E-coli fluorescentni PCR test u stvarnom vremenu

salmonela

Fluorescentna PCR u realnom vremenu in vitro detekcija E coli.

Specifikacija: 96 T / kutija
Komplet se čuva na 2 - 8 ℃.
Period važenja je 12 meseci.
Specifikacija: 96 T / kutija

koristi: Fluorescentna PCR u realnom vremenu in vitro detekcija e coli.

Princip otkrivanja: Komplet sadrži prajmere specifične za e coli. Kada uzorak sadrži e coli, DNK e coli ekstrahovana nakon prethodnog obogaćivanja eksponencijalno se pojačava PCR-om. Tokom reakcije, fluorescentna sonda specifična za e coli hibridizira se sa ciljnom nukleinskom kiselinom i istovremeno je Taq enzimska hidroliza kako bi se fluorescentna grupa odvojila od grupe za gašenje na sondi: tako da se prisutnost e coli može procijeniti u stvarnom vremenu prema prirast fluorescencije.

Proizvod i sastav:
Sastav (96T/kit)specifikacijaKoličina
Rastvor za ekstrakciju DNK3ml1 cijev
PCR reakcija E coli PCR1100ul1 cijev
Enzim iz slavine (5U/ul)20ul1 cijev
Pozitivna kontrola e coli40ul1 cijev
E coli Negativna kontrola0.5ml1 cijev
Uputstvo za upotrebu1
Uslovi skladištenja i rok trajanja kompleta:
1. Komplet se čuva na 2 - 8 ℃.
2. Period važenja je 12 mjeseci.

Primjenjivi instrumenti:
Dostupni su ABI7500, 9600 serija, MJ opticon2, Bio-Rad i drugi fluorescentni kvantitativni PCR instrumenti

Eksperimentalna metoda:
1. Uzmite 1 ml rastvora za obogaćivanje u sterilnu epruvetu za centrifugiranje od 1.5 ml, centrifugirajte na 1 10.000 o / min 5 minuta i odbacite supernatant; upotrijebite klasičnu metodu ekstrakcije fenol kloroforma da biste testirali ekstrahirani predložak ili ga čuvajte na 20 ° C dok se ne testira.
2. Stavite PCR reakcijsku otopinu na sobnu temperaturu da se uravnoteži, uzmite Taq enzim nakon topljenja i dodajte Taq enzim pri 2∪/epruveti, to jest, svaki reakcijski sistem za testiranje se priprema kao: PCR reakcijska otopina 22.5u1+0.4ulTaq enzim.
3. Dodajte šablon: Odmrznite ekstrakt nukleinske kiseline uskladišten na -20 ° C na sobnoj temperaturi i centrifugirajte na 13,000 o / min 5 minuta. Negativna i pozitivna kontrola se odmrzavaju na sobnoj temperaturi prije upotrebe. U svaku PCR reakcijsku epruvetu dodajte 2 ul šablona ili negativne i pozitivne kontrole obrađene u koraku 1, pokrijte epruvetu, stavite na PCR instrument i zabilježite odgovarajući broj uzorka.
4. Područje pojačanja i detekcije na vozilu: uslovi reakcije su 95C: 3 minute, 1 ciklus; 95C: 5sec, 60C: 40sec (akvizicija signala), 40 ciklusa. Reakcijski sistem je postavljen na 25u1.
Za višekanalni fluorescentni PCR instrument, signal je postavljen na Fam fluorescein.

Procjena rezultata:
Za detalje pogledajte priručnik.

Mjere opreza pri korištenju kompleta:
1. Ovaj komplet koristi se samo za in vitro testiranje i istraživačke svrhe. Molimo pažljivo pročitajte cijeli tekst ovog priručnika prije nego što ga počnete koristiti.
2. Eksperiment mora biti strogo podjeljen: područje za pripremu prije PCR-a pripremiti eksperimentalne reagense; područje obrade uzoraka-uzorci za testiranje, obrada šablona; područje detekcije-PCR amplifikacija, detekcija.
3. Za relevantne standarde upravljanja laboratorijima, pogledajte implementaciju standarda upravljanja laboratorijama za amplifikaciju gena koje su izdali relevantni nacionalni organi.

