agregue la enzima Taq a 2∪ / tubo, es decir, cada sistema de reacción de prueba se prepara como: solución de reacción de PCR 22.5u1 + 0.4ulTaq enzima.
3. Añadir la plantilla: descongelar el extracto de ácido nucleico almacenado a -20 ° C a temperatura ambiente y centrifugar a 13,000 rpm durante 5 minutos. Los controles negativo y positivo se descongelan a temperatura ambiente antes de su uso. En cada tubo de reacción de PCR, agregue 2 ul de la plantilla o controles negativos y positivos procesados ​​en el paso 1, cubra el tubo, colóquelo en el instrumento de PCR y registre el número de muestra correspondiente.
4. Área de amplificación y detección a bordo: las condiciones de reacción son 95C: 3 min, 1 ciclo; 95C: 5 segundos, 60C: 40 segundos (adquisición de señal), 40 ciclos. El sistema de reacción se fijó en 25 µl.
Para el instrumento de PCR de fluorescencia multicanal, la señal se establece en Fam fluoresceína.

Juicio de resultados:
Consulte el manual para obtener más detalles.

Precauciones para el uso del kit:
1. Este kit solo se utiliza para pruebas in vitro y con fines de investigación. Lea atentamente el texto completo de este manual antes de empezar a utilizarlo.
2. El experimento debe dividirse estrictamente: área de preparación previa a la PCR: preparar reactivos experimentales; área de procesamiento de muestras: muestras para analizar, procesamiento de plantillas; área de detección-amplificación por PCR, detección.
3. Para conocer las normas de gestión de laboratorio pertinentes, consulte la implementación de las normas de gestión para laboratorios de amplificación de genes emitidas por las autoridades nacionales pertinentes.

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    Preguntas de trivia: E coli

    Acerca de e coli

    E. coli, también conocida como Escherichia coli, fue descubierta por Escherich en 1885. Escherichia coli es una bacteria condicionalmente patógena. Bajo ciertas condiciones, puede causar infecciones gastrointestinales o infecciones del tracto urinario de varios tejidos y órganos en humanos y varios animales.

    Tamaño de E. coli

    El tamaño es de 0.5 × 1 ~ 3 micrones. Chow flagelos, puede moverse sin esporas. Puede fermentar una variedad de azúcares para producir ácido y gas. Es una bacteria residente normal en los intestinos de humanos y animales. Ingresa a los intestinos con los bebés después del nacimiento y está acompañado por humanos de por vida, lo que representa casi 1/3 del peso seco de las heces.

    Forma de E. coli

    E. coli es Brevibacterium, con extremos redondeados romos y Gram negativos. A veces, debido a los diferentes entornos, las células individuales parecen ser esféricas o con forma de filamento; Las E. coli son en su mayoría simples o dos, pero no estarán dispuestas en forma de cadena larga; la mayoría de las cepas de E. coli tienen estructura de cápsulas o microcápsulas, pero no pueden formar esporas; la mayoría de las cepas de E. coli desarrollan fimbrias, algunas de las cuales son fimbrias específicas del hospedador que se adhieren al hospedador y algunos otros tejidos o células.

    Clasificación de E. coli

    Efecto patogénico
    En la actualidad, la clasificación reconocida internacionalmente incluye principalmente seis tipos de E. coli, a saber, E. coli patógena intestinal (EPEC), E. coli toxigénica intestinal (ETEC) e invasión intestinal que puede causar infecciones gastrointestinales. E. coli (EIEC), E. coli hemorrágica intestinal (EHEC), E. coli agregante intestinal (EAEC) y toxinas intestinales similares a Shiga encontradas en los últimos años también tienen ciertas E. coli invasivas (ESIES) Además, hay E. coli patogénica uretral ( UPEC) que puede causar infección del tracto urinario, y la E. coli adherente aglomerativa intestinal recién nombrada (EAggEC).

    Hemolítico
    Según la capacidad de E. coli para producir hemolisina y la capacidad de hemolizar, E. coli se puede dividir en dos categorías: E. coli hemolítica y E. coli no hemolítica.

    Enterotoxigénico
    Según la capacidad de E. coli para producir enterotoxina durante el proceso de infección, E. coli se puede dividir en dos categorías: E. coli enterotoxigénica y E. coli no entotoxinogénica. La E. coli enterotoxigénica es un patógeno importante de cualquier diarrea infecciosa en humanos y varios animales. La identificación de E. coli enterotoxigénica es principalmente para determinar el tipo de enterotoxina secretada por E. coli aislada. Además, de acuerdo con la capacidad de E. coli para producir enterotoxina, combinada con su sensibilidad a diferentes enterotoxinas, E. coli puede clasificarse como tipo enterotoxina.

