Testiranje i rješenja sigurnosti hrane | Tel: +86 20 3947 9163

PCR test u realnom vremenu sa fluorescentnom salmonelom

salmonela

Fluorescentna PCR u realnom vremenu in vitro detekcija salmonele.

Specifikacija: 96 T / kutija
Komplet se čuva na 2 - 8 ℃.
Period važenja je 12 meseci.
Specifikacija: 96 T / kutija

koristi: Fluorescentna PCR u realnom vremenu in vitro detekcija salmonele.

Princip otkrivanja: Komplet sadrži prajmere specifične za salmonelu. Kad uzorak sadrži salmonelu, DNA salmonele ekstrahirana nakon prethodnog obogaćivanja eksponencijalno se pojačava PCR-om. Tijekom reakcije, fluorescentna sonda specifična za salmonelu hibridizira se sa ciljnom nukleinskom kiselinom i istovremeno je hidrolizom enzima Taq kako bi se fluorescentna grupa odvojila od grupe za gašenje na sondi: tako da se prisutnost salmonele može u realnom vremenu procijeniti pomoću fluorescencije prirast.

Proizvod i sastav:
Sastav (96T/kit)specifikacijakoličina
Rastvor za ekstrakciju DNK3ml1 cijev
PCR reakcija otopine za salmonelu1100ul1 cijev
Enzim iz slavine (5U/ul)20ul1 cijev
Pozitivna kontrola salmonele40ul1 cijev
Negativna kontrola salmonele0.5ml1 cijev
Uputstvo za upotrebu1
Uslovi skladištenja i rok trajanja kompleta:
1. Komplet se čuva na 2 - 8 ℃.
2. Period važenja je 12 mjeseci.

Primjenjivi instrumenti:
Dostupni su ABI7500, 9600 serija, MJ opticon2, Bio-Rad i drugi fluorescentni kvantitativni PCR instrumenti

Eksperimentalna metoda:
1. Uzmite 1 ml rastvora za obogaćivanje u sterilnu epruvetu za centrifugiranje od 1.5 ml, centrifugirajte na 1 10.000 o / min 5 minuta i odbacite supernatant; upotrijebite klasičnu metodu ekstrakcije fenol kloroforma da biste testirali ekstrahirani predložak ili ga čuvajte na 20 ° C dok se ne testira.
2. Stavite PCR reakcijsku otopinu na sobnu temperaturu da se uravnoteži, uzmite Taq enzim nakon topljenja i dodajte Taq enzim pri 2∪/epruveti, to jest, svaki reakcijski sistem za testiranje se priprema kao: PCR reakcijska otopina 22.5u1+0.4ulTaq enzim.
3. Dodajte šablon: Odmrznite ekstrakt nukleinske kiseline uskladišten na -20 ° C na sobnoj temperaturi i centrifugirajte na 13,000 o / min 5 minuta. Negativna i pozitivna kontrola se odmrzavaju na sobnoj temperaturi prije upotrebe. U svaku PCR reakcijsku epruvetu dodajte 2 ul šablona ili negativne i pozitivne kontrole obrađene u koraku 1, pokrijte epruvetu, stavite na PCR instrument i zabilježite odgovarajući broj uzorka.
4. Područje pojačanja i detekcije na vozilu: uslovi reakcije su 95C: 3 minute, 1 ciklus; 95C: 5sec, 60C: 40sec (akvizicija signala), 40 ciklusa. Reakcijski sistem je postavljen na 25u1.
Za višekanalni fluorescentni PCR instrument, signal je postavljen na Fam fluorescein.

Procjena rezultata:
Za detalje pogledajte priručnik.

Mjere opreza pri korištenju kompleta:
1. Ovaj komplet koristi se samo za in vitro testiranje i istraživačke svrhe. Molimo pažljivo pročitajte cijeli tekst ovog priručnika prije nego što ga počnete koristiti.
2. Eksperiment mora biti strogo podjeljen: područje za pripremu prije PCR-a pripremiti eksperimentalne reagense; područje obrade uzoraka-uzorci za testiranje, obrada šablona; područje detekcije-PCR amplifikacija, detekcija.
3. Za relevantne standarde upravljanja laboratorijima, pogledajte implementaciju standarda upravljanja laboratorijama za amplifikaciju gena koje su izdali relevantni nacionalni organi.

