Enterobacter sakazakii fluorescentni PCR test u realnom vremenu

salmonela

Fluorescentna PCR u realnom vremenu in vitro detekcija enterobacter sakazakii.

Specifikacija: 96 T / kutija
Komplet se čuva na 2 - 8 ℃.
Period važenja je 12 meseci.
Specifikacija: 96 T / kutija

koristi: Fluorescentna PCR u realnom vremenu in vitro detekcija enterobacter sakazakii.

Princip otkrivanja: Komplet sadrži prajmere specifične za enterobacter sakazakii. Kad uzorak sadrži enterobacter sakazakii, enterobacter sakazakii DNA ekstrahirana nakon prethodnog obogaćivanja eksponencijalno se pojačava PCR-om. Tokom reakcije, fluorescentna sonda specifična za enterobacter sakazakii hibridizira se sa ciljnom nukleinskom kiselinom i istovremeno aktivira enzimsku hidrolizu kako bi odvojila fluorescentnu grupu od grupe za gašenje na sondi: tako da se prisustvo enterobacter sakazakii u stvarnom vremenu može procijeniti pomoću prirast fluorescencije.

Proizvod i sastav:
Sastav (96T/kit)specifikacijaKoličina
Rastvor za ekstrakciju DNK3ml1 cijev
PCR reakcioni rastvor Enterobacter sakazakii1100ul1 cijev
Enzim iz slavine (5U/ul)20ul1 cijev
Enterobacter sakazakii pozitivna kontrola40ul1 cijev
Enterobacter sakazakii Negativna kontrola0.5ml1 cijev
Uputstvo za upotrebu1
Uslovi skladištenja i rok trajanja kompleta:
1. Komplet se čuva na 2 -8 ℃.
2. Period važenja je 12 mjeseci.

Primjenjivi instrumenti:
Dostupni su ABI7500, 9600 serija, MJ opticon2, Bio-Rad i drugi fluorescentni kvantitativni PCR instrumenti

Eksperimentalna metoda:
1. Uzmite 1 ml rastvora za obogaćivanje u sterilnu epruvetu za centrifugiranje od 1.5 ml, centrifugirajte na 1 10.000 o / min 5 minuta i odbacite supernatant; upotrijebite klasičnu metodu ekstrakcije fenol kloroforma da biste testirali ekstrahirani predložak ili ga čuvajte na 20 ° C dok se ne testira.
2. Stavite PCR reakcijsku otopinu na sobnu temperaturu da se uravnoteži, uzmite Taq enzim nakon topljenja i dodajte Taq enzim pri 2∪/epruveti, to jest, svaki reakcijski sistem za testiranje se priprema kao: PCR reakcijska otopina 22.5u1+0.4ulTaq enzim.
3. Dodajte šablon: Odmrznite ekstrakt nukleinske kiseline uskladišten na -20 ° C na sobnoj temperaturi i centrifugirajte na 13,000 o / min 5 minuta. Negativna i pozitivna kontrola se odmrzavaju na sobnoj temperaturi prije upotrebe. U svaku PCR reakcijsku epruvetu dodajte 2 ul šablona ili negativne i pozitivne kontrole obrađene u koraku 1, pokrijte epruvetu, stavite na PCR instrument i zabilježite odgovarajući broj uzorka.
4. Područje pojačanja i detekcije na vozilu: uslovi reakcije su 95C: 3 minute, 1 ciklus; 95C: 5sec, 60C: 40sec (akvizicija signala), 40 ciklusa. Reakcijski sistem je postavljen na 25u1.
Za višekanalni fluorescentni PCR instrument, signal je postavljen na Fam fluorescein.

Procjena rezultata:
Za detalje pogledajte priručnik.

Mjere opreza pri korištenju kompleta:
1. Ovaj komplet koristi se samo za in vitro testiranje i istraživačke svrhe. Molimo pažljivo pročitajte cijeli tekst ovog priručnika prije nego što ga počnete koristiti.
2. Eksperiment mora biti strogo podjeljen: područje za pripremu prije PCR-a pripremiti eksperimentalne reagense; područje obrade uzoraka-uzorci za testiranje, obrada šablona; područje detekcije-PCR amplifikacija, detekcija.
3. Za relevantne standarde upravljanja laboratorijima, pogledajte implementaciju standarda upravljanja laboratorijama za amplifikaciju gena koje su izdali relevantni nacionalni organi.

Ako želite da znate više, molimo kontaktirajte nas

    Zanimljiva pitanja: Enterobacter sakazakii

    O enterobacter sakazakii

    Šta je enterobacter sakazakii

    Enterobacter sakazakii (ES) je gram-negativan non-Bacillus parazit u crijevima ljudi i životinja, koji pripada porodici Enterobacteriaceae. U određenim uvjetima mogu uzrokovati bolesti ljudi i životinja, pa se nazivaju uslovnim patogenima.