    Infección por E. coli

    E. coli es una bacteria residente normal en los intestinos de los animales y una pequeña parte de ellas causa enfermedades en determinadas condiciones. Los serotipos de E. coli pueden causar infecciones gastrointestinales en humanos o animales, principalmente causadas por antígenos específicos de fimbria, toxinas patógenas y otras infecciones. Además de las infecciones gastrointestinales, también pueden causar infecciones del tracto urinario, artritis y meninges. Inflamación e infecciones sépticas.
    Escherichia coli incluye varios grupos bacterianos con diferente patogenicidad. Las infecciones humanas por E. coli se dividen aproximadamente en dos tipos: infecciones intestinales e infecciones extraintestinales.

    Síntomas de E. coli

    El síntoma más típico de una infección intestinal puede ser la diarrea. Si la infección es grave, puede producirse un shock, la presión arterial puede bajar y la frecuencia cardíaca puede aumentar. Si se trata de una infección intestinal, pueden aparecer náuseas, vómitos, fiebre, frecuencia urinaria y urgencia después de la infección por E. coli.

    Patógeno E. coli

    Generalmente, E. coli se divide en cuatro grupos bacterianos según su patogenicidad para los seres humanos: E. coli común, E. coli enteropatógena, E. coli enterotoxigénica y E. coli invasora. Las últimas tres son bacterias patógenas que causan diarrea.

    Patogenia de E. coli

    Cada flora incluye un cierto número de serotipos. Escherichia coli enterotoxigénica puede producir enterotoxina resistente al calor y enterotoxina resistente al calor. La producción de estas dos enterotoxinas está controlada genéticamente por plásmidos. El plásmido es un tipo de ADN no cromosómico que se puede transmitir fácilmente. La transmisión mutua de plásmidos puede permitir que las cepas no productoras de toxinas obtengan la capacidad de producir toxinas. Debido a la liberación del plásmido, Escherichia coli de cualquier serotipo puede producir enterotoxina y factor de colonia, por lo que tiene patogenicidad.

    Tratamiento de E. coli

    Primero, si los síntomas de la infección no son muy graves y la diarrea y el dolor abdominal son leves, la administración oral de bifidobacterias puede mejorar la disfunción gastrointestinal y regular los trastornos de la microflora intestinal.
    Si el dolor abdominal y la diarrea son graves y hay heces líquidas, considere administrar un tratamiento antiinflamatorio, como antibióticos quinolónicos o berberina, y reposición de líquidos adecuada para mejorar los síntomas de deshidratación.

    ¿De dónde viene la e coli?

    Escherichia coli es uno de los microorganismos más comunes, ampliamente distribuido en la naturaleza, la mayoría de los cuales no son patógenos, principalmente parasitarios en los intestinos de humanos o animales, y son llamados "flora normal" por los humanos.

    Transmisión de E. coli

    La principal fuente de infección de la enfermedad por E. coli humana es que una gran cantidad de patógenos de E. coli se excretan en las heces de los pacientes con infección gastrointestinal. La vía de transmisión de E. coli entre las personas es principalmente a través de la vía de transmisión fecal-oral, que puede causar la propagación o la epidemia de la enfermedad de E. coli en determinadas condiciones.

    Enterobacter sakazakii en fórmula infantil en polvo

    Enterobacter sakazakii es una criatura que existe en el medio ambiente y se encuentra comúnmente en instalaciones y entornos domésticos donde se produce la fórmula infantil. Aunque la fórmula infantil no es un producto estéril y puede estar contaminada con patógenos que pueden causar enfermedades graves, si la fórmula infantil se prepara y almacena adecuadamente, el riesgo de infección por Enterobacter sakazakii puede reducirse en gran medida. Para preparar de forma segura la fórmula infantil, primero debe limpiar y esterilizar el equipo de alimentación y preparación.

