Navegación Rápida
Hay una gran diferencia entre anticuerpos monoclonales y policlonales. Anticuerpos monoclonicos son muy uniformes anticuerpos que son producidos por un solo clon de células B y se dirigen solo a un epítopo específico. La tecnología de anticuerpos de hibridoma se basa en la tecnología de fusión celular, que combina células B sensibilizadas y células de mieloma con capacidad de reproducción inmortal en tumores híbridos de células B.
Una sola célula de hibridoma con esta característica se utiliza para cultivar una población celular para preparar un anticuerpo específico contra un epítopo, es decir, un anticuerpo monoclonal.
El desarrollo de la anticuerpos monoclonicos ha pasado por cuatro etapas, a saber:
Anticuerpos monoclonales murinos, anticuerpo quimérico, anticuerpo monoclonal humanizado y anticuerpos monoclonales completamente humanos.
Completamente humano anticuerpos monoclonicos: La región variable y la región constante del anticuerpo son de origen humano, eliminando la inmunogenicidad y los efectos secundarios tóxicos.
Las tecnologías relacionadas para la preparación de anticuerpos completamente humanos incluyen principalmente:
Tecnología de hibridoma humano, tecnología de linfocitos B de transformación de EBV, tecnología de presentación de fagos, tecnología de preparación de anticuerpos de ratón transgénico y tecnología de preparación de anticuerpos de células B individuales.
Humanizado y plenamente anticuerpos humanizados Los fármacos preparados a partir de anticuerpos humanizados y completamente humanizados superan varias deficiencias de los anticuerpos derivados de animales y los anticuerpos quiméricos debido a su alta afinidad, alta especificidad y bajos efectos tóxicos y secundarios. Se ha convertido en una tendencia inevitable en el desarrollo de fármacos de anticuerpos terapéuticos.
Los pocillos positivos que se han analizado para detectar anticuerpos pueden cultivarse y clonarse para obtener anticuerpos monoclonales secretados por la descendencia de una sola célula. En términos generales, cuanto antes sea el momento de la clonación, mejor. Porque durante este período, varias células de hibridoma crecen vigorosamente al mismo tiempo, compitiendo por la nutrición y el espacio, y las células que producen los anticuerpos especificados pueden sumergirse y eliminarse.
Sin embargo, el tiempo de clonación no debe ser demasiado temprano, de lo contrario, los rasgos celulares son inestables y el número de células es pequeño y fácil de perder. Las células de hibridoma positivas clonadas, después de un período de cultivo, también perderán la capacidad de producir anticuerpos debido a mutaciones celulares o pérdida de cromosomas específicos, por lo que deben clonarse una y otra vez. El número de clonaciones está determinado por la capacidad de secreción y la inmunidad del antígeno. En términos generales, el número de clones de un antígeno inmunitario fuerte puede ser menor, pero al menos de 3 a 5 clones pueden hacerlo estable. Hay muchos métodos de clonación, incluido el método de dilución limitante, el método de micromanipulación, el método de placa de agar blando y el método de separación por activación por fluorescencia.
Desde el advenimiento de anticuerpos monoclonicos, se han aplicado en muchos campos de la medicina debido a sus características únicas.
Antígenos suelen estar compuestos por múltiples determinantes antigénicos. Un tipo de determinante antigénico estimula el cuerpo y la anticuerpo producido por un linfocito B que recibe la estimulación del antígeno se llama Anticuerpo Monoclonal. El cuerpo es estimulado por múltiples determinantes antigénicos y, en consecuencia, se producen varios anticuerpos monoclonales. Estos anticuerpos monoclonales se mezclan para formar anticuerpo policlonal.
La estructura molecular del antígeno que puede hacer que el cuerpo produzca anticuerpos se llama epítopo. Puede haber varios determinantes antigénicos diferentes en un antígeno, de modo que el cuerpo produce varios anticuerpos diferentes y los anticuerpos finales son células plasmáticas. Una población de células plasmáticas que solo actúa sobre un determinante antigénico es un clon. El anticuerpo específico producido por un clon se llama anticuerpo monoclonal. Anticuerpos monoclonicos puede unirse específicamente a un determinante antigénico específico, al igual que un misil golpea con precisión el objetivo. Por otro lado, incluso si se trata del mismo determinante antigénico, varios clones pueden producir anticuerpos en el organismo, formando una mezcla de varios anticuerpos monoclonales, denominados policlonal anticuerpos
Antígenos suelen estar compuestos por múltiples epítopos. Un tipo de epítopo estimula el cuerpo. El anticuerpo producido por un linfocito B que recibe el antígeno se llama anticuerpo monoclonal. El cuerpo es estimulado por una variedad de determinantes antigénicos y, en consecuencia, se producen una variedad de anticuerpos monoclonales. Estos anticuerpos monoclonales se mezclan para formar anticuerpos policlonales. Excepto por diversos determinantes antigénicos, el mismo tipo de epítopo también puede estimular al cuerpo a producir cinco tipos de anticuerpos: IgG, IgM, IgA, IgE e IgD.