Ako želite da znate više, molimo kontaktirajte nas

    Zanimljiva pitanja: E coli

    O e coli

    E coli, također poznat kao Escherichia coli, Escherich je otkrio 1885. Escherichia coli je uvjetno patogena bakterija. Pod određenim uvjetima može izazvati gastrointestinalne infekcije ili infekcije urinarnog trakta različitih tkiva i organa kod ljudi i različitih životinja.

    Veličina e coli

    Veličina je 0.5 × 1 ~ 3 mikrona. Chow flagella, može se kretati bez du spora. Može fermentirati različite šećere za proizvodnju kiseline i plina. To je normalna rezistentna bakterija u crijevima ljudi i životinja. On ulazi u crijeva s dojenčadi nakon rođenja, a ljudi ga prate doživotno, što čini gotovo 1/3 suhe težine izmeta.

    Oblik e coli

    E coli je Brevibacterium, sa tupim zaobljenim krajevima i gram -negativnim. Ponekad se, zbog različitih okruženja, čini da su pojedine ćelije sferične ili nalik nitima; E. coli su uglavnom pojedinačne ili dvije, ali neće biti raspoređene u obliku dugog lanca; većina sojeva E. coli ima strukturu kapsula ili mikrokapsula, ali ne može formirati spore; većina sojeva E. coli uzgaja fimbrije, od kojih su neke fimbrije specifične za domaćina koje imaju adheziju za domaćina i neka druga tkiva ili ćelije.

    Klasifikacija e coli

    Patogeni učinak
    Trenutno međunarodno priznata klasifikacija uglavnom uključuje šest vrsta E. coli, i to crijevno patogene E. coli (EPEC), intestinalnu toksigenu E. coli (ETEC) i crijevnu invaziju koja može uzrokovati gastrointestinalne infekcije. E coli (EIEC), crijevna hemoragična E coli (EHEC), crijevna agregatna E coli (EAEC) i crijevni toksini slični Shigi koji su pronađeni posljednjih godina također imaju određene invazivne E coli (ESIES) Osim toga, postoje patogene e coli u uretri ( UPEC) koji može uzrokovati infekciju urinarnog trakta, i novoimenovani crijevni aglomerativni adheziv E. coli (EAggEC).

    Hemolitički
    Prema sposobnosti E. coli da proizvodi hemolizin i sposobnosti hemolize, E. coli se može podijeliti u dvije kategorije: hemolitička E. coli i nehemolitička E. coli.

    Enterotoksigeni
    Prema sposobnosti E coli da proizvodi enterotoksin tokom procesa infekcije, E coli se može podijeliti u dvije kategorije: enterotoksične E coli i neentotoksinogene E. coli. Enterotoksična E. coli važan je uzročnik svake infektivne proljeva kod ljudi i različitih životinja. Identifikacija enterotoksigenske E. coli uglavnom se određuje tip enterotoksina koji luči izolirana E. coli. Osim toga, prema sposobnosti E. coli da proizvodi enterotoksin, u kombinaciji sa osjetljivošću na različite enterotoksine, E coli se može klasificirati kao tip enterotoksina.

    Infekcija e coli

    E. coli je normalna rezistentna bakterija u crijevima životinja, a mali dio njih izaziva bolest pod određenim uvjetima. Serotipovi E. coli mogu uzrokovati gastrointestinalne infekcije kod ljudi ili životinja, uglavnom uzrokovane specifičnim antigenima fimbrije, patogenim toksinima i drugim infekcijama. Osim gastrointestinalnih infekcija, mogu uzrokovati i urinarne infekcije, artritis i meninge. Upala i septičke infekcije.
    Escherichia coli uključuje nekoliko bakterijskih skupina različite patogenosti. Infekcije humane E. coli grubo su podijeljene u dvije vrste: crijevne infekcije i ekstraintestinalne infekcije.

    Simptomi e coli

    Najtipičniji simptom crijevne infekcije može biti proljev. Ako je infekcija teška, može doći do šoka, krvnog tlaka i srčanog ritma. Ako se radi o crijevnoj infekciji, nakon infekcije bakterijom E. coli mogu se javiti mučnina, povraćanje, groznica, učestalost mokrenja i hitnost.

    E coli patogen

    Općenito, E. coli je podijeljena u četiri bakterijske grupe prema patogenosti za ljude: uobičajena E. coli, enteropatogena E. coli, enterotoksična E. coli i invazivna E. coli. Posljednje tri su patogene bakterije koje uzrokuju proljev.