    Opasnosti od enterobacter sakazakii

    Enterobacter sakazakii može uzrokovati teški neonatalni meningitis, enterokolitis, bakteremiju i neurološku disfunkciju. Godine 1961. Ujedinjeno Kraljevstvo je prvi put prijavilo dva slučaja meningitisa uzrokovanog Enterobacter sakazakii. Kasnije su Sjedinjene Države, Holandija, Kanada i druge zemlje sukcesivno prijavljivale neonatalne infekcije Enterobacter sakazakii. Dojenčad zaražena Enterobacter sakazakii ima smrtnost čak 20%-50%, a preživjela dojenčad i mala djeca također mogu imati ozbiljne neurološke posljedice.

    Enterobacter sakazakii bolest

    1961., dva naučnika, Urmenyi i Franklin iz Velike Britanije, prvi put su izvijestili o dva slučaja meningitisa uzrokovanog bakterijom, nakon čega slijede meningitis, septikemija i nekrotiziranje debelog crijeva tankog crijeva uzrokovano Enterobacter sakazakii u nizu svjetskih izvještaja.

    Infekcija enterobacter sakazakii u novorođenčadi

    U svijetu su se jedan za drugim pojavljivali slučajevi sporadičnih i izbijanja meningitisa, septikemije i nekrotizirajućeg kolitisa uzrokovanih Enterobacter sakazakii kod dojenčadi i nedonoščadi. Nekoliko je studija pokazalo da je adaptirano mlijeko trenutno glavni kanal infekcije za koje se utvrdi da uzrokuje meningitis, sepsu i nekrotizirajući kolitis kod dojenčadi i nedonoščadi. U nekim slučajevima smrtnost uzrokovana bolešću uzrokovanom Enterobacter sakazakii može doseći 40%~ 80%. Enterobacter sakazakii privukao je pažnju relevantnih odjela u mnogim zemljama svijeta.

    Simptomi enterobacter sakazakii

    Većina djece ima blage i atipične kliničke simptome i lako se zanemaruju. Teški slučajevi mogu uzrokovati nekrotizirajući enterokolitis, sepsu i meningitis.
    (1) Simptomi sistema: Groznica. Novorođenčad može pokazati znakove hipotermije, mentalne depresije, odbacivanja mlijeka, povećanu žuticu, sijedi ten, perutavu kožu, pa čak i šok.
    (B) Simptomi probavnog sistema: povraćanje, nadutost trbuha, proljev, krvava stolica sluzi, zvukovi crijeva slabe ili čak nestaju, u teškim slučajevima može doći do perforacije crijeva i peritonitisa.
    (3) Simptomi nervnog sistema: razdražljivost, oštar plač, pospanost, pa čak i koma, mogu se pojaviti pogledi, konvulzije, fizički pregled može uključivati ​​povećani opseg glave, podijeljenu kraniotomiju, povećanu napetost bregme i pozitivne znakove iritacije meninge.

    Liječenje enterobacter sakazakii

    (1) Blage slučajeve treba pojačati i liječiti simptomatski kako bi se osigurao unos tekućine i elektrolita, te obratiti pažnju na praćenje.
    (2) Oni koji imaju očite crijevne simptome trebaju izabrati antibakterijske lijekove. Amoksicilin/klavulanska kiselina i drugi antibakterijski lijekovi mogu se odabrati i prilagoditi prema rezultatima testova osjetljivosti na lijekove. Sredstva za zaštitu sluznice crijeva i mikroekološka sredstva mogu se koristiti istovremeno.
    (3) U teškim slučajevima, ceftazidim, cefepim, melopenem itd. Mogu se koristiti za antibakterijsko liječenje i prilagoditi prema učinku kliničkog liječenja i rezultatima testa osjetljivosti na lijekove. Treba pojačati liječenje simptomatske podrške; djeca s nekrotizirajućim enterokolitisom trebaju gladovati, gastrointestinalnu dekompresiju treba dati onima sa teškim nadutošću trbuha, a ako je potrebno i kirurški tretman; djeci s meningitisom treba dati sedaciju, smanjenje anksioznosti, smanjenje intrakranijalnog tlaka i komplikacije; dati tretman protiv šoka na vreme kada dođe do šoka.

    Kako se prenosi enterobacter sakazakii?

    Enterobacter sakazakii je Enterobacteriaceae, gram-negativni bacili. Enterobacter sakazakii široko je rasprostranjen u prirodi i brzo se razmnožava, ali nije otporan na toplinu i može se ubiti pasterizacijom. Enterobacter sakazakii je uslovno patogena bakterija. U normalnim okolnostima ne nanosi štetu ljudskom zdravlju, ali može uzrokovati bolesti kod osoba s niskim imunitetom i dojenčadi, novorođenčadi, osobito nedonoščadi i dojenčadi male porođajne težine.

    Enterobacter sakazakii uobičajeni izvori hrane

    Hrana i okoliš glavni su izvori kontaminacije E. sakazakii. Naučnici su izolovali enterobacter sakazakii iz raznih namirnica i pića. Različite sirovine ove hrane i pića, poput mlijeka u prahu, mesnih prerađevina, proizvoda od soje, kruha itd., Mogu biti zaražene enterobacter sakazakii, što rezultira otkrivanjem bakterija u konačnom proizvodu. Među njima, mlijeko u prahu za dojenčad naziva se najčešćim i najosjetljivijim izvorom hrane enterobacter sakazakii.