    Prevención de E. coli

    1. Mantenga limpios el lugar del baño y los utensilios de cocina, y deseche la basura de manera adecuada.
    2. Mantenga sus manos limpias y recórtese las uñas con frecuencia.
    3. Lávese las manos con agua y jabón antes de comer o manipular alimentos. También debe lavarse las manos después de ir al baño o cambiar pañales.
    4. Se debe usar agua del grifo para beber y es mejor hervirla antes de beberla.
    5. Los alimentos frescos deben comprarse en un lugar confiable, no patrocinando a vendedores ambulantes sin licencia.
    6. Evite comer alimentos de alto riesgo, como leche que no haya sido procesada mediante esterilización a baja temperatura, así como filetes de hamburguesa poco cocidos, carne molida y otros alimentos cárnicos.
    7. Cuando cocine alimentos, use un delantal limpio y lavable y un sombrero.
    8. Los alimentos deben lavarse a fondo.
    9. Los alimentos perecederos deben cubrirse con una tapa y almacenarse en el refrigerador.
    10. Los alimentos crudos y los alimentos cocidos, especialmente la carne de res y los despojos de res, deben manipularse y almacenarse por separado (guarde los alimentos cocidos en la parte superior del refrigerador y los alimentos crudos en la parte inferior) para evitar la contaminación cruzada.
    11. El refrigerador debe limpiarse y derretirse con regularidad, y la temperatura debe mantenerse a 4 grados Celsius o menos.
    12. Si todas las partes de la comida se calientan a 75 grados Celsius, se puede eliminar E. coli O157: H7; por lo tanto, la carne molida y el filete de hamburguesa deben cocinarse completamente a 75 grados Celsius durante 2 a 3 minutos, hasta que la carne cocida esté completamente dorada y la salsa se vuelva transparente.
    13. No manipule alimentos cocinados con las manos descubiertas; si es necesario, use guantes.
    14. Los alimentos deben consumirse lo antes posible después de cocinarlos.
    15. Si es necesario conservar los restos de comida cocida, debe refrigerarse y consumirse lo antes posible. Vuelva a calentar bien antes de comer. Los alimentos en mal estado deben desecharse.

    Prueba de e coli

    Método de fermentación

    Este método es principalmente para el cultivo de E. coli en un medio a 44.5 ° C, que contiene un sustrato fluorescente y requiere 24 horas de cultivo. Los pasos principales incluyen fermentación, cultivo de separación, fermentación secundaria, observación al microscopio, etc.

    Espectrometría de masas de tiempo de vuelo de ionización por desorción láser asistida por matriz

    El método de espectrometría de masas de tiempo de vuelo de ionización por desorción láser asistida por matriz (MAL-DITOF-MS) consiste en mezclar la muestra que se va a medir con la solución de matriz en una proporción determinada, y utilizar irradiación de láser pulsado para excitar la matriz, lo que hace que polímero para generar iones moleculares y polimerización de iones moleculares El cuerpo se acelera y se detecta en un espectrómetro de masas de tiempo de vuelo. Como resultado, el polímero medido se separa de acuerdo con la numero de masa, procesado para formar un espectro de masas, y analizado y comparado por software para seleccionar y determinar el espectro de especificidad (huella dactilar) para lograr la diferenciación e identificación de las especies o cepas de microorganismos objetivo.

    Método de perlas inmunomagnéticas

    El principio principal de la tecnología de separación es utilizar perlas magnéticas como portador y un anticuerpo para combinar el anticuerpo y las perlas magnéticas, y luego completar el movimiento mecánico mediante tecnología magnética para separar E. coli. En comparación con otras formas de separar bacterias, este método tiene ciertas ventajas. Esta tecnología puede mejorar la tasa de éxito de detección de Vibrio patógeno en muestras, y la tecnología de perlas inmunomagnéticas puede tratar diferentes microorganismos en diferentes especies bacterianas. Y, en gran medida, mejorar la eficiencia de detección.

    Prueba de instrumentos automatizada

    El uso principal del analizador automático inmune, esta tecnología fue producida y utilizada en 1970. Con el desarrollo y el progreso de la ciencia y la tecnología, la tecnología de detección automática de instrumentos se usa ampliamente y es muy conveniente de operar, puede ahorrar mucho tiempo. , su grado de interferencia es pequeño, puede ahorrar mano de obra y entrada de material, y también puede mejorar la precisión de detección. En el proceso de desarrollo actual, la aplicación del sistema de inmunoensayo enzimático automático es muy extensa.

    Bioluminiscencia de ATP

    En el proceso de desarrollo en los últimos años, la tecnología de bioluminiscencia se usa ampliamente y es una tecnología relativamente rápida para detectar microorganismos. En las células activas, el ATP es su producto metabólico energético común, que puede proporcionar la energía necesaria durante las actividades fisiológicas de las células. Y esta tecnología puede mantener un cierto contenido dentro de un cierto rango en el cuerpo vivo. La tecnología de detección de Escherichia coli en los alimentos puede adoptar el método de fotometría de fluorescencia, porque la razón por la que el organismo emite luz es el papel de la luciferasa, que produce el efecto de emisión de luz. La sustancia proviene de las luciérnagas de América del Norte y puede catalizar la oxidación de la fluoresceína. Sin embargo, la sustancia es inestable y puede descomponer rápidamente la fluorescencia. Además, el proceso de adquisición de resultados de la tecnología de detección es muy rápido y el dispositivo es fácil de transportar, muy adecuado para la detección in situ.

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