    Patogeneza e coli

    Svaka flora uključuje određeni broj serotipova. Enterotoksična Escherichia coli može proizvesti enterotoksin otporan na toplinu i enterotoksin otporan na toplinu. Proizvodnju ova dva enterotoksina genetski kontroliraju plazmidi. Plazmid je vrsta nehromosomske DNK koja se može lako prenijeti. Uzajamni prijenos plazmida može omogućiti sojevima koji ne stvaraju toksine da dobiju sposobnost stvaranja toksina. Zbog isporuke plazmida, Escherichia coli bilo kojeg serotipa može proizvesti enterotoksin i faktor kolonije, pa ima patogenost.

    Liječenje e coli

    Prvo, ako simptomi infekcije nisu jako ozbiljni, a proljev i bol u trbuhu su blagi, oralna primjena bifidobakterija može poboljšati gastrointestinalnu disfunkciju i regulirati poremećaje crijevne mikroflore.
    Ako su bolovi u trbuhu i proljev ozbiljni i ima vodenastu stolicu, razmislite o davanju protuupalnog lijeka, poput kinolonskih antibiotika ili berberina, te odgovarajućoj zamjeni tekućine za poboljšanje simptoma dehidracije.

    Odakle dolazi e coli

    Escherichia coli jedan je od najčešćih mikroorganizama, široko rasprostranjenih u prirodi, od kojih većina nije patogena, uglavnom parazitska u crijevima ljudi ili životinja, a ljudi ih nazivaju "normalnom florom".

    E coli prijenos

    Glavni izvor infekcije humane E. coli bolesti je da se veliki broj patogena E. coli izlučuje fecesom pacijenata sa gastrointestinalnom infekcijom. Put prenošenja E. coli među ljudima uglavnom je putem fekalno-oralnog prijenosa, što pod određenim uvjetima može uzrokovati širenje ili epidemiju E. coli.

    Enterobacter sakazakii u formuli za dojenčad u prahu

    Enterobacter sakazakii je stvorenje koje postoji u okolini i obično se nalazi u objektima i kućnom okruženju gdje se proizvodi mliječna formula za dojenčad. Iako adaptirano mlijeko za dojenčad nije sterilni proizvod i može biti kontaminirano patogenima koji mogu uzrokovati ozbiljne bolesti, ako se mlijeko za dojenčad pravilno pripremi i skladišti, rizik od infekcije bakterijom Enterobacter sakazakii može se značajno smanjiti. Da biste sigurno pripremili dječju formulu, prvo morate očistiti i sterilizirati opremu za hranjenje i pripremu.

    Prevencija e coli

    1. Održavajte mjesto za kuhanje i kuhinjski pribor čistim i pravilno odlažite smeće.
    2. Održavajte ruke čistima i često podrezujte nokte.
    3. Operite ruke sapunom i vodom prije jela ili rukovanja hranom. Također biste trebali oprati ruke nakon korištenja toaleta ili promjene pelena.
    4. Vodu za piće treba koristiti za piće, a najbolje je prokuhati prije pijenja.
    5. Svježu hranu treba kupovati na pouzdanom mjestu, a ne pod pokroviteljstvom neovlaštenih sokolara.
    6. Izbjegavajte hranu visokog rizika, poput mlijeka koje nije obrađeno sterilizacijom na niskim temperaturama, kao i nedovoljno kuhane odreske hamburgera, mljevenu govedinu i drugu mesnu hranu.
    7. Prilikom kuhanja hrane nosite čistu, perivu pregaču i šešir.
    8. Hranu treba temeljito oprati.
    9. Kvarljiva hrana treba biti pokrivena poklopcem i uskladištena u frižideru.
    10. Sirovom i kuhanom hranom, posebno govedinom i goveđim iznutricama, treba rukovati i skladištiti odvojeno (kuhanu hranu čuvajte na vrhu frižidera, a sirovu hranu na dnu) kako biste izbjegli unakrsnu kontaminaciju.
    11. Frižider treba redovno čistiti i topiti, a temperaturu držati na 4 stepena Celzijusa ili ispod.
    12. Ako se svi dijelovi hrane zagriju na 75 stepeni Celzijusa, E. coli O157: H7 se može ukloniti; stoga, mljeveno goveđe meso i odrezak od hamburgera treba temeljito kuhati na 75 stepeni Celzijusa 2 do 3 minute, dok kuhano meso potpuno ne postane smeđe, a umak postane bistar.
    13. Ne rukujte kuhanom hranom golim rukama; ako je potrebno, nosite rukavice.
    14. Hranu treba konzumirati što je prije moguće nakon kuhanja.
    15. Ako je potrebno zadržati ostatke kuhane hrane, treba je ohladiti i konzumirati što je prije moguće. Dobro zagrijte prije jela. Pokvarenu hranu treba baciti.