    Enterobacter sakazakii u formuli za dojenčad u prahu

    Enterobacter sakazakii je stvorenje koje postoji u okolini i obično se nalazi u objektima i kućnom okruženju gdje se proizvodi mliječna formula za dojenčad. Iako adaptirano mlijeko za dojenčad nije sterilni proizvod i može biti kontaminirano patogenima koji mogu uzrokovati ozbiljne bolesti, ako se mlijeko za dojenčad pravilno pripremi i skladišti, rizik od infekcije bakterijom Enterobacter sakazakii može se značajno smanjiti. Da biste sigurno pripremili dječju formulu, prvo morate očistiti i sterilizirati opremu za hranjenje i pripremu.

    Enterobacter sakazakii prevencija

    Za kontaminaciju Enterobacter sakazakii u dječjoj hrani, kontaminaciju bakterija treba kontrolirati iz izvora, materijala za preradu i pakiranje hrane za dojenčad. Prije svega, trebali bismo pojačati sprečavanje zagađenja i kontrolu sastojaka hrane za odojčad i malu djecu. Treba provesti strogu dezinfekciju i inspekciju sirovina. Kontaminirane sirovine treba na vrijeme preraditi. Ne ulazite u proizvodnu radionicu kako biste izbjegli zagađenje drugih sirovina.

    Drugo, strogo sterilizirajte sve karike u procesu obrade, kao što su usta operatera, ruke, stopala, glava, cipele, radna odjeća, kape itd., Moraju se obavljati higijenski. U isto vrijeme, bakterije se potpuno ubijaju pasterizacijom, sterilizacijom na ultra visokim temperaturama ili drugim visokotemperaturnim procesima tijekom obrade.

    Da bi se spriječila kontaminacija bakterijom E. sakazakii, također bi trebalo uspostaviti efikasnu analizu opasnosti i sistem kontrole kvaliteta kritičnih kontrolnih tačaka i strogo ih primjenjivati ​​tokom proizvodnog procesa. Osim toga, materijale za pakiranje treba učinkovito dezinficirati, a cijelo radno okruženje za proizvodnju i pakiranje treba redovno dezinficirati.

    Osim toga, pri hranjenju odojčadi i male djece, budući da postoji i rizik od infekcije Enterobacter sakazakii u porodici, preporučuje se da se bočice i drugi pribor za hranjenje mlijeka u prahu temeljito očiste i dezinficiraju. Osim toga, dojenje je također jedno od efikasnih sredstava za smanjenje rizika od neonatalne infekcije bakterijom E. sakazakii.

    Biohemijska identifikacija enterobacter sakazakii

    Tradicionalne metode pregleda

    Tradicionalna metoda odvajanja i otkrivanja Enterobacter sakazakii ovisi o biokemijskim i morfološkim karakteristikama. Međunarodno, "Odvajanje i brojanje Enterobacter sakazakii u mliječnoj formuli za dojenčad" koje je objavila američka FDA obično se koristi kao klasična metoda.

    Masena spektrometrija s ionizacijom pomoću laserske desorpcije pomoću matrice

    Metoda masene spektrometrije s ionizacijom s laserskom desorpcijom uz pomoć matrice (MAL-DITOF-MS) metoda je pomiješati uzorak koji se mjeri s otopinom matrice u određenom omjeru i upotrijebiti pulsirajuće lasersko zračenje kako bi se pobudila matrica polimer za stvaranje molekularnih iona i polimerizacija molekularnih iona Tijelo se ubrzava i detektira u masenom spektrometru za vrijeme leta. Kao rezultat toga, izmjereni polimer se odvaja prema masenom broju, obrađuje u maseni spektar, analizira i uspoređuje pomoću softvera za skrining i određivanje spektra specifičnosti (otisaka prstiju) kako bi se postigla diferencijacija i identifikacija ciljnih vrsta ili sojeva mikroorganizama.

    Metode ispitivanja molekularne biologije

    Trenutno, molekularno-biološke metode ispitivanja E. sakazakii koje se koriste u mliječnim proizvodima uključuju običnu PCR metodu (metoda elektroforeze), metodu konstantne amplifikacije posredovane DNK petljom (LAMP) i fluorescentnu PCR metodu. Ova metoda prevladava nedostatke tradicionalnih metoda inspekcije, poput glomaznog rada, dugotrajnog rada i teško uočljivih rezultata. To je također dovelo do brzog razvoja metoda brze detekcije za Enterobacter sakazakii. Međutim, ova metoda ima i nedostatke: visoka koncentracija bakterija koje se mjere u uzorku, visoki troškovi analize, glomazan rad i nemogućnost identifikacije prisutnosti živih bakterija.

    Recent Posts

    © autorska prava 2020 - BALLYA rezervirano.
    kovertatelefonmap-marker LinkedIn facebook Pinterest youtube RSS cvrkut Instagram facebook-prazno rss-prazno linkedin-white Pinterest youtube cvrkut Instagram