Los anticuerpos policlonales son un grupo de inmunoglobulinass secretada por las células plasmáticas del cuerpo que son estimuladas por antígenos heterólogos (antígenos macromoleculares, conjugados de hapteno). Los anticuerpos policlonales se utilizan ampliamente en la investigación y el diagnóstico debido a su capacidad para reconocer múltiples epítopos y provocar reacciones de precipitación con un tiempo de preparación corto y bajo costo.
Un buen antisuero policlonal contiene múltiples anticuerpos contra diferentes epítopos de un determinado antígeno. Dado que el antisuero policlonal normalmente contiene anticuerpos contra diferentes epítopos de un determinado antígeno, incluidos los epítopos resistentes a la desnaturalización, también tendrá un efecto en las muestras fijadas en profundidad. En la tinción de secciones de tejido incluidas en parafina, a menudo se utilizan anticuerpos policlonales. Según las diferentes necesidades del experimento, se utilizan anticuerpos policlonales para marcar el antígeno correspondiente.
Además, en la producción agrícola, anticuerpo policlonal se utiliza para el control in situ de residuos de plaguicidas; En aplicaciones clínicas, los anticuerpos policlonales se utilizan principalmente para la detección de patógenos, el diagnóstico y el tratamiento de enfermedades, como los inmunosupresores de proteínas para la respuesta al trasplante y el tratamiento de enfermedades autoinmunes.
Clonación: se refiere a una línea celular reproducida asexualmente, que es un grupo de líneas celulares formadas por la división y reproducción de una sola célula progenitora. En todos los miembros de esta familia, si no se produce ninguna mutación, los genes son exactamente iguales.
Anticuerpo policlonal (pAb): inmuniza a los animales con un antígeno que contiene múltiples epítopos, que pueden estimular múltiples clones de células B para producir diferentes anticuerpos contra múltiples epítopos. El suero inmune obtenido es en realidad una mezcla de múltiples anticuerpos.
Anticuerpos monoclonicos (mAb): Anticuerpos homólogos producidos por un clon de células B que reconocen un epítopo. Muy uniforme, fuerte especificidad, alto título, poca o ninguna reactividad cruzada.
Diferencias de la preparación de anticuerpos monoclonales:
Los linfocitos B tratados con antígenos específicos y células de mieloma se fusionan para obtener células de hibridoma. Después de cribar por medio HAT y detectar el título por ELISA, se obtiene un clon positivo, y luego se hace un cultivo celular o se inyectan las células en la cavidad abdominal de los animales (generalmente ratones balb / c) y se cultivan con ascitis, se recolecta el sobrenadante / ascitis y se purifican para obtener anticuerpos monoclonales .
La preparación de anticuerpo policlonal no es tan engorroso como los anticuerpos monoclonales. Solo necesita inyectar el antígeno (cuanto mayor sea la pureza, mejor) directamente en el cuerpo del animal para la inmunización. Después de 3 a 4 inmunizaciones, el título se califica mediante ELISA y la sangre se centrifuga. El sobrenadante se puede purificar para obtener anticuerpos policlonales. Por tanto, el ciclo de preparación de los anticuerpos policlonales es más corto que el de los anticuerpos monoclonales y el precio de preparación inicial es más bajo que el de los anticuerpos monoclonales.
A. Anticuerpo monoclonal
Ventajas:
Excelente afinidad y purificación:
B. Anticuerpo policlonal
Ventajas:
Desventajas:
| Características | Anticuerpo monoclonal | Anticuerpo policlonal | |
|---|---|---|---|
| 1 | Especificidad | Fuerte | Débil |
| 2 | Estabilidad | Relativamente pobre, sensible a las condiciones físicas y químicas. | Buena |
| 3 | Requisitos para inmunógenos | Los inmunógenos impuros también pueden producir anticuerpos altamente purificados. | Se requiere una alta pureza inmunógena |
| 4 | Normalización | Fácil de estandarizar poca diferencia entre lotes | Difícil, gran diferencia entre lotes |
| 5 | Reconocimiento | Solo se detecta un epítopo en el antígeno | Puede reconocer múltiples epítopos |
| 6 | Reacción cruzada | no es fácil de reaccionar de forma cruzada con otras proteínas | reacciones inespecíficas frecuentes y difíciles de evitar |
| 7 | Precipitación y aglutinación | La mayoría no | Algunos |
| 8 | Costo de producción | Alta | Baja |
| 9 | Período de preparación | Largo | Short |
| 10 | Precio | Alta | Baja |
El espacio entre anticuerpos monoclonales y policlonales es enorme, y estas diferencias los hacen útiles en diferentes campos. Anticuerpos monoclonicos ocupan un lugar vital en la medicina, mientras que los policlonales anticuerpos brillan en los campos de la producción agrícola y la detección y el tratamiento de enfermedades.
Referencias