Ako želite da znate više, molimo kontaktirajte nas

    Zanimljiva pitanja: Salmonela

    O Salmoneli

    Definicija salmonele

    Salmonella opći je izraz za skupinu bakterija. Može zaraziti ljude i uzrokovati bolesti, kao i životinje. To je zoonotska bolest. Budući da je salmonela gram-negativna enterobakterija, ljudi mogu jesti hranu zaraženu salmonelom i uzrokovati trovanje hranom. Prema statistikama, u svijetu je trovanje hranom, uglavnom uzrokovano dijetom salmonele, uobičajeni uzročnik hrane. Osim toga, Salmonella typhimurium, Salmonella paratyphi, Salmonella choleraesuis itd. Mogu čak uzrokovati crijevne epidemije poput trbušnog tifusa, paratifusa i kolere. Tifusna groznica inficira samo ljude, ne životinje i oštećuje ljudsku koštanu srž, jetru i slezenu. Svake godine to može uzrokovati da se desetine miliona ljudi razboli, a više od 600,000 umre.

    Izvori salmonele

    Salmonela u prirodi ima širok spektar domaćina. Nekoliko Salmonela selektivno je za domaćina, a većina je pogodna za ljude i životinje. Mogu živjeti u gastrointestinalnom traktu sisara, gmazova, ptica, insekata i ljudi. Stopa infekcije divljim životinjama je više od 1% do 20%.

    Salmonela uglavnom kontaminira mesnu hranu, a riba, perad, mlijeko i jaja također mogu biti kontaminirane ovim bakterijama. Trovanje hranom salmonelom može se pojaviti tijekom cijele godine. Konzumiranje nekuhane bolesti, mrtvog stočnog mesa ili stočnog mesa kontaminiranog na drugim mjestima nakon klanja najvažniji je uzrok trovanja hranom salmonelom. Neki stručnjaci za hranu ističu da Amerikanci imaju drugačije prehrambene navike od Kineza. Vole jesti polukuhana jaja ili čak sirova jaja, pa kad jaja sadrže salmonelu, šansa za infekciju je relativno velika. "U zemlji ne čudi što sirova jaja sadrže salmonelu, ali ljudi vole kuhati kuhana jaja, što uvelike smanjuje mogućnost infekcije.

    Infekcija salmonelom

    Salmonela pripada porodici Enterobacteriaceae i može uzrokovati gastroenteritis, tifusnu groznicu, sepsu i ekstraintestinalne žarišne infekcije. Zajedno se naziva i infekcija salmonelom (tj. Salmoneloza). Razni se sindromi ponekad mogu preklapati. Nisu uključene infekcije uzrokovane tifusom i paratifusom.

    Kliničke manifestacije infekcije salmonelom su različite. Prema svojim glavnim simptomima mogu se podijeliti u četiri vrste: enteritis, tifus, septikemija i lokalizirane gnojne infekcije.

    Vrsta salmonele

    Salmonella typhi

    Salmonella typhi je bakterija veličine (0.6 do 0.9) × (1 do 3) mikrona bez spora i općenito bez kapsula. Osim Salmonella gallinarum i Salmonella typhi, većina njih ima flagele po tijelu, uzrokujući Salmonella typhi.
    Bakterije salmonele koje uzrokuju tifusnu groznicu. Bakterije su u obliku štapića, sa flagelama po cijelom tijelu i mogu stvarati endotoksin. Injekcija endotoksina u zečje vene može uzrokovati ljudske lezije, poput groznice, leukopenije itd., A masivne injekcije mogu uzrokovati smrt.

    Salmonella typhimurium

    Salmonella typhimurium je grupa neprilagođenih ili pantrofnih salmonela. Ima širok raspon domaćina i distribuira se u prirodi. Postoji u probavnom traktu raznih životinja, poput peradi, stoke i glodara. Jedan. Bakterija može uzrokovati razne zarazne bolesti peradi i sisavaca, a može uzrokovati i infekcije ljudi, a od važnosti je i za javno zdravlje.

    Salmonella enteritidis

    Salmonella enteritidis glavni je uzročnik akutnog gastroenteritisa. Tipični simptomi nakon infekcije uključuju groznicu, proljev i povraćanje. Salmonella enteritidis jedna je od patogenih bakterija koja nema specifičnost domaćina i invazivna je. Domaćin uključuje ljude i razne životinje. Ne samo da bakterije mogu uzrokovati ozbiljne ekonomske gubitke u morbiditetu i mortalitetu peradi, već i zagađeni proizvodi od peradi kao nositelji Salmonella enteritidis također ozbiljno ugrožavaju zdravlje ljudi.

    Salmonella choleraesuis

    Salmonella choleraesuis je vrsta netifoidne salmonele, koja je glavna patogena bakterija koja izaziva paratifus kod prasadi, nanoseći veliku štetu industriji svinja.
    Kada septikemična Salmonella choleraesuis napadne tijelo svinje, ona odmah upada u limfni prostor crijevne stjenke, čime ponovo napada krv i razmnožava se u krvi, uzrokujući septikemiju. Veliki broj endotoksina nastaje pri razmnožavanju bakterija, a endotoksini djeluju na bijela krvna zrnca i uzrokuju upalu, visoku temperaturu i proljev.
    Infekcija Salmonella choleraesuis uglavnom se prenosi fekalnim otvorom. Ako pacijent ima farmu svinja u svom domu, higijenske navike su loše, a osnova kronične bolesti jetre je niska, imunitet je nizak, pa može biti posljedica unosa hrane ili vode zaražene infekcijom uzrokom salmonele.

    Nakon infekcije Salmonella choleraesuis kod odraslih, početak je podmukao, a kliničke manifestacije nisu tipične. Lako je propustiti dijagnozu i postaviti pogrešnu dijagnozu i odgoditi liječenje. Ako tijek liječenja nije dovoljan, podmukla kontrola bakterijemije nije potpuna i stanje se može više puta produžavati.

    Trovanje salmonelom

    Specifičnost domaćina Salmonele je vrlo slaba, što može zaraziti i životinje i ljude, a lako je uzrokovati trovanje hranom kod ljudi. Najviše je patogena Salmonella cholerae, zatim Salmonella typhimurium i Salmonellaenteritidis.
    Gutanje usta netifoidnom hranom kontaminiranom salmonelom uzrokovalo je bolest. Uobičajena hrana koja uzrokuje bolest uglavnom je hrana životinjskog porijekla, uglavnom meso stoke, meso peradi, jaja, mlijeko i njihovi proizvodi.

    Simptomi salmonele

    Simptomi trovanja hranom uzrokovani salmonelom uglavnom uključuju mučninu, povraćanje, bol u trbuhu, glavobolju, zimicu i proljev, kao i umor, bolove u mišićima, zamagljen vid, umjerenu temperaturu, nemir i pospanost, trajanje traje 2 do 3 dana, u prosjeku smrtnost je iznosila 4.1%. Glavni razlog uzrokovan je unosom hrane koja sadrži velike količine bakterija specifičnih za domaćina ili serotipova salmonele.

    Patogeneza salmonele

    1. Invazija živih bakterija salmonele na sluznicu crijeva i sinergistički učinak endotoksina; glavni je uzrok trovanja hranom uzrokovano salmonelom.

    2. Trovanje enterotoksinom: Salmonella enteritidis i Salmonella typhi mogu proizvesti enterotoksin. Mehanizam je isti kao i enterotoksinski tip bakterijskog trovanja hranom.

    Period inkubacije salmonele

    Nakon unosa otrovne hrane. Simptomi se općenito pojavljuju u roku od 12 do 14 sati, a neki imaju duži period inkubacije.

    Liječenje salmonele

    Gastroenteritis uzrokovan salmonelom općenito ne zahtijeva liječenje antibioticima; uglavnom se nadopunjuje vodom i elektrolitima; ali za novorođenčad, imunokompromitirane pacijente i posebne ranjene pacijente; Ovisno o situaciji, potrebno je liječenje antibioticima.

    Prevencija salmonele

    1. Operite ruke pažljivo prije jela, nakon odlaska u toalet, prije dodirivanja hrane, nakon dodirivanja životinja ili sirovih jaja.
    2. Odvojite daske za rezanje sirove i kuhane hrane.
    3. Temeljno jedite hranu (posebno jaja i perad).
    4. Hrana koja nije spremna za jelo treba biti zamotana u plastičnu foliju i uskladištena u frižideru. Treba ga zagrijati ili skuhati prije ponovnog jela.
    5. Borite se i blokirajte vektore poput muha. Nečistu hranu kontaminiranu muhama, kojoj je istekao rok trajanja ili je pokvarena treba baciti i ne jesti.
    6. Vodotoranj treba često čistiti i dezinfikovati.
    7. Voda za piće tokom putovanja ili kampovanja treba prokuhati i dezinfikovati.
    8. Ako imate simptome poput povraćanja, proljeva ili vrućice, trebate što prije potražiti liječničku pomoć.

    Test na salmonelu

    Detekcija antitijela

    Značajna specifičnost reakcije antigen-antitijelo koristi se za identifikaciju bakterija i serološko tipiziranje više od pola stoljeća. Prisutnost specifičnih antitijela na bakterijske ćelije ili flagelarne antigene omogućava ljudima da uspostave brze metode za otkrivanje patogena koji se prenose hranom. Postoje mnoge uspostavljene imunološke metode otkrivanja salmonele, koje se mogu grubo podijeliti na metode zasnovane na enzimski obilježenim antitijelima (ELISA), bojenju fluorescentnim antitijelima (imunofluorescencija), antitijelima obilježenim izotopima (radioimunološki test) i mnogim drugim metodama. Metode zasnovane na antitijelima koristeći lateksnu aglutinaciju, imunosenzore, imunodifuziju i imunohromatografiju. Međutim, metoda koja se najviše koristi temelji se na ELISA tehnici na dva mjesta, naime sendvič ELISA. Nakon poboljšanja ove metode, radioaktivni izotopi koriste se za zamjenu označenih antitijela. Ukratko, to se odnosi na upotrebu "hvatajućih" antitijela imobiliziranih na čvrstoj podlozi za hvatanje ciljnog antigena. Nakon pranja kako bi se uklonile nevezane komponente, dodaje se druga enzimska oznaka. Antitijela, koja su vezana za različita mjesta uhvaćenog antigena, dodaju se u supstrat enzima nakon drugog pranja i puštaju da reagiraju sa komponentama u boji, a zatim metom Antigen se može lako otkriti spektrofotometrijom. Upotreba mikrotitarske ploče kao čvrsta matrica standardizira format reakcije i olakšava njegovu automatizaciju.

    Metoda nukleinske kiseline

    DNK i RNK ćelijske nukleinske kiseline jedini su veliki molekuli koji mogu prenositi informacije. Budući da sve ćelije sadrže ovaj molekul, može se koristiti kao meta za detekciju. Meta je obično specifična sekvenca nukleinske kiseline, koja se može otkriti upotrebom komplementarnih molekula nukleinske kiseline kao sondi. Slično imunološkim metodama, sonda također mora biti odgovarajuće označena, poput radioizotopa, enzima ili luminiscentnih markera. Fitts i dr. uveo prvu generaciju tehnologije hibridizacije DNA-RNA u otkrivanju salmonele u hrani. Sonde koje se koriste u ovoj metodi sadrže DNK fragmente Salmonella typhi koji su označeni radioaktivnim izotopima. Njihova osetljivost je velika. Nakon otprilike 48 sati koraka obogaćivanja, granica detekcije može doseći 108 bakterija/ml, ali zbog upotrebe radioizotopa, koji se mogu primijeniti samo u specijaliziranim laboratorijima, prednosti ove metode su poništene. U tu svrhu razvijena je kolorimetar tehnologije druge generacije zasnovane na hibridizaciji nukleinskih kiselina.

    Recent Posts

    © autorska prava 2020 - BALLYA rezervirano.
    kovertatelefonmap-marker LinkedIn facebook Pinterest youtube RSS cvrkut Instagram facebook-prazno rss-prazno linkedin-white Pinterest youtube cvrkut Instagram