Actualización de coronavirus: hay un total de 3.66 millones (datos de corona mundial) personas infectadas y confirman caso de coronavirus en todo el mundo. Irá aumentando día a día, muertes números de coronavirus 257,301. Los kits de detección son muy importantes en cada país para mejorar y hacer un cribado rápido de los casos sospechosos. El método de detección popular es la prueba de ácido nucleico, la segunda es la prueba de anticuerpos covid 19, la prueba más nueva es para la detección del antígeno covid 19. ¿Cuáles son los 3 tipos diferentes? prueba de coronavirus? ¿Cómo funcionan y principio de prueba? Este artículo le dirá lo que le preocupa.
Hoy, la Administración Nacional de Productos Médicos (NMPA) ha aprobado más de 113 tipos de nuevos dispositivos médicos de emergencia por coronavirus de 113 compañías que tienen la marca CE o la aprobación de la FDA. Entre eso, 80 tipos para la detección de ácidos nucleicos y 33 tipos para prueba de anticuerpos covid 19. La detección de anticuerpos (o antígenos) de ácido nucleico y suero son los principales métodos y procedimientos de prueba para la confirmación del nuevo coronavirus y el diagnóstico del paciente. ¿Cuáles son la muestra requerida y el procedimiento de operación? ¿Y a qué problemas nos enfrentamos ahora?
La detección de ácidos nucleicos tiene las características de apoyo al diagnóstico precoz, alta sensibilidad y especificidad. También es el "estándar de oro" para el diagnóstico de neumonía infectada por el nuevo coronavirus. El método más utilizado es la reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real (RT-PCR). En general, el resultado positivo de SARS-CoV-2 se basa en la misma muestra que está en los genes ORF1ab y N y cumple con el objetivo doble positivo o el objetivo único positivo de la detección repetida, o ambas muestras cumplen con el objetivo único al mismo tiempo.
El gen del virus como diana de detección permite que la secuencia de ADN diana seleccionada aumente exponencialmente por el canal de amplificación por PCR. Cada secuencia de ADN amplificada se puede combinar con una sonda fluorescente que agregamos de antemano. Cuantos más genes diana se amplifiquen, más fuerte será el color fluorescente acumulado. En muestras sin virus, no hay amplificación del gen diana, por lo que no se puede detectar una señal de fluorescencia más fuerte. Por lo tanto, la detección de ácido nucleico consiste en determinar el ácido nucleico en la muestra mediante la acumulación de señales fluorescentes.
Las muestras son generalmente hisopos nasales, hisopos faríngeos, hisopos nasofaríngeos, esputo, líquido de lavado bronquial, líquido de lavado alveolar (BALF), etc.
Hay cinco pasos: muestreo, retención de la muestra, almacenamiento, extracción de ácido nucleico y prueba por computadora. Todos estos procedimientos requieren experimentos científicos rigurosos:
1. Muestreo. Limpie la pared faríngea posterior y las amígdalas faríngeas bilaterales con un hisopo faríngeo de 5 a 10 veces y rote el hisopo continuamente
2. Retención de la muestra. Sumerja la cabeza del hisopo en la solución de conservación de células, luego rompa el extremo del hisopo y apriete la tapa del tubo inmediatamente como retención de la muestra.
3. Almacenamiento. Coloque el tubo de muestra en una bolsa sellada y envíelo para su inspección a tiempo. Asegúrese de que el entorno de almacenamiento esté entre 2 y 8 grados ℃ al pasar a la inspección.
4. Extracción de ácidos nucleicos. Extraiga el ácido nucleico de la muestra de virus inactivado para su posterior detección, puede utilizar un equipo automatizado, como un instrumento de extracción de ácido nucleico.
5. Detección de ácido nucleico por PCR de fluorescencia, es decir, prueba en la máquina, tardará entre 70 y 80 minutos en finalizar la reacción de PCR.
Por lo tanto, agregar anticuerpos IgM e IgG cuando la prueba de ácido nucleico es negativa, puede compensar las deficiencias de un diagnóstico perdido.
Después de 7 días de la infección por neumonía por coronavirus, se producen gradualmente anticuerpos específicos del suero, primero el anticuerpo de inmunoglobulina (IgM) y luego los anticuerpos IgG. Por lo tanto, el anticuerpo IgM indica una infección aguda reciente y un aumento en el anticuerpo IgG indica un historial de infección.
La prueba de suero se editó en el Programa de diagnóstico y tratamiento de COVID-19 (7th Versión de prueba), porque tiene la mayor ventaja de las pruebas rápidas y convenientes, que pueden superar la limitación existente de personal y lugar, y acortar el tiempo de prueba. Puede diagnosticarse como infección por COVID-19 si se sospecha que los anticuerpos IgM e IgG específicos del suero son positivos, o si el anticuerpo IgG cambia de negativo a positivo, o si el período de recuperación es 4 veces o más alto que en el período agudo.
Este kit de prueba se basa en inmunocromatografía de oro coloidal ensayo, la novela recombinante marcada con oro coloidal coronavirus el antígeno y el marcador de oro del anticuerpo de control de calidad se rocían sobre la almohadilla de unión; dos líneas de detección (G y M) y una línea de control de calidad (línea C) están recubiertas en la membrana NC. Esta tarjeta de prueba pasa la muestra líquida a lo largo de la membrana de nitrocelulosa, si hay anticuerpos IgM COVID-19, los anticuerpos se combinarán con los antígenos del virus marcados y se convertirán en el conjugado sándwich, el resultado positivo se puede leer. Y si hay anticuerpos IgG COVID-19 en la muestra, los anticuerpos se combinarán con los antígenos del virus marcados y se convertirán en el sándwich. conjugado, y luego el resultado positivo aparecerá de la misma manera. La tarjeta de prueba también tiene una línea de control de calidad (línea C) para juzgar si el proceso de cromatografía es exitoso.
Las muestras son generalmente de sangre, incluye suero, plasma o sangre completa.
1. Abra la bolsa de papel de aluminio, saque la tarjeta de prueba y colóquela horizontalmente en el escritorio;
2. Utilice una pipeta para extraer la muestra de suero / plasma / sangre completa y agréguela al pocillo de muestra, y luego extraiga la solución tampón en el pocillo de muestra.
3. Espere 15 minutos y luego lea los resultados.
1. Resultado de falsos positivos. Alguna muestra de sangre del paciente tiene el factor reumatoide, anticuerpos heterófilos, autoanticuerpos, fármacos y células tumorales, etc., que son fácilmente causantes de reacciones cruzadas en la prueba, y luego, ocasionalmente, habrá resultados falsos positivos.
2. Resultado falso negativo. El período de ventana del método de prueba de anticuerpos séricos y la diferente sensibilidad del kit de prueba también causarán un resultado falso negativo.
Por lo tanto, la detección de anticuerpos séricos solo se usa como una prueba complementaria para casos sospechosos de prueba de ácido nucleico negativa de COVID-19, y no se puede aplicar como un indicador de diagnóstico solo para la detección. El uso combinado de detección de anticuerpos séricos y detección de ácido nucleico puede ayudar a mejorar la tasa de detección del COVID-19, descubrir a los pacientes diagnosticados tanto como sea posible y ser más propicio para el control de la epidemia.
La detección del antígeno COVID-19 puede detectar directamente si la muestra humana contiene el nuevo coronavirus. El diagnóstico es rápido, preciso y requiere poco equipo y personal. El ELISA Sandwich permite que dos anticuerpos específicos de antígeno se identifiquen y se unan a un objetivo a través de diferentes epítopos, lo que puede reducir en gran medida la reacción cruzada y mejorar la especificidad de la prueba.
Los antígenos como la proteína N, la proteína E y la proteína S del nuevo coronavirus pueden usarse como inmunógenos para estimular a las células plasmáticas a producir anticuerpos específicos después de que el virus infecta el cuerpo humano. De acuerdo con el principio Sandwich ELISA, cuando la muestra se deja caer sobre la almohadilla de muestra, fluirá a través de la almohadilla de conjugación, la línea de prueba (T) y la línea de control de calidad (C) en la membrana NC.
La almohadilla de conjugación contiene un anticuerpo específico de antígeno marcado, que puede unirse al antígeno (proteína viral) en la muestra. Cuando la muestra alcance la línea de prueba (línea T), el segundo anticuerpo específico de antígeno fijado en esta línea se combinará nuevamente con el antígeno y se leerá el resultado positivo. La línea de control de calidad (línea C) está recubierta con anticuerpo IgG y se puede combinar con el anticuerpo en la almohadilla de muestra para juzgar si el proceso de cromatografía es exitoso.
La muestra proviene generalmente de sitios de infección, como hisopos orofaríngeos, hisopos nasofaríngeos, esputo, suero, plasma, etc.
1. Deje caer el procesamiento de la muestra en el tubo de muestra;
2. Agite el hisopo de muestreo y apriételo contra la pared del tubo, de modo que la muestra se mezcle completamente con la solución de tratamiento;
3. Prepare la tarjeta de prueba y agregue la muestra al pocillo de muestra;
4. Espere 15 minutos y luego lea los resultados.
1. Falso negativo. La detección de antígenos requiere una mayor sensibilidad, porque el nuevo coronavirus siempre infecta el tracto respiratorio inferior, como los alvéolos. Si recolecta la muestra del tracto respiratorio superior, como nasofaringe y orofaringe, es posible que no pueda contraer patógenos o COVID-19 virus y causar un diagnóstico perdido;
2. El proceso de preparación es difícil y requiere mucho tiempo. Se necesitan alrededor de dos o tres meses para preparar el antígeno recombinante y luego preparar el anticuerpo monoclonal en ratones. Si el anticuerpo preparado tiene un rendimiento deficiente, debe prepararse nuevamente durante dos o tres meses.
Por lo tanto, el método de detección de antígenos aún no está maduro y, actualmente, la Administración Nacional de Productos Médicos no ha aprobado ni registrado ningún kit de detección de antígenos.
La detección de ácido nucleico / anticuerpo / antígeno del nuevo coronavirus tiene sus propios puntos y no se pueden reemplazar entre sí. Se pueden aplicar una variedad de métodos de detección juntos como complemento, que pueden combinar la biología molecular con la detección inmune, dando pleno juego a sus respectivas ventajas, mejorando la sensibilidad y la especificidad. Todos estos pueden acortar el período de la ventana de detección de manera efectiva, aumentar la tasa de detección positiva y brindar doble protección para todos los posibles grupos de riesgo.
Referencia:
Zhengtu Li, Yongxiang Yi et al. Desarrollo y aplicación clínica de una prueba rápida de anticuerpos combinados IgM ‐ IgG para el diagnóstico de infección por SARS ‐ CoV ‐ 2. J Med Virol.2020 ; 1-7