Testiranje i rješenja sigurnosti hrane | Tel: +86 20 3947 9163

Listeria monocytogenes fluorescentni PCR test u stvarnom vremenu

salmonela

Fluorescentna PCR u stvarnom vremenu in vitro detekcija Listeria monocytogenes.

Specifikacija: 96 T / kutija
Komplet se čuva na 2 - 8 ℃.
Period važenja je 12 meseci.
Specifikacija: 96 T / kutija

koristi: Fluorescentna PCR u stvarnom vremenu in vitro detekcija Listeria monocytogenes.

Princip otkrivanja: Komplet sadrži prajmere specifične za Listeria monocytogenes. Kada uzorak sadrži Listeria monocytogenes, DNK Listeria monocytogenes ekstrahirana nakon prethodnog obogaćivanja eksponencijalno se pojačava PCR-om. Tijekom reakcije, fluorescentna sonda specifična za Listeria monocytogenes hibridizira se s ciljnom nukleinskom kiselinom i istovremeno je Taq enzimska hidroliza za odvajanje fluorescentne skupine od grupe za gašenje na sondi: tako da se prisutnost Listeria monocytogenes može u stvarnom vremenu procijeniti pomoću prirast fluorescencije.

Proizvod i sastav:
Sastav (96T/kit)specifikacijakoličina
Rastvor za ekstrakciju DNK3ml1 cijev
PCR reakcija otopine Listeria monocytogenes1100ul1 cijev
Enzim iz slavine (5U/ul)20ul1 cijev
Listeria monocytogenes pozitivna kontrola40ul1 cijev
Listeria monocytogenes Negativna kontrola0.5ml1 cijev
Uputstvo za upotrebu1
Uslovi skladištenja i rok trajanja kompleta:
1. Komplet se čuva na 2 - 8 ℃.
2. Period važenja je 12 mjeseci.

Primjenjivi instrumenti:
Dostupni su ABI7500, 9600 serija, MJ opticon2, Bio-Rad i drugi fluorescentni kvantitativni PCR instrumenti

Eksperimentalna metoda:
1. Uzmite 1 ml rastvora za obogaćivanje u sterilnu epruvetu za centrifugiranje od 1.5 ml, centrifugirajte na 1 10.000 o / min 5 minuta i odbacite supernatant; upotrijebite klasičnu metodu ekstrakcije fenol kloroforma da biste testirali ekstrahirani predložak ili ga čuvajte na 20 ° C dok se ne testira.
2. Stavite PCR reakcijsku otopinu na sobnu temperaturu da se uravnoteži, uzmite Taq enzim nakon topljenja i dodajte Taq enzim pri 2∪/epruveti, to jest, svaki reakcijski sistem za testiranje se priprema kao: PCR reakcijska otopina 22.5u1+0.4ulTaq enzim.
3. Dodajte šablon: Odmrznite ekstrakt nukleinske kiseline uskladišten na -20 ° C na sobnoj temperaturi i centrifugirajte na 13,000 o / min 5 minuta. Negativna i pozitivna kontrola se odmrzavaju na sobnoj temperaturi prije upotrebe. U svaku PCR reakcijsku epruvetu dodajte 2 ul šablona ili negativne i pozitivne kontrole obrađene u koraku 1, pokrijte epruvetu, stavite na PCR instrument i zabilježite odgovarajući broj uzorka.
4. Područje pojačanja i detekcije na vozilu: uslovi reakcije su 95C: 3 minute, 1 ciklus; 95C: 5sec, 60C: 40sec (akvizicija signala), 40 ciklusa. Reakcijski sistem je postavljen na 25u1.
Za višekanalni fluorescentni PCR instrument, signal je postavljen na Fam fluorescein.

Procjena rezultata:
Za detalje pogledajte priručnik.

Mjere opreza pri korištenju kompleta:
1. Ovaj komplet koristi se samo za in vitro testiranje i istraživačke svrhe. Molimo pažljivo pročitajte cijeli tekst ovog priručnika prije nego što ga počnete koristiti.
2. Eksperiment mora biti strogo podjeljen: područje za pripremu prije PCR-a pripremiti eksperimentalne reagense; područje obrade uzoraka-uzorci za testiranje, obrada šablona; područje detekcije-PCR amplifikacija, detekcija.
3. Za relevantne standarde upravljanja laboratorijima, pogledajte implementaciju standarda upravljanja laboratorijama za amplifikaciju gena koje su izdali relevantni nacionalni organi.

Ako želite da znate više, molimo kontaktirajte nas

    Zanimljiva pitanja: Listeria monocytogenes

    O listeriji

    Listeria definicija

    Listeria je fakultativna anaerobna bakterija koja je uzročnik listerioze. Listeria je gram-pozitivna bakterija koja pripada tipu debelih stijenki, nazvana po Josephu Listeru. Uglavnom koristi hranu kao vektor i jedan je od najsmrtonosnijih patogena prenosivih hranom.

    Listeria je sveprisutna u okolišu i može se naći u većini namirnica. Dokazano je da su meso, jaja, perad, plodovi mora, mliječni proizvodi, povrće itd. Izvori infekcije listerijom. Otrovanje listerijom monocitogenom može uzrokovati infekcije krvi i moždanog tkiva. Mnoge zemlje su poduzele mjere za suzbijanje Listeria monocytogenes u hrani i postavile su odgovarajuće standarde.

    Listeria izvori

    Listeriju je 1926. godine prvi put otkrio britanski naučnik južnoafričkog porijekla Murray u bolesnog zeca. U spomen na oca moderne hirurgije dezinfekcije, britanskog fiziologa Josepha Listera (1827-1912), 1940. godine, na 3. međunarodnom kongresu za mikrobiologiju nazvana je Listeria monocytogenes.

    Listeria vrsta

    Međunarodno priznata Listeria monocytogenes ima sljedećih sedam sojeva:
    Listeria monocytogenes, Listeria mutans, Listeria innocolus, Listeria welsii, Listeria sileeri, Listeria monocytogenes, Listeria monocytogenes. Među njima je L. monocytogenes jedini koji može uzrokovati bolesti ljudi. Uzročnik je zoonotskih bolesti. Teško trovanje može uzrokovati infekcije krvi i moždanog tkiva. Listeria monocytogenes se skraćeno naziva Listeria monocytogenes, koja je gram-pozitivna bakterija i pripada tipu debelih stijenki.

    Infekcija listerijom

    U rodu Listeria samo Listeria monocytogenes može uzrokovati bolesti poput meningitisa, sepse, pobačaja i neonatalne infekcije kod ljudi. Ako osoba s imunodeficijencijom razvije infekciju listerijom, bolest je ozbiljna i stopa smrtnosti je do 33%.

    Simptomi listerija

    Infekciju listerijom može pratiti groznica, bol u vratu, povraćanje ili proljev. Složeniji oblici također mogu uzrokovati encefalitis i specifične oblike meningitisa. Trudnice su također u riziku od zaraze listerijom. Trudnice imaju 20 puta veću vjerojatnost da će se zaraziti listerijom od drugih. Čak i ako nema pobačaja ili mrtvorođenog djeteta, novorođenče može imati ovu zaraznu bolest od rođenja, pa postoji vrlo visoka stopa smrtnosti.

    listeria monocytogenes

    Šta su listeria monocytogenes

    Listeria monocytogenes je uzročnik zoonotskih bolesti. Može uzrokovati listeriozu kod ljudi i životinja. Nakon infekcije, uglavnom se manifestira kao sepsa, meningitis i mononuklearne stanice. Budući da je bakterija unutarstanični parazit, njeno uklanjanje od strane domaćina uglavnom ovisi o staničnoj imunološkoj funkciji. Stoga se listerioza uglavnom javlja kod novorođenčadi, starijih osoba i imunokompromitiranih osoba. Listeria monocytogenes se uglavnom inficira putem izmeta, a može ući u tijelo i kroz oči te oštećenu kožu i sluznicu da izazove infekciju.

    Distribucija Listeria monocytogenes

    Listeria monocytogenes široko postoji u prirodi, nije ga lako zamrznuti i odmrznuti i može podnijeti veći osmotski pritisak. Bakterije su prisutne u tlu, površinskim vodama, kanalizaciji, otpadnim vodama, biljkama, silaži, trulom povrću, pa životinje mogu lako unijeti bakteriju.

    Put prenošenja Listeria monocytogenes

    Listeria monocytogenes uglavnom koristi hranu kao uzročnik infekcije. Jedan je od najsmrtonosnijih patogena koji se prenosi hranom, uzrokujući smrt 20 do 30% zaraženih ljudi. Stopa smrtnosti je čak veća od one kod salmonele i botoksa. Ljudi uglavnom jedu meki sir, podgrijanu piletinu, negrejane hrenovke, svježe mlijeko, pasterizirano mlijeko, sladoled, sirovi odrezak, janjeće kotlete, salatu od kupusa, celer, paradajz, francuske pite, smrznuti svinjski jezik itd. Oko 80% -90% slučajeva uzrokovano je kontaminiranom hranom.
    Bakterije mogu ući u tijelo kroz oči i oštećenu kožu i sluznicu te uzrokovati infekciju. Nakon infekcije, trudnice inficiraju fetus ili novorođenče kroz posteljicu ili rodni kanal. Bakterije koje naseljavaju rodnicu i grlić maternice također mogu uzrokovati infekcije. Seksualni kontakt je također mogući put prijenosa bolesti, a postoji i uzlazni trend.

    Listeria monocytogenes bolest

    Simptomi listerija monocitogena

    Da li će se Listeria monocytogenes razboljeti nakon ulaska u ljudsko tijelo, povezano je s virulentnošću bakterija, dobi i imunološkim statusom domaćina, jer je bakterija unutarstanična parazitska bakterija, a njezino uklanjanje uglavnom ovisi o staničnoj imunološkoj funkciji . Stoga su osjetljive osobe novorođenčad, trudnice i odrasli stariji od 40 godina. Osim toga, alkoholičari, osobe s oštećenim ili oštećenim imunološkim sistemom, pacijenti koji primaju imunosupresivne lijekove i kortikosteroide te transplantacije organa također su podložni bakterijskoj infekciji. Kliničke manifestacije bolesti, zdrave odrasle osobe imaju blage simptome slične gripi, novorođenčad, trudnice, pacijenti s imunodeficijencijom sa nedostatkom daha, povraćanjem, hemoragičnim osipom, gnojnim konjunktivitisom, groznicom, konvulzijama, komom, spontanim pobačajem, meningitisom, sepsom do smrt.

    Liječenje Listeria monocytogenes

    Penicilin, ampicilin, gentamicin, eritromicin itd. Mogu se koristiti za liječenje infekcije Listeria monocytogenes. Eritromicin i drugi antibiotici širokog spektra su alergični na penicilin.

    Prevencija listerija monocitogena

    Listeria monocytogenes može preživjeti normalnu termičku obradu, toplinska obrada ubila je konkurentnu bakterijsku zajednicu, pa je Listeria monocytogenes lako preživjeti u odsustvu konkurentnih uvjeta okoliša, pa u preradi hrane temperatura jezgre mora doseći 70 ° C duže od 2 minute. Listeria monocytogenes je široko rasprostranjena u prirodi, pa čak i ako je proizvod pregrijan i prerađen, Listeria monocytogenes je potpuno inaktiviran, ali može uzrokovati sekundarno zagađenje proizvoda, pa je nakon kuhanja spriječeno sekundarno zagađenje izuzetno važno. Budući da Listeria monocytogenes još uvijek može rasti i razmnožavati se na 4 ° C, nezagrijana hrana u hladnjaku povećava rizik od trovanja hranom, a hranu u hladnjaku potrebno je zagrijati prije konzumiranja.

    Listeria monocytogenes test

    1. Metoda bakterijske kulture

    Tradicionalna metoda ispitivanja Listerije u hrani je provesti prethodno obogaćivanje ili selektivno obogaćivanje te koristiti izolirane i uzgojene sumnjive kolonije za eksperimente biokemijske reakcije, eksperimente hemolize i kooperativne eksperimente hemolize (CAM P). Nakon što je Listeria monocytogenes dodatno serotipizirana. Obogaćivanje i selektivno obogaćivanje neophodni su koraci u ovoj metodi. Metode obogaćivanja uglavnom uključuju: metodu hladnog obogaćivanja i metodu uzgoja na normalnoj temperaturi. Metoda hladnog obogaćivanja uzgaja se na 4 ° C 30 dana, ponekad čak i do godinu dana. Na sobnoj temperaturi, bakterije je potrebno uzgajati 24 sata do 7 dana. Stoga je tradicionalnoj metodi otkrivanja potrebno 7-11 dana za izolaciju i identifikaciju Listeria monocytogenes, pa je period otkrivanja tradicionalne metode duži.

    2. Aglutinacija seruma

    Prema bakterijskim antigenima i flagelarnim antigenima, LM je podijeljen na 16 serotipova: 1/2a, 1/2b, 1/2c, 3a, 3b, 3c, 4a, 4ab, 4b, 4c, 4d, 4e, 5, 6a, 6b , 7. Struktura antigena nema nikakve veze sa virulencijom. Glavni patogeni faktori za ljude su serotipovi 1/2a, 1/2b i 4b, koji čine oko 90% globalnih slučajeva ove bolesti.

    3. Metode ispitivanja molekularne biologije

    3 .1 Tehnologija detekcije sonde
    Ova tehnologija je najraniji molekularni organizam koji se koristi za otkrivanje listerija
    Naučite tehnologiju. Još 1988. Atin i dr. klonirao i sekvencirao 500bp DNA fragment gena Listeria beta-hemolizina, te sintetizirao četiri oligonukleotidne sonde iz ove sekvence, označio sondu sa 32P i izveo eksperiment tačkaste hibridizacije Potvrđeno je da je sonda reagirala samo sa Listeria monocytogenes, i bio je negativan s drugim vrstama listerija i bakterijama drugih rodova, pokazujući dobru specifičnost.

    3.2 Tehnologija detekcije polimerazne lančane reakcije (PCR)
    Razvoj PCR -a je prilično zreo i naširoko se koristi u otkrivanju listerija. Prajmeri specifični za amplifikaciju PCR -a dizajnirani su na osnovu specifične genske sekvence virulencije Listeria monocytogenes, a jedna je zasnovana na specifičnoj sekvenci u genomu Listeria monocytogenes. Uobičajeno korištene ciljne sekvence su geni virulencije poput hly A, iap, inl, Dth-18. Prednost korištenja PCR metode za otkrivanje Listerije je specifičnost metode, ali nedostatak je niska osjetljivost; kultura uzorka se pojačava nakon hemijske ekstrakcije, što poboljšava stopu detekcije uzorka; i može li se "živa, neobradiva" Listeria monocytogenes nije mogla otkriti tradicionalnim metodama obogaćivanja.

    Recent Posts

    © autorska prava 2020 - BALLYA rezervirano.
    kovertatelefonmap-marker LinkedIn facebook Pinterest youtube RSS cvrkut Instagram facebook-prazno rss-prazno linkedin-white Pinterest youtube cvrkut Instagram