    Test na e coli

    Metoda fermentacije

    Ova metoda je uglavnom za uzgoj E. coli na podlozi na 44.5 ° C, koja sadrži fluorescentni supstrat i zahtijeva 24 sata uzgoja. Glavni koraci uključuju fermentaciju, kulturu odvajanja, sekundarnu fermentaciju, posmatranje pod mikroskopom itd.

    Masena spektrometrija s ionizacijom pomoću laserske desorpcije pomoću matrice

    Metoda masene spektrometrije s ionizacijom s laserskom desorpcijom uz pomoć matrice (MAL-DITOF-MS) metoda je pomiješati uzorak koji se mjeri s otopinom matrice u određenom omjeru i upotrijebiti pulsirajuće lasersko zračenje kako bi se pobudila matrica polimer za stvaranje molekularnih iona i polimerizacija molekularnih iona Tijelo se ubrzava i detektira u masenom spektrometru za vrijeme leta. Kao rezultat toga, izmjereni polimer se odvaja prema maseni broj, obrađuju se u obliku masenog spektra, te analiziraju i uspoređuju softverom za skrining i određivanje spektra specifičnosti (otisaka prstiju) kako bi se postigla diferencijacija i identifikacija ciljnih vrsta ili sojeva mikroorganizama.

    Metoda imunomagnetnih perli

    Glavni princip tehnologije odvajanja je korištenje magnetnih perli kao nosača i antitijela za kombiniranje antitijela i magnetskih perli, a zatim dovršenje mehaničkog kretanja pomoću magnetne tehnologije za odvajanje E. coli. U usporedbi s drugim načinima odvajanja bakterija, ova metoda ima određene prednosti. Ova tehnologija može poboljšati uspjeh otkrivanja patogenog Vibriona u uzorcima, a tehnologija imunomagnetnih zrnaca može liječiti različite mikroorganizme u različitim vrstama bakterija. , I u velikoj mjeri poboljšavaju efikasnost otkrivanja.

    Automatsko testiranje instrumenata

    Glavna upotreba imunološkog automatiziranog analizatora, ova tehnologija je proizvedena i korištena 1970. S razvojem i napretkom znanosti i tehnologije, tehnologija automatskog otkrivanja instrumenata se široko koristi, a vrlo je zgodna za rad, može uštedjeti mnogo vremena , njegov stupanj smetnji je mali, može uštedjeti radnu snagu i materijal, a može i poboljšati preciznost detekcije. U trenutnom razvojnom procesu, primjena automatskog imunološkog sistema enzima je vrlo opsežna.

    Bioluminiscencija ATP -a

    U razvojnom procesu posljednjih godina, tehnologija bioluminiscencije ima široku primjenu i relativno je brza tehnologija za otkrivanje mikroorganizama. U aktivnim stanicama, ATP je njegov zajednički energetski metabolički proizvod, koji može osigurati energiju potrebnu za fiziološke aktivnosti stanica. I ova tehnologija može održati određeni sadržaj unutar određenog raspona u živom tijelu. Tehnologija detekcije Escherichia coli u hrani može usvojiti metodu fluorescentne fotometrije, jer je razlog što organizam emitira svjetlost uloga luciferaze koja proizvodi efekt svjetlosne emisije. Tvar dolazi od krijesnica u Sjevernoj Americi i može katalizirati oksidaciju fluoresceina. Međutim, tvar je nestabilna i može brzo razgraditi fluorescenciju. Osim toga, proces prikupljanja rezultata tehnologije otkrivanja je vrlo brz, a uređaj je jednostavan za nošenje, vrlo pogodan za detekciju na licu mjesta.

    Recent Posts

    © autorska prava 2020 - BALLYA rezervirano.
    kovertatelefonmap-marker LinkedIn facebook Pinterest youtube RSS cvrkut Instagram facebook-prazno rss-prazno linkedin-white Pinterest youtube cvrkut Instagram