BALLYA BLOG - Članci od Sigurnost hrane uzvodni i nizvodni lanac opskrbe
ballya_logo
imunohistokemija

Šta je imunohistokemijski test?

Postavljeno  Septembar 26, 2020, Uređeno od Jason, Kategorija  
Ballya-antibiotski test
ballya-antibiotski test

Brza navigacija

imunohistokemija
imunohistokemija

Šta je imunohistohemija?

1. definicija

Immunohistochemistry (ihc), takođe poznat kao imunocitokemija, odnosi se na novu tehnologiju koja kvalitativnim, lokaliziranim i kvantitativnim određivanjem odgovarajućih antigeni provodi se reakcijom antigen-antitijelo i histokemijskom reakcijom u boji u tkivnim stanicama specifično antitela označen hromogenim reagensom.

Pametno kombinira specifičnost imunološkog odgovora i vidljivost histokemije. Uz pomoć snimanja i uvećanja mikroskopa (uključujući fluorescentne mikroskope i elektronske mikroskope), može otkriti različite antigene tvari (poput protein, polipeptidi, enzimi, hormoni, patogeni i receptori itd.). Immunohistochemistry tehnologija se posljednjih godina brzo razvijala. Pedesetih godina prošlog stoljeća bilo je ograničeno na tehnologiju imunofluorescencije. Od tada se postupno razvijala visoko osjetljiva i praktičnija tehnologija imunoenzima.

2. Obrazloženje

Vezivanje između antitelo i antigen ima visok stepen specifičnosti, i imunohistokemija koristi ovaj princip. Prvo, određena kemijska tvar u tkivu ili ćeliji se ekstrahira i koristi kao antigen ili hapten. Nakon imunizacije životinje, dobiva se specifično antitijelo, a zatim se antitijelo koristi za detekciju iste antigenske tvari u tkivu ili ćeliji. Budući da je kompleks antigena i antitijela bezbojan, potrebno je histokemijski pokazati mjesto vezivanja antigena i antitijela kako bi se postigla kvalitativna, lokalizirana ili kvantitativna istraživanja nepoznatih antigena u tkivima ili stanicama.

3. karakteristike

A. Jaka specifičnost

Osnovni princip imunologije određuje da je vezivanje između antigena i antitijela visoko specifično. Stoga, imunohistokemija je teoretski specifičan prikaz antigeni u ćelijama tkiva. Na primjer, keratin pokazuje epitelne komponente, a LCA limfocite. sastojak. Samo kada postoje unakrsni antigeni u stanicama tkiva, doći će do unakrsnih reakcija.

B. Visoka osjetljivost

U početnoj fazi primjene imunohistokemija, zbog tehničkih ograničenja, bile su dostupne samo direktne metode, indirektne metode i druge manje osjetljive tehnologije. U to vrijeme, antitijelo se moglo razrijediti samo nekoliko puta ili desetine puta; sada pojava ABC metode ili SP -a omogućava da se antitijela razrijede hiljadama, desetinama hiljada, pa čak i stotinama miliona puta, a antitijelo se i dalje može vezati za antigene u stanicama tkiva. Ova visoko osjetljiva reakcija antitijelo-antigen čini imunohistokemijske metode sve prikladnijim za rutinsku patološku dijagnozu.

C. Precizno pozicioniranje, kombinacija oblika i funkcije

Ova tehnologija može precizno locirati antigene u tkivima i stanicama reakcijom antigen-antitijelo i reakcijom u boji, tako da se razlikuju antigeni mogu se postaviti i promatrati u istom tkivu ili ćeliji u isto vrijeme. Tako se može proučiti kombinacija morfologije i funkcije, što je vrlo smisleno za dubinsko istraživanje u području patologije.

4. klasifikacija

  • Prema vrstama tvari za označavanje, kao što su fluorescentne boje, radioizotopi, enzimi (uglavnom peroksidaza hrena i alkalna fosfataza), feritin, koloidno zlato itd., Može se podijeliti na imunofluorescencija, radioimunski test, metoda označavanja imunoenzima i metoda imunološkog zlata i srebra.
  • Prema koracima bojenja, može se podijeliti na direktnu metodu (koja se naziva i jednofazna metoda) i indirektnu metodu (dvostepena, trostepena ili višestepena metoda). U poređenju sa direktnom metodom, osjetljivost indirektne metode je znatno poboljšana.
  • Prema metodi vezivanja, može se podijeliti na vezivanje antigen-antitijelo, poput metode peroksidaze-antiperoksidaze (PAP); afinitetna veza, kao što je metoda kompleksa avidin-biotin-peroksidaze (ABC), metoda lančane avidin-peroksidazne veze (SP), među kojima je metoda SP češće korištena; polimerne veze, kao što je metoda u dva koraka spremna za upotrebu, koja je posebno pogodna za visok sadržaj endogenog biotina u detekciji tkivnog antigena.

5. funkcija

A. primjerak

U eksperimentima se uglavnom koriste uzorci tkiva i uzorci ćelija. Prvi uključuje parafinsko umetanje preseci (patološki delovi i čips tkiva) i zamrznuti delovi, a poslednji uključuje otiske tkiva, ćelijske pločice i ćelijske mrlje.

Među njima, parafinska sekcija je najčešće korištena i najosnovnija metoda za izradu uzoraka tkiva. Dobro je očuvan za morfologiju tkiva i može se koristiti za serijsko presijecanje, što pogoduje raznim kontrolnim opservacijama bojenja; takođe se može dugo arhivirati za retrospektivna istraživanja; To će imati određeni utjecaj na izloženost antigenu, ali pronalaženje antigena može se izvesti, što je preferirana metoda pripreme uzorka tkiva u imunohistokemija.

B. antitelo

U imunohistokemijskim eksperimentima najčešće se koriste antitijela monoklonalna antitijela i poliklonska antitelo. Monoklonska antitijela su antitijela koja luči klon B limfocita i pripravljena su imunizacijom životinja tehnologijom hibridoma stanične fuzije. Poliklonalno antitijelo je imunološki serum dobiven iz životinjske krvi nakon direktne imunizacije pročišćenog antigena. To je mješavina antitijela koja proizvode više klonova B limfocita.

C. Uobičajene metode bojenja

Prema različitim oznakama dijeli se na imunofluorescencija metoda, metoda označavanja imunoenzima i metoda histokemije afiniteta. Ovo posljednje je metoda detekcije zasnovana na tvari s visokim afinitetom za određenu komponentu tkiva. Ova metoda je osjetljivija i olakšava lokalizaciju antigena u tragovima (antitijela) na staničnom ili podstaničnom nivou. Među njima se najčešće koristi metoda bojenja biotin-avidinom.

Za šta se koristi imunohistokemija?

Imunohistohemijsko bojenje ima vrlo široku ulogu u biomedicinskim istraživanjima i uključuje mnoga istraživačka područja. Kako god, imunohistokemija tehnologija takođe ima svoja ograničenja. Na primjer, ispitivana tvar u stanicama tkiva mora biti antigena i potrebna je određena koncentracija. Ne može se utvrditi da je otkrivena imunoreaktivna bjelančevina ćelija nanovo sintetizirana ili transportirana kroz ćelije.

Stoga ove karakteristike treba u potpunosti uzeti u obzir pri projektiranju eksperimenta. Ako eksperiment treba dokazati kakvu ćeliju molekularno sintetizira poznati protein in situ hibridizacija tehnologija se preferira. Kako bi se početnici usmjerili na upotrebu imunohistokemija tehnologiju razumno i vješto u eksperimentalnom dizajnu, osnovni principi njezine primjene ukratko su opisani na sljedeći način:

  1. Odredite tip ćelije i morfologiju. Neki proteini u stanicama tkiva imaju specifičnost za tkivo, poput glijalnog fibrilarnog kiselog proteina (GFAP) koji postoji samo u astrocitima. Neurofilament (Neurofilament, NF) postoji samo u živčanim stanicama. Ovi proteini specifični za tkivo obično se nazivaju obilježenim proteinima (Proteiniliaker). Tip ćelije može se odrediti specifičnim antitijelom obilježenog proteina.

    Neke ćelije (poput Langerhansovih stanica i melanocita u epidermisu) nije lako identificirati pod svjetlosnim mikroskopom. Izvođenjem imunohistohemijsko bojenje na specifičnim proteinima u citoplazmi, obris takvih ćelija može se jasno prikazati. Ovaj je učinak posebno potreban u istraživanjima neuroznanosti i kliničkoj patopatologiji tumora.
  2. Identificirajte izvor ćelijskih proizvoda. Pogledajte određene ćelijske proizvode kao antigene, pripremite odgovarajuća antitijela i izvedite imunohistohemijsko bojenje na stanicama tkiva radi utvrđivanja izvora ćelijskih proizvoda. Na primjer, većina hormona koje proizvode endokrine ćelije mogu se identificirati imunohistokemijskim tehnikama bojenja. Na osnovu toga se može proučiti sekretorna funkcija ćelija i klasifikacija endokrinih tumora, a tumori koji luče ektopične hormone mogu se otkriti kako bi se razumio stepen ćelijske diferencijacije.
  3. Odredite stepen ćelijske diferencijacije. Različite ćelije istog tipa izražavaju različite proteine ​​markere, a stupanj diferencijacije stanica može se odrediti prema identifikaciji ovih različitih proteina. Na primjer, zaštitni znak neuroepitelnih ćelija je nestin, koji eksprimira vimentin kada se diferencira u radijalne glijalne ćelije. U fazi neurogeneze, on eksprimira Ⅲβ kada se diferencira u neuroblaste, neuronski tubulin (TUJl) i neurofilament (NF) kada se neuroblasti diferenciraju u zrele neurone.
  4. Pratite snop živčanih vlakana i njegovo projekcijsko područje. Imunohistokemijska metoda često se kombinira s aksoplazmatskom metodom praćenja transporta radi proučavanja veza između neurona. Metoda aksoplazmatskog praćenja transporta koristi određene tvari koje mogu apsorbirati živčani završeci. Upotrijebite histokemijsku metodu za prikaz obrisa neurona. Uobičajeno korišteni biljezi uključuju peroksidazu od hrena i fluorescentno zlato.

    Npr. Cilj je promatrati projekciju živčanih vlakana iz jezgre u perifernom nervnom sistemu ili centralnom nervnom sistemu. Prvo se tragač ubrizgava u kraj živčanog vlakna životinje kako bi omogućio životinji da preživi neko vrijeme. Materijal se uzima sa očekivanog mjesta projekcije nervnih vlakana, a tragač se nalazi histohemijskom metodom, a zatim se primjenjuje imunohistokemijska metoda za utvrđivanje njegove prirode.
  5. Primjena u kliničkoj patologiji. Kao što je identificiranje prirode lezije, otkrivanje malih lezija, istraživanje podrijetla ili različitog fenotipa tumora, određivanje stadija tumora, usmjeravanje liječenja i prognoze, pomoć u dijagnostici i klasifikaciji bolesti i traženje uzroka infekcije, itd.

Imunohistohemijski protokol

1. Metoda imunofluorescencije

To je najranije uspostavljena imunohistokemijska tehnika. Koristi princip specifičnog vezivanja antigen-antitijelo. Prvo, poznato antitijelo je označeno fluoresceinom, koje se koristi kao sonda za provjeru odgovarajućeg antigena u stanici ili tkivu. Ako ga promatrate pod fluorescentnim mikroskopom, emitirat će fluorescenciju određene valne duljine kada fluorescein u kompleksu antigen-antitijelo zrači pobudnom svjetlošću. Zatim lokalizacija određene antigen u tkivu se može odrediti i izvršiti kvantitativna analiza. Zbog svoje snažne specifičnosti, visoke osjetljivosti, brzine i jednostavnosti, tehnologija imunofluorescencije široko se koristi u kliničkoj patološkoj dijagnostici i testiranju.

aplikacija

  • Primjena u autoimunim bolestima
  • Brza identifikacija bakterija i virusa
  • Detekcija i istraživanje parazita

2. Metoda označavanja imunoenzima

Metoda označavanja imunoenzima je tehnika razvijena 1960 -ih godina nakon koje je uslijedila imunofluorescencija. Osnovni princip je da se prvo koriste enzimski obilježena antitijela za interakciju s tkivima ili stanicama, a zatim dodaju enzimske podloge za stvaranje obojenih netopljivih proizvoda ili čestica s određenom gustoćom elektrona.

Kroz svjetlosnu ili elektronsku mikroskopiju, različite vrste staničnih površina i antigenska komponenta u stanicama podliježu istraživanju lokalizacije. Tehnologija označavanja imunoenzima je najčešće korištena tehnologija. Glavne prednosti ove metode u usporedbi s tehnologijom imunofluorescencije su: točno pozicioniranje, dobar kontrast, dugotrajno očuvanje obojenih uzoraka i pogodno za istraživanja optičke i elektronske mikroskopije.

Metoda označavanja imunoenzima razvila se vrlo brzo i izvedeni su različiti načini označavanja. Stalnim usavršavanjem i inovacijama metode, njena specifičnost i osjetljivost znatno su poboljšani, pogodniji za upotrebu. ABC-ova metoda, SP metoda u tri koraka, sistemi za otkrivanje metoda u dva koraka spremni za upotrebu široko se koriste u patološkoj dijagnostici.

aplikacija

  • Poboljšajte tačnost patološke dijagnoze
  • Klinička primjena proteina onkogena
  • Vrednovanje stepena proliferacije tumorskih ćelija
  • Otkriće mikrometastaza
  • Značaj u postavljanju tumora
  • Vodič u liječenju tumora
  • Pomozite u dijagnostici imunološke bolesti i zaraznih bolesti

3. Tehnologija imunološkog koloidnog zlata

Imunološka tehnologija koloidnog zlata koristi posebne metalne čestice kao što je koloidno zlato kao marker. Koloidno zlato odnosi se na hidrosol zlata, koji može brzo i stabilno adsorbirati proteine ​​bez očitog utjecaja na biološku aktivnost protein. Stoga se koristi koloidno zlato primarno antitelo, sekundarno antitelo, ili drugih molekula koji se specifično vežu imunoglobulini (kao što je stafilokokni protein A) kao sonde, mogu kvalitativno locirati, pa čak i kvantificirati antigene u tkivima ili stanicama.

Budući da koloidno zlato ima čestice različitih veličina i gustoća elektrona koloidnog zlata je velika, tehnika imuno-koloidnog zlata posebno je pogodna za proučavanje lokalizacije imunoelektronske mikroskopije s jednom ili više oznaka. Zbog boje koloidnog zlata od svijetlocrvene do tamnocrvene, pogodno je i za promatranje svjetlosnim mikroskopom. Kao što je primjena imunozlata sa srebrom i zakon srebra pogodniji je za posmatranje svjetlosnim mikroskopom.

zaključak

Zbog svojih jedinstvenih karakteristika, imunohistokemija tehnologija je postala tehnika koju često bira većina znanstvenika u pozicioniranju ćelija tkiva, kvalitativnim i kvantitativnim istraživanjima. Stoga, s ažuriranjem alata za naučna istraživanja, naučnici moraju imati opsežnije i dublje razumijevanje imunohistokemija, optimizirati dizajn tehničkih ruta i promovirati daljnji razvoj imunohistokemija Tehnologija.

Želite li saznati više o antigenima i antitijelima? Čitajte o FC postolje informacije.

reference

Recent Posts

SIGURNOST HRANETEST MIKOTOKSINAISPITIVANJE PESTICIDATEST MEDAISPITIVANJE MLIJEKATEST JAJARUKOVAC ZA TEČNOST
Ponosno dizajnirao BALLYA
LinkedIn facebook Pinterest youtube RSS cvrkut Instagram facebook-prazno rss-prazno linkedin-white Pinterest youtube cvrkut Instagram