Almohadilla de muestra y almohadilla de conjugado para ensayos de flujo lateral

El inmunoensayo lateral (inmunoensayos de flujo lateral) es una forma principal de prueba de punto de atención (POCT), su esencia sigue siendo la respuesta inmune del antígeno del anticuerpo. Sin embargo, el método tradicional es establecer la reacción del antígeno del anticuerpo en una placa de 96 pocillos, o en la superficie de microesferas magnéticas, mientras que la detección por inmunocromatografía lateral coloca la reacción inmune en una membrana de nitrocelulosa porosa (membrana NC) Por lo tanto, también se llama detección de tiras reactivas.

Los componentes principales de la detección por inmunoensayo de flujo lateral incluyen papel absorbente, membrana cromatográfica, almohadilla de conjugado y almohadilla de muestra, y una placa de plástico base que soporta todos los materiales. La muestra líquida se agrega desde la almohadilla de muestra y fluye hacia el lado del papel absorbente. Al pasar a través de la almohadilla de conjugado, las inmunosondas (oro coloidal, microesferas fluorescentes, etc.) en la almohadilla de conjugado se liberan y reaccionan con el analito en la muestra durante el proceso de flujo, y luego se fijan a la línea de detección en el Membrana NC (Línea de prueba) El anticuerpo captura y se agrega para formar una señal óptica.

Ensayos de flujo lateral se originó en la década de 1990. Con la estabilidad de la tecnología de preparación de oro coloidal, se ha desarrollado un método de diagnóstico rápido desarrollado junto con el inmunoensayo. Según el desarrollo de las sondas, la tecnología de prueba de flujo lateral ha pasado por tres etapas principales: oro coloidal, microesferas de látex teñidas y microesferas fluorescentes. En consecuencia, los resultados de la detección también han pasado por tres etapas: cualitativa, semicuantitativa y cuantitativa.

La almohadilla de muestra se puede utilizar para realizar múltiples tareas, la más importante de las cuales es promover una distribución uniforme y controlada de la muestra en la almohadilla de conjugado. También controla la velocidad a la que el líquido ingresa a la almohadilla conjugada, evitando así que el dispositivo se desborde. Cuando se impregna con proteínas, detergentes, taquificantes y sales tampón.
En general, se utilizan dos tipos de materiales como almohadillas de muestra: filtros de fibra de celulosa y malla tejida.

Añadiendo un retardador a la almohadilla de muestra, se puede eliminar el retardo de la membrana. Este método puede ser más fácil y rentable que intentar bloquear directamente la membrana. A menos que el anticuerpo (o antígeno) esté unido covalentemente a las partículas del detector, en presencia de proteínas bloqueadoras o detergentes, se recomienda no secar los reactivos del detector en la almohadilla de unión.

Aumente la viscosidad de la muestra (ajuste las características de flujo).
Mejore la capacidad de las muestras para disolver los reactivos de detección.
Evite que los conjugados y analitos se unan de manera no específica a cualquier material posterior.
Modifique las propiedades químicas de la muestra para que sea compatible con el complejo inmune en la línea de prueba.
Promueva el flujo uniforme de la muestra a lo largo de la membrana.
La suplementación de proteínas y detergentes y tensioactivos puede promover la re-conjugación de conjugados, reducir la unión de aglutinantes no específicos y puede minimizar la membrana de adsorción de analitos.

Las almohadillas conjugadas pueden realizar múltiples tareas, la más importante de las cuales es la transferencia uniforme de reactivos de detección y muestras de prueba a la membrana. Cuando la muestra fluye hacia la almohadilla conjugada, el reactivo de detección se disuelve, levanta el material de la almohadilla y se mueve hacia la membrana junto con la muestra.
La función importante de la almohadilla de conjugado es entregar las partículas del agente de prueba como un volumen constante de muestra en cada tira de prueba a la membrana.

Baja unión inespecífica. Si el reactivo de detección o analito se une a la almohadilla de unión, no podrá formar complejos inmunes en la línea de prueba, reduciendo así la intensidad y la sensibilidad de la señal.

Características de flujo consistentes. Las características de flujo inconsistentes pueden causar serios problemas de rendimiento. Si el material no deposita la muestra uniformemente sobre la membrana, el reactivo de detección puede dirigirse hacia la membrana y pueden aparecer rayas a medida que la muestra migra a lo largo de la membrana. Por lo tanto, aparecerán señales desiguales en las líneas de prueba y control.

El volumen del lecho es constante. Al cargarlo en una almohadilla de conjugado por inmersión, la cantidad de reactivo de detección en cada tira reactiva depende del volumen del lecho del material. Si el volumen del lecho varía mucho, se observará una intensidad de señal variable incluso si todos los demás componentes de la tira permanecen sin cambios.

Extracto bajo. Además de los extractos químicos, el material también debe estar libre de partículas que puedan bloquear la membrana en la interfaz de la almohadilla conjugada / membrana.

Buenas características de procesamiento de banda y compresibilidad constante. Estos atributos son muy importantes para incorporar la producción de tiras reactivas y transferir líquido de manera estable a la membrana.

Ambos se utilizan para almacenar diferentes muestras. La almohadilla de conjugado es un portador para etiquetar proteínas, mientras que la almohadilla de muestra es un portador para el pretratamiento de solutos bioquímicos. Por lo tanto, considerando la coexistencia a largo plazo con la proteína, la almohadilla conjugada solo puede mantener un pH neutro, baja concentración de iones salinos, etc., para crear un buen ambiente de conservación para la proteína. La almohadilla de muestra se enfrenta a una solución de muestra más compleja, por lo que requiere mayores capacidades de pretratamiento y filtración.

Desde la perspectiva de la tecnología de etiquetado, el ensayo de flujo lateral ha pasado por varias etapas, como el oro coloidal, las microesferas de látex teñidas y las microesferas fluorescentes. Además, en los últimos años se han desarrollado partículas magnéticas y de fluorescencia de puntos cuánticos. Las microesferas de látex y oro coloidal se juzgan principalmente a simple vista para determinar el cambio de color, generalmente solo para la detección cualitativa, y deben cooperar con el instrumento para lograr un cambio de color semicuantitativo. Con la ayuda de la amplificación de la señal de fluorescencia y el analizador de fluorescencia para leer la intensidad de la fluorescencia, las microesferas fluorescentes ya pueden lograr una detección cuantitativa, que es la corriente principal del desarrollo actual.

La inmunocromatográfica de flujo lateral es un método de inmunoensayo rápido que combina inmunología y cromatografía. Se utiliza principalmente para la detección de patógenos, hormonas, fármacos y metabolitos. El principio es identificar antígenos o anticuerpos mediante el etiquetado del objeto de inspección.
BALLYA está comprometido con la investigación de las ciencias biológicas y tiene su propia y profunda experiencia en el uso de inmunocromatografía lateral. Utilizando inmunocromatografía lateral, Ballya ha desarrollado con éxito una variedad de kit de prueba rápida para productos lácteos, miel, productos acuáticos, pesticidas, adulteración, enfermedades de mascotas y enfermedades del ganado. En el futuro, Ballya continuará realizando una investigación más profunda sobre más aspectos de las pruebas.