Brza navigacija
Postoji velika razlika između monoklonska i poliklonska antitijela. Monoklonska antitijela su veoma ujednačene antitela koje proizvodi jedan klon B stanica i ciljaju samo na određeni epitop. Tehnologija hibridomskih antitijela zasnovana je na tehnologiji fuzije ćelija, koja kombinuje senzibilisane B ćelije i ćelije mijeloma sa besmrtnom sposobnošću reprodukcije u tumor hibrida B ćelija.
Jedna ćelija hibridoma s ovom karakteristikom koristi se za uzgoj stanične populacije za pripremu specifičnog antitijela protiv epitopa, odnosno monoklonsko antitelo.
Razvoj monoklonska antitela prošao je četiri faze, i to:
Mišja monoklonska antitijela, himerna antitela, humanizirano monoklonsko antitijelo i potpuno ljudska monoklonska antitijela.
Potpuno ljudski monoklonska antitela: Varijabilna regija i konstantna regija antitijela su ljudskog porijekla, eliminišući imunogenost i toksične nuspojave.
Srodne tehnologije za pripremu potpuno ljudskih antitijela uglavnom uključuju:
Tehnologija humanog hibridoma, tehnologija B limfocita EBV transformacije, tehnologija prikaza faga, tehnologija pripreme transgenih mišjih antitijela i tehnologija pripreme antitijela pojedinačnih B stanica.
Humanizirano i potpuno humanizovana antitela lijekovi pripremljeni od humaniziranih i potpuno humaniziranih antitijela prevladavaju različite nedostatke antitijela životinjskog porijekla i himerna antitijela zbog njihovog visokog afiniteta, visoke specifičnosti i niskih toksičnih i nuspojava. To je postao neizbježan trend u razvoju terapijskih lijekova za antitijela.
Pozitivne jažice koje su testirane na antitijela mogu se uzgajati i klonirati kako bi se dobila monoklonska antitijela koja luče potomci jedne ćelije. Općenito govoreći, što je prije vrijeme kloniranja, to bolje. Budući da u tom razdoblju različite ćelije hibridoma istovremeno snažno rastu, natječući se za prehranu i prostor, a stanice koje proizvode navedena antitijela mogu biti potopljene i eliminirane.
Međutim, vrijeme kloniranja ne smije biti prerano, inače su ćelijske osobine nestabilne, a broj ćelija je mali i lako se gubi. Klonirane pozitivne ćelije hibridoma, nakon određenog perioda kulture, također će izgubiti sposobnost stvaranja antitijela zbog mutacija stanica ili gubitka specifičnih kromosoma, pa ih je potrebno klonirati iznova i iznova. Broj kloniranja je određen sposobnošću lučenja i imunitetom antigeni. Općenito govoreći, broj klonova jakog imunološkog antigena može biti manji, ali barem 3 do 5 klonova mogu ga učiniti stabilnim. Postoje mnoge metode kloniranja, uključujući metodu ograničavajućeg razrjeđivanja, metodu mikromanipulacije, metodu ploča s mekim agarima i metodu razdvajanja aktivacijom fluorescencije.
Od pojave monoklonska antitela, primijenjene su u mnogim područjima medicine zbog svojih jedinstvenih karakteristika.
Antigeni obično se sastoje od više antigenskih determinanti. Jedna vrsta antigenske determinante stimulira tijelo, a antitelo koju proizvodi B limfocit koji prima stimulaciju antigena naziva se monoklonsko antitijelo. Tijelo se stimulira s više antigenskih odrednica, pa se u skladu s tim proizvode različita monoklonska antitijela. Ova monoklonska antitijela se miješaju kako bi nastala poliklonalno antitijelo.
Molekularna struktura antigena koja može uzrokovati da tijelo proizvodi antitijela naziva se epitop. Na antigenu može biti nekoliko različitih antigenih determinanti, tako da tijelo proizvodi nekoliko različitih antitijela, a konačna antitijela su plazma ćelije. Populacija plazma ćelija koja djeluje samo na jednu antigensku odrednicu je klon. Specifično antitijelo koje proizvodi klon naziva se monoklonsko antitijelo. Monoklonska antitijela mogu se posebno vezati za jednu specifičnu antigensku odrednicu, baš kao što projektil precizno pogađa cilj. S druge strane, čak i ako se radi o istoj antigenskoj odrednici, nekoliko klonova može proizvesti antitijela u tijelu, tvoreći mješavinu nekoliko monoklonskih antitijela, tzv. poliklonski antitela.
Antigeni obično se sastoji od više epitopa. Jedna vrsta epitopa stimulira tijelo. Antitijelo koje proizvodi B limfocit primajući antigen naziva se monoklonsko antitijelo. Tijelo se stimulira raznim antigenim odrednicama, pa se u skladu s tim proizvode različita monoklonska antitijela. Ova monoklonska antitijela se miješaju kako bi nastala poliklonska antitijela. Osim različitih antigenskih determinanti, ista vrsta epitopa također može potaknuti tijelo na proizvodnju pet vrsta antitijela: IgG, IgM, IgA, IgE i IgD.
Poliklonska antitijela su grupa imunoglobulinas izlučuju tjelesne plazma ćelije stimulirane heterolognim antigenima (makromolekularni antigeni, haptenski konjugati). Poliklonska antitijela se široko koriste u istraživanju i dijagnostici zbog svoje sposobnosti da prepoznaju više epitopa i izazovu reakcije taloženja uz kratko vrijeme pripreme i niske troškove.
Dobar poliklonski antiserum sadrži više antitijela protiv različitih epitopa određenog antigena. Budući da poliklonski antiserum obično sadrži antitijela protiv različitih epitopa određenog antigena, uključujući epitope rezistentne na denaturirane tvari, to će također imati učinak u duboko fiksiranim uzorcima. Za bojenje presjeka tkiva ugrađenih parafinom često se koriste poliklonska antitijela. U skladu s različitim potrebama eksperimenta, poliklonska antitijela se koriste za označavanje odgovarajućeg antigena.
Osim toga, u poljoprivrednoj proizvodnji, poliklonalno antitijelo koristi se za nadzor ostataka pesticida na licu mjesta; u kliničkim primjenama poliklonska antitijela se uglavnom koriste za otkrivanje patogena, dijagnosticiranje i liječenje bolesti, poput imunosupresiva proteina za odgovor na transplantaciju i liječenje autoimunih bolesti.
Kloniranje: odnosi se na aseksualno reproduciranu staničnu liniju, koja je skup staničnih linija nastalih podjelom i reprodukcijom jedne ćelije progenitorice. Kod svih članova ove porodice, ako ne dođe do mutacije, geni su potpuno isti.
Poliklonalno antitijelo (pAb): Imunirajte životinje s antigenom koji sadrži više epitopa, koji može stimulirati više klonova B stanica da proizvode različita antitijela protiv više epitopa. Dobiveni imunološki serum zapravo je mješavina više antitijela.
Monoklonska antitijela (mAb): Homologna antitijela koja proizvode klon B stanica koje prepoznaju epitop. Vrlo ujednačena, jaka specifičnost, visok titar, mala ili nikakva unakrsna reaktivnost.
Razlike u pripremi monoklonskih antitijela:
B limfociti tretirani specifičnim antigenima i stanice mijeloma spojeni su za dobivanje ćelija hibridoma. Nakon pregleda pomoću medija HAT i otkrivanja titar ELISA -om se dobiva pozitivan klon, a zatim se vrši kultura ćelija ili ubrizgavaju stanice u trbušnu šupljinu životinja (obično miševi sa balb/c) i uzgajaju ih ascitesom, sakupljaju supernatant/ascites i pročišćavaju ih kako bi se dobila monoklonska antitijela .
Priprema poliklonalno antitijelo nije tako glomazno kao monoklonska antitijela. Potrebno je samo ubrizgati antigen (što je veća čistoća, to bolje) izravno u tijelo životinje radi imunizacije. Nakon 3 do 4 imunizacije, titar se kvalificira ELISA -om, a krv se centrifugira. Supernatant se može pročistiti kako bi se dobila poliklonska antitijela. Stoga je ciklus pripreme poliklonskih antitijela kraći od onog monoklonskih antitijela, a početna cijena preparata je niža od one monoklonskih antitijela.
O. Monoklonalno antitijelo
prednosti:
Odličan afinitet i pročišćavanje:
B. Poliklonalno antitijelo
prednosti:
nedostaci:
karakteristike | Monoklonsko antitelo | Poliklonalno antitijelo | |
---|---|---|---|
1 | Specifičnost | jak | Slabo |
2 | stabilnost | Relativno siromašan, osjetljiv na fizičke i hemijske uslove | Dobar |
3 | Zahtevi za imunogene | Nečisti imunogeni također mogu proizvesti visoko pročišćena antitijela | Potrebna je visoka čistoća imunogena |
4 | standardizacija | Lako za standardizaciju, mala razlika između serija | Teško, velika razlika između serija |
5 | prepoznavanje | Na antigenu je otkriven samo jedan epitop | Može prepoznati više epitopa |
6 | Unakrsna reakcija | nije lako unakrsno reagirati s drugim proteinima | uobičajene i teško izbjegljive nespecifične reakcije |
7 | Taloženje i aglutinacija | Većina ne | zajednički |
8 | Troškovi proizvodnje | visok | nizak |
9 | Pripremni period | dugačak | kratak |
10 | Cijena | visok | nizak |
Jaz između monoklonska i poliklonska antitijela je ogromna, a ove razlike ih čine korisnima u različitim područjima. Monoklonska antitijela zauzimaju vitalno mjesto u medicini, dok su poliklonalni antitela zablistati u poljima poljoprivredne proizvodnje, otkrivanja i liječenja bolesti